生長抑素受體亞型SSTR2、SSTR5在人原發(fā)性肝癌組織中的表達(dá)*1

王慶才 宮 健 徐曉麗 胡月華 張 珺 侯 剛 丁惠國

(1.泰山醫(yī)學(xué)院附屬泰山醫(yī)院消化內(nèi)科，山東 泰安 271000；2.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院消化二科，北京 100069)

應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)人原發(fā)性肝癌組織中生長抑素受體(somatostatin receptor,SSTR)亞型SSTR2 、SSTR5的表達(dá)情況，從形態(tài)學(xué)上觀察該兩種受體的表達(dá)部位，為生長抑素類似物(somatostatin analogue，SSTA)治療原發(fā)性肝癌提供一定的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

25例肝癌組織來源于住院行肝臟腫瘤切除術(shù)的原發(fā)性肝癌患者，其中男性23例，女性2例；年齡24～71歲，平均年齡51歲。24例為慢性乙肝病毒感染，1例為慢性丙肝病毒感染。同時(shí)取其中14例癌旁肝硬化組織。將新鮮組織投入10%中性福爾馬林固定液中固定，梯度乙醇溶液脫水，二甲苯溶液透明，石蠟浸蠟和包埋，然后進(jìn)行切片和貼片。

1.2 免疫組織化學(xué)染色

將組織切片應(yīng)用二甲苯脫蠟、梯度乙醇溶液脫水，將組織切片浸入檸檬酸鹽緩沖液用微波進(jìn)行抗原修復(fù)，加入過氧化酶阻斷液，再用非免疫動(dòng)物血清進(jìn)行孵育，然后每張切片分別加入SSTR2抗體(H-50 sc-25676，SANTA CRUZ公司)、SSTR5抗體(Catalog Number:AB5681，CHEMICON公司)室溫下孵育(抗體稀釋度1︰200)，再加入生物素標(biāo)記的第二抗體(UltraSensitiveTM S-P超敏試劑盒 KIT-9710，福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司)室溫下孵育，然后加入DAB溶液進(jìn)行顯色并在顯微鏡下觀察，最后用蘇木素溶液進(jìn)行復(fù)染、梯度乙醇溶液脫水干燥、二甲苯透明、中性樹膠封固。同時(shí)分別用PBS液和與SSTR抗體來源的同一動(dòng)物免疫前血清來替代SSTR抗體作為陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，用人胰腺組織的石蠟切片進(jìn)行染色作為陽性對(duì)照實(shí)驗(yàn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用χ2檢驗(yàn)分析肝癌的分化程度、TNM分期、血清AFP水平、乙肝病毒水平、肝功能Child-pugh分級(jí)等與受體表達(dá)率的關(guān)系，用SPSS for Windows 11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，以P≤0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 肝癌組織和癌旁肝硬化組織SSTR2、SSTR5免疫組化結(jié)果

25例肝癌組織，其中僅SSTR2染色陽性者6例，占24%；僅SSTR5染色陽性者4例，占16%；SSTR2、SSTR5均染色陽性者8例，占32%；SSTR2、SSTR5均染色陰性者7例，占28%，即至少表達(dá)一種受體者18例，占72%。SSTR陽性染色主要位于肝癌細(xì)胞胞漿及胞膜，呈片狀或塊狀分布，見圖1，2；在部分肝癌組織中可見增生的膽管上皮細(xì)胞SSTR2、SSTR5染色陽性，見圖3，4。

14例癌旁肝硬化組織僅SSTR2染色陽性者3例，占21.4%；僅SSTR5染色陽性者3例，占21.4%；SSTR2、SSTR5均染色陽性者4例，占28.6%；SSTR2、SSTR5均染色陰性者4例，占35.7%。

圖1 肝癌細(xì)胞SSTR2染色陽性(×400)

圖2 肝癌細(xì)胞SSTR5染色陽性(×400)

圖3 肝癌組織中增生膽管上皮細(xì)胞SSTR2染色陽性(×400)

圖4 肝癌組織中增生膽管上皮細(xì)胞SSTR5染色陽性(×400)

2.2 SSTR2、SSTR5陽性表達(dá)與肝癌臨床病理因素的關(guān)系

將肝癌病例分別分為高分化組和中分化組、TNMⅠ～Ⅱ期組和Ⅲ～Ⅳ期組、AFP陽性組(AFP>400 ng/mL)和陰性組(AFP≤400 ng/mL)、HBV-DNA 陽性組(HBV-DNA≥103copies/ml)和陰性組(HBV-DNA<103copies/ml)、Child-pugh分級(jí)A級(jí)組和Child-pugh分級(jí)B級(jí)+C級(jí)組，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)分析各兩組間SSTR2以及SSTR5表達(dá)率的差異，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析后P值均大于0.05，未發(fā)現(xiàn)以上各組SSTR的表達(dá)率存在差異。 見表1。

