膽固醇結(jié)石與肝臟SRBI基因表達關(guān)系的探討

陳玉杰 張明威 陳國斌

膽結(jié)石是結(jié)石病中的常見疾病，大多指膽囊結(jié)石，主要成分為膽固醇，屬于膽固醇類結(jié)石。結(jié)石形成機制受遺傳因素和環(huán)境因素多方面影響，其中遺傳因素已經(jīng)受到越來越多的重視。有研究表明，SRBI基因在結(jié)石形成過程中扮演重要角色[1]。為初步探討SRBI基因過表達與膽囊結(jié)石形成關(guān)系，我們對20例膽囊結(jié)石患者各項結(jié)石指標展開檢測，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 臨床資料與方法

1.1 一般資料

選取2008年入住我院接受治療的膽囊結(jié)石患者30例。其中，男18例，女12例；年齡47～54歲；病程1.3～3.1年。另選取30例健康志愿者作為對照組。兩組在年齡、性別、病程等方面均無顯著統(tǒng)計學差異。

1.2 方法

1.2.1 膽固醇各指標測定

將結(jié)石用生理鹽水沖洗干凈，于37℃溫箱干燥過夜，然后用二甲亞砜（1m g／m l）溶解。總膽固醇試劑盒方法（中山生物試劑開發(fā)有限公司）測定結(jié)石中膽固醇含量；血脂試劑盒方法（上?？迫A試劑有限公司）測定血脂含量、血清總膽固醇、HDL膽固醇；總膽汁酸試劑盒方法（英國Randox公司）測定總膽汁酸；2：l比例的甲醇、氯仿抽提膽汁，測定磷脂和膽固醇含量；膽汁膽固醇飽和指數(shù)根據(jù)Carry表計算。

1.2.2 基因表達量測定

（1）總m RNA抽提：肝臟組織總RNA采用TRIZOL試劑（美國Invitrogen公司）抽提，紫外分光光度儀比色，測定280nm和260nm光密度比值，取lg總RNA于l％瓊脂糖凝膠中電泳測定其完整性。

（2）cDNA合成：用DEPC-H2O將RNA稀釋至1：5，采用反轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)試劑盒（Promega公司Cat．No．3500）合成cDNA，反應體系中包括AMV逆轉(zhuǎn)錄酶20U和總RNA 1μg。

（3）3RNA含量測定：采用實時定量熒光PCR擴增方法，引物采用Primer Prem ier 5軟件設(shè)計。反應體系：上清液2μL、Tag酶1μL、反應液2μL，初始溫度設(shè)為94℃，熒光信號設(shè)為Fam熒光素。加入引物后啟動反應，93℃熱變性10m in，cDNA解鏈，然后94℃30s，53℃30s退火，72℃5m inDNA鏈延伸。共做40輪循環(huán)擴增反應。反應結(jié)束后將產(chǎn)物電泳觀察產(chǎn)物條帶，應用熔解曲線確定PCR產(chǎn)物特異性，采用親環(huán)蛋白A作為內(nèi)參照，計算基因相對表達量。1996年，Acton等人首次分離到B1型清道夫受體（SRBI），后證實人類

2 結(jié)果

表1 膽固醇各項指標測定結(jié)果

膽固醇各指標值見表1，試驗組患者血清H DL和膽汁總脂顯著低于對照組（P＜0.0 5），其它各項測量指標值則均顯著高于對照組（P＜0.05），從分子層面說明膽結(jié)石患者和健康者膽固醇指標有差異；總DNA含量測定結(jié)果如圖1所示，試驗組總m RNA含量顯著高于對照組（P＜0.05），從基因?qū)用嫣崾灸懡Y(jié)石致病因素與遺傳有關(guān)系。

圖1 總mRNA含量測定結(jié)果

3 討論

膽汁的主要成分由肝臟代謝產(chǎn)生，其膽固醇主要來源于肝臟從血漿中攝取的脂蛋白膽固醇，尤其是高密度脂蛋白（HDL）-膽固醇，已經(jīng)有動物實驗證實，血漿中HDL來源的膽固醇優(yōu)先分泌到膽汁中。膽汁膽固醇過飽和是膽石病生理病理早期過程中出現(xiàn)的異常，是膽石病發(fā)生的必要條件。1995年小鼠致石基因—Lith 1基因被發(fā)現(xiàn)，從此膽結(jié)石的遺傳因素探索開始進入更多學者的研究范圍。也存在類似受體，其主要分布在肝臟、腎上腺、睪丸等組織[2]。

肝臟過度表達SRBI時，血漿HDL膽固醇含量降低，膽囊中膽固醇含量會增加，增大結(jié)石概率；反之，如果SRBI表達不足或者不表達，肝臟攝取HDL能力降低，血漿中HDL含量就會相應增加[3]。我們基于上述理論，對膽囊結(jié)石患者展開研究，試驗結(jié)果很好地證實了上述理論。

雖然其詳細的病理生理機制還有待于進一步研究，但目前的研究至少可以說明，SRBI基因在膽囊結(jié)石過程中扮演著重要角色。雖然現(xiàn)階段開展基因治療還不太現(xiàn)實，但開展結(jié)石和相關(guān)基因的研究，對于結(jié)石病的早期預防以及遺傳的分析，還是很有臨床意義的。

參考資料

[1]韓天權(quán).膽石病人腸肝循環(huán)途徑脂質(zhì)代謝異常的分子生物學研究進展[J].中華肝膽外科雜志,2008,14（4）：219-220．

[2]Wittenburg H,Lyons MA,et a1.FXR and ABCG5／ABCG8 as determinants of cholesterol gallstone formation from quantitative trait locus mapping in mice[J].Gastroenterology,2003,125（3）：868-881．

[3]王蕾.肝臟肝X受體α和雌激素受體α表達與女性膽石病關(guān)系的研究[J].診斷學理論與實踐,2006,5（4）：308-311.