對(duì)乙型肝炎患者檢測(cè)乙肝表面抗原大蛋白和前S1抗原的區(qū)別和臨床意義

王 宇，楊延敏

(北京豐臺(tái)醫(yī)院 檢驗(yàn)科，北京100071)

近年來(lái)隨著對(duì)乙肝表面抗原大蛋白中前S區(qū)抗原在乙肝發(fā)病機(jī)制、感染與復(fù)制等方面研究的深入，研究者們逐漸認(rèn)識(shí)到乙肝表面抗原前S區(qū)具有非常重要的臨床意義[1-3]。研究人員發(fā)現(xiàn)，乙肝表面抗原大蛋白(Hepatitis B Virus Large Surface Protein,LHBs)在空間上具有兩種不同的跨膜構(gòu)象。作為乙肝病毒的包膜蛋白，其內(nèi)側(cè)可以和HBV核殼體膜結(jié)合，外側(cè)可與易感細(xì)胞受體結(jié)合，是HBV顆粒成熟包裝的關(guān)鍵[1]。由于單獨(dú)的前S區(qū)抗原作為乙肝表面抗原大蛋白的一部分，無(wú)法模擬其復(fù)雜的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，通過此種方法制作的單克隆抗體只具有線性表位但是失去了構(gòu)象型表位。這樣針對(duì)低級(jí)結(jié)構(gòu)抗原制作出的單克隆抗體在實(shí)際應(yīng)用中可能導(dǎo)致漏檢。本文使用北京熱景生物技術(shù)有限公司研制的LHBs酶免定量試劑盒研究乙肝表面抗原大蛋白檢測(cè)用于臨床的意義，該試劑盒包被針對(duì)構(gòu)象型前S區(qū)的高親和力、高特異性的單抗來(lái)檢測(cè)LHBs。

1 材料和方法

1.1 材 料

血清標(biāo)本均來(lái)自2008年3月～2009年5月北京豐臺(tái)醫(yī)院門診或住院患者，共計(jì)156例。其中，男85例，女71例。年齡16～79歲，平均47.5歲。所有標(biāo)本均于-20℃保存以備用。Roche公司生產(chǎn)LightCycler自動(dòng)熒光PCR儀；酶標(biāo)儀(DENLEY DRAGON MK3)；美國(guó)雅培公司AxSYM化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定系統(tǒng)。

1.2 方 法

1.2.1 乙肝表面抗原大蛋白以及乙肝前S1檢測(cè)：采用酶聯(lián)免疫方法，乙肝表面抗原大蛋白酶免定量試劑由北京熱景生物技術(shù)有限公司提供；乙肝前S1試劑購(gòu)自上海阿爾法生物技術(shù)有限公司。

1.2.2 乙肝兩對(duì)半檢測(cè)：采用化學(xué)發(fā)光方法檢測(cè)，為AxSYM定量測(cè)定配套試劑。

1.2.3 HBV DNA檢測(cè)：采用熒光定量方法，檢測(cè)試劑盒購(gòu)自深圳匹基生物工程有限公司，靈敏度為5.0×102copies/mL，取≥1×103copies/mL為陽(yáng)性，陰性時(shí)取實(shí)測(cè)拷貝值，低于靈敏度以下作零拷貝處理。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 不同乙肝兩對(duì)半模式患者血清LHBs、HBV DNA以及乙肝前S1檢出情況比較

相同乙肝兩對(duì)半模式組中，LHBs的陽(yáng)性率與HBV DNA的陽(yáng)性率比較差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)；在所有HBsAg陽(yáng)性患者中LHBs的陽(yáng)性率明顯高于乙肝前S1的陽(yáng)性率，差異均有顯著性意義(P<0.05)；不同的乙肝兩對(duì)半模式組中，LHBs的陽(yáng)性率經(jīng)過卡方檢驗(yàn)組間差異均有顯著性意義(P<0.05)，見表1。

表1 不同乙肝模式患者中LHBs、HBV DNA與乙肝前S1檢測(cè)比較Tab 1 The comparison of LHBs,HBVDNA and HBV preS1 in different HBV M patients (n)

1)1=HbsAg; 2=HbsAb; 3=HBeAg; 4=HBeAb; 5=HBcAb

2.2 HBeAg陽(yáng)性和陰性患者中LHBs、HBV DNA以及乙肝前S1的檢出情況比較

在HBeAg陽(yáng)性中，LHBs和HBV DNA的陽(yáng)性率明顯高于乙肝前S1的陽(yáng)性率，兩者比較差異有顯著性意義(P<0.05)，見表2。

表2 HBeAg陽(yáng)性和陰性中HBV DNA、LHBs以及乙肝前S1的檢測(cè)比較Tab2 The comparison of LHBs ,HBVDNA and HBV preS1 in HBeAg nagetive and postive patients n (%)