表1 SSTR表達(dá)率與肝癌臨床病理因素的比較

3 討 論

體外多種細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)了生長抑素受體在腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡中的作用, 如SSTR1、SSTR2、SSTR4、SSTR5與細(xì)胞周期G1期停止有關(guān)，而SSTR2、SSTR3則與細(xì)胞凋亡有關(guān)[1]。生長抑素還可以抑制部分肝癌細(xì)胞系的生長[2]?，F(xiàn)在用于臨床治療的生長抑素類似物(somatostatin analogue，SSTA)，對(duì)于SSTR2有高度的親和力，對(duì)于SSTR5的親和力次之，對(duì)SSTR3親和力較弱，對(duì)SSTR1 和SSTR4無親和力[3]。由于具有抗細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的功能，表達(dá)于腫瘤的生長抑素受體，特別是SSTR2和SSTR5，已經(jīng)被作為惡性腫瘤治療的靶點(diǎn)。雖然SSTA已開始臨床用于中晚期肝癌的治療，但對(duì)其有效性目前仍存在爭議。推測(cè)這些SSTA產(chǎn)生的效應(yīng)很大程度上取決于其對(duì)于靶組織相應(yīng)受體的直接刺激作用。因此，腫瘤組織中SSTR亞型表達(dá)的類型和數(shù)量可能決定了SSTA治療腫瘤所產(chǎn)生的生物效應(yīng)的差異，不同個(gè)體間受體表達(dá)類型和數(shù)量存在的變異可能是SSTA臨床效應(yīng)存在差別的原因。

劉建生等[4]，顏登國等[5]發(fā)現(xiàn)人肝癌組織有SSTR mRNA的表達(dá)，我們通過應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法在受體蛋白質(zhì)水平進(jìn)行分析的結(jié)果表明，72%的肝癌組織至少表達(dá)SSTR2、SSTR5兩種受體其中的一種，受體表達(dá)部位位于肝癌細(xì)胞的胞膜以及胞漿，這與先前Blakerd等[6]的研究結(jié)果相似。所以在不同的肝癌組織SSTR的表達(dá)存在差異性。那些同時(shí)表達(dá)SSTR2和SSTR5兩種受體亞型而且表達(dá)受體數(shù)量多的組織細(xì)胞會(huì)對(duì)生長抑素類似物的作用產(chǎn)生較為明顯的受體后效應(yīng)，所以有可能是這部分受體表達(dá)陽性的病人應(yīng)用SSTA進(jìn)行治療才會(huì)產(chǎn)生有益的效果，這有助于解釋目前應(yīng)用長效SSTA治療晚期原發(fā)性肝癌的臨床實(shí)驗(yàn)之間結(jié)果不盡一致的原因。因此，如果在臨床實(shí)驗(yàn)應(yīng)用SSTA治療前對(duì)肝癌組織SSTR表達(dá)情況包括表達(dá)形式和表達(dá)數(shù)量進(jìn)行分析和篩選, 將足量表達(dá)SSTR者或者表達(dá)對(duì)SSTA抗腫瘤作用發(fā)生效應(yīng)的SSTR者作為治療組，那么將使這一部分病人受到最大益處，而避免了盲目的用藥，節(jié)省了治療費(fèi)用。目前對(duì)生長抑素及受體和肝癌之間關(guān)系的研究尚處于起步階段，通過進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究SSTR五種亞型在肝癌細(xì)胞增殖和凋亡中的具體作用以及由哪些受體亞型介導(dǎo)這種作用，這將會(huì)使我們進(jìn)一步明確和證實(shí)生長抑素及其受體在肝癌治療中的作用。另外，隨著研制出對(duì)生長抑素受體親和力更強(qiáng)、選擇性更廣泛的生長抑素類似物，將會(huì)有更多的肝癌病人從治療中受益，這將為肝癌的治療開辟一條新的道路。

我們發(fā)現(xiàn)在某些肝癌組織中增生的膽管上皮細(xì)胞也有SSTR2和SSTR5的明顯表達(dá)，這提示我們對(duì)于這些增生的膽管上皮細(xì)胞，生長抑素類似物可能也有抑制作用。而且，對(duì)于少見的原發(fā)性膽管細(xì)胞癌，其是否也表達(dá)生長抑素受體，這需要收集足夠的原發(fā)性膽管細(xì)胞癌病例進(jìn)行研究來證實(shí)。

在所研究的肝癌樣本中，腫瘤的分化程度、TNM分期、血清AFP水平、乙肝病毒DNA水平和肝功能Child-pugh分級(jí)等都與SSTR2和SSTR5的表達(dá)率無關(guān)，這提示這些參數(shù)對(duì)于與生長抑素類似物治療存在相關(guān)的SSTR的表達(dá)情況可能都不是可預(yù)測(cè)的。

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