1)與乙肝前S1陽(yáng)性率相比，P<0.05

3 討 論

目前，醫(yī)學(xué)界認(rèn)為外周血HBV-DNA是HBV最直接和可靠的指標(biāo)，可以用來(lái)判定患者和攜帶者有無(wú)傳染性。研究發(fā)現(xiàn)，亞病毒顆粒在HBV感染過程中，能明顯增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)的病毒復(fù)制和基因表達(dá)。而這種增強(qiáng)作用是由pre-S蛋白的反式激活作用所觸發(fā)的。此外，還有研究發(fā)現(xiàn)在HBV形成包膜的過程中需要大蛋白(HBsAg、pre-S1和pre-S2蛋白)和中蛋白的參與。Ngee-Chis Foot[5]闡明LHBs是導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷、死亡、纖維化病變的主要原因。因此，檢測(cè)LHBs對(duì)于反應(yīng)病毒的持續(xù)復(fù)制、預(yù)后有有重要的臨床意義。酶聯(lián)免疫法(ELISA)一直是臨床上用于乙肝病毒感染的血清檢測(cè)手段。傳統(tǒng)認(rèn)為乙肝兩對(duì)半中，HBeAg陽(yáng)性表明HBV病毒復(fù)制活躍、傳染性較強(qiáng)[5]。本研究顯示，在40例HBeAg陽(yáng)性患者中LHBs陽(yáng)性率(95.00%)與HBV DNA的陽(yáng)性率(92.50%)一致，經(jīng)過卡方檢驗(yàn)差異無(wú)顯著性意義；該組中乙肝前S1的陽(yáng)性率(57.50%)明顯低于LHBs和HBV DNA的陽(yáng)性率。結(jié)果表明，LHBs與HBV DNA的檢出具有良好的一致性，能夠準(zhǔn)確地反映出乙肝患者體內(nèi)病毒的復(fù)制情況。同時(shí)，結(jié)果還表明LHBs的檢出由于使用針對(duì)構(gòu)象型前S區(qū)的單克隆抗體[6]，因而其檢出率明顯高于目前臨床上使用乙肝前S1指標(biāo)。過去臨床上認(rèn)為乙肝患者出現(xiàn)HBeAg陰轉(zhuǎn)是乙肝病毒復(fù)制減弱、傳染性降低和預(yù)后良好的象征[7]。但是，本研究顯示在116例HBeAg陰性患者中HBV DNA與LHBs的陽(yáng)性率分別為45.69%和46.55%。很多研究顯示，可能是免疫清除不全或是乙肝病毒基因前C區(qū)變異所致，多為慢性乙肝，而且此類患者發(fā)生肝硬化、肝癌的風(fēng)險(xiǎn)較大[8]。

本組結(jié)果顯示，慢性乙肝患者血清使用酶聯(lián)免疫定量方法檢測(cè)LHBs與HBV DNA的檢測(cè)有良好的一致性，可部分作為HBV-DNA替代和補(bǔ)充檢測(cè)指標(biāo)。同時(shí)可以反映HBV復(fù)制活躍程度，做為HBV 感染、復(fù)制和乙肝患者診斷、治療和預(yù)后的重要標(biāo)志物，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

[1] BarrerA,GueraB,NotvallL,et al. Pre-S Domain Mapping of the Hepatitis B Virus pres1domain involved inreceptor recognition[J].J Virol,2005,79:9786-9798.

[2] Bruss V.Envelopment of the hepatitis B virus nucleocapsid[J].Virus Res,2004,106:199-209.

[3] Lambert C,Mann S,Prange R.Assessment of determinants ffecting the dual topology of hepadnaviral large envelope proteins[J].J G Virol，2004,85:1221-1225.

[4] 謝志賢,譚愛國(guó),何美懿,等.血清中乙型肝炎5 項(xiàng)標(biāo)志表現(xiàn)模式與乙型肝炎病毒DNA 含量的關(guān)系[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2002,12 (2) ：81-83.

[5] Ngee-Chis F,Byung YA,Ma Xb.Celluar vacuolization and apoptosis induced by heptatitis B virus large sueface protein[J].Hepatology,2002,36:6-10.

[6] 孫穎.乙肝病毒外膜大蛋白檢測(cè)對(duì)于判定HBV DNA復(fù)制的意義[J].世界華人消化雜志,2006,14(3):354-357.

[7] 馬蘭.慢性乙肝患者血清HBV DNA與e抗原含量的關(guān)系[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床雜志,2010,7(1)：55-57.

[8] Reifenberg K,Hildt E,Brussv,et al.IFNgamma expression inhibitsLHBs storage disease and ground glass hepatocyte appearance,but exacerbates inflammation and apop tosis in HBV surface p rotein-accumulating transgenic livers [J].Liver Int,2006,26:986-993.