對(duì)蘇丹紅GB/T 19681-2005檢測(cè)方法的探討與改進(jìn)

丁軼聰 王 群 伊 芳

(阜陽(yáng)市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，阜陽(yáng) 236000)

蘇丹紅屬偶氮系列染料，主要應(yīng)用于蠟、油彩、汽油等工業(yè)領(lǐng)域，是應(yīng)用廣泛的化工合成染色劑。目前已確認(rèn)了有機(jī)偶氮染料的毒性，其中大多數(shù)有致癌性，包括蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ和蘇丹紅Ⅳ[1]。我國(guó)目前采用的《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》[2]中允許使用的食品添加劑有1 000多種，但不包括“蘇丹紅”，即“蘇丹紅”在食品生產(chǎn)領(lǐng)域是被國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)明確禁止使用的。由于GB/T 19681-2005國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法[3](高效液相色譜法)發(fā)布時(shí)間緊促，不可避免地存在一些問(wèn)題。因此筆者針對(duì)國(guó)標(biāo)中存在的一些問(wèn)題進(jìn)行探討，并建立了一種適合大多數(shù)檢測(cè)機(jī)構(gòu)使用的檢測(cè)靈敏度高、分離效果好的檢測(cè)方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀:L-7100型,配有二極管陣列檢測(cè)器(195～900 nm)，日本日立公司；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 :R-205型,上海申勝生物科技有限公司；

丙酮、乙腈、正己烷：色譜純；

甲酸：分析純；

30%丙酮的正己烷溶液；

中性氧化鋁固相萃取柱：2 g/(6 mL)，Alumina-N(批號(hào)20090815)，上海安譜科學(xué)儀器有限公司；

蘇丹紅Ⅰ(≥90.0%)、蘇丹紅Ⅱ(≥95.0%)、蘇丹紅Ⅲ(≥96.0%)、蘇丹紅Ⅳ(≥94.0%)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):德國(guó) Dr.Ehrenstorfer公司。

1.2 色譜分析條件

色譜柱：C18色譜柱(迪馬鉆石 250 mm×4.6 mm， 5 μm)；流動(dòng)相：0.5%甲酸的乙腈溶液-0.1%甲酸的丙酮溶液(體積比80∶20)；流速：1.0 mL/min；柱溫:30℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：478 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

1.3 樣品處理

稱取0.5 g辣椒油樣品于25 mL比色管中，加入9 mL正己烷溶解，難溶解的樣品可以適當(dāng)加溫促進(jìn)溶解。慢慢加入到已用10 mL正己烷過(guò)柱的中性氧化鋁小柱，待樣液完全流出后再加入10 mL正己烷洗柱，棄去全部正己烷淋洗液，用80 mL 30%丙酮的正己烷溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液60℃旋蒸濃縮后，用丙酮轉(zhuǎn)移定容至5 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾后待測(cè)。

1.4 實(shí)驗(yàn)步驟

(1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

稱取0.01 g左右的蘇丹紅Ⅰ號(hào)、蘇丹紅Ⅱ號(hào)、蘇丹紅Ⅲ號(hào)、蘇丹紅Ⅳ號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，分別用丙酮溶解并定容至100.0 mL，配制成濃度分別為蘇丹紅Ⅰ：100 μg/mL、蘇丹紅Ⅱ：101 μg/mL、蘇丹紅Ⅲ：108 μg/mL、蘇丹紅Ⅳ：104 μg/mL的單標(biāo)，然后分別移取每個(gè)單組分標(biāo)準(zhǔn)溶液(以下簡(jiǎn)稱單標(biāo))各2.0、5.0、7.0 mL，每相同體積的單標(biāo)用丙酮合并定容至100.0 mL，得到3種不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

(2)加標(biāo)回收測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

分別準(zhǔn)確移取5.0 mL 1.4(1)配制的單標(biāo)，用正己烷合并定容至100.0 mL，得到濃度分別為蘇丹紅Ⅰ：5.4 μg/mL、蘇丹紅Ⅱ：5.05 μg/mL、蘇丹紅Ⅲ：5.0 μg/mL、蘇丹紅Ⅳ：5.2 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

(3)樣品測(cè)定

按1.2色譜條件，取檢測(cè)用3種不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品處理液各10 μL上機(jī)測(cè)定，以標(biāo)樣的保留時(shí)間定性，以標(biāo)樣和樣品的峰高度之比進(jìn)行定量。

1.5 色譜圖

在1.2色譜條件下,對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液進(jìn)樣分析，色譜圖如圖1所示。

1—蘇丹紅Ⅰ； 2—蘇丹紅Ⅱ； 3—蘇丹紅Ⅲ； 4—蘇丹紅Ⅳ圖1 標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法選擇478 nm檢測(cè)蘇丹紅Ⅰ號(hào)，出峰后切換成520 nm，檢測(cè)蘇丹紅Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ號(hào)，目前還有很多的基層檢測(cè)單位使用的液相色譜不具備設(shè)置波長(zhǎng)梯度檢測(cè)的功能，根據(jù)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的光譜掃描，發(fā)現(xiàn)4種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在478 nm附近均有較強(qiáng)的吸收，因此實(shí)驗(yàn)采用478 nm波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液基質(zhì)和流動(dòng)相的選擇

按照國(guó)標(biāo)方法用乙醚溶解，用正己烷定容的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液在給定的條件下各組分峰分離效果不好，且與樣品處理液最終定容基質(zhì)不同，導(dǎo)致出峰時(shí)間不同，峰高有差異[4]，改用丙酮溶解、定容，按本實(shí)驗(yàn)確定的條件,蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ號(hào)分離情況較好(見(jiàn)圖1)。本方法專門給出了做加標(biāo)實(shí)驗(yàn)的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制方法，是因?yàn)樵囼?yàn)中是用丙酮作為解析液，如果再用純丙酮稀釋的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液作為加入的標(biāo)物，在過(guò)柱萃取的環(huán)節(jié)上，標(biāo)物不能夠有效地保留在固相萃取柱上，導(dǎo)致回收率不理想。國(guó)標(biāo)方法在檢測(cè)過(guò)程中使用了梯度洗脫功能，同樣不適用于不具備此種功能的液相色譜儀。經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)甲酸能夠改善峰形，丙酮能夠加快出峰時(shí)間，使用甲酸乙腈溶液和甲酸丙酮溶液作為流動(dòng)相，用等度方式同樣能得到較好的分離效果，縮短了分析時(shí)間，提高了工作效率。

2.3 樣液的吸附、解析及濃縮

影響方法回收率的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是樣液過(guò)固相萃取柱吸附、解析的環(huán)節(jié)，國(guó)標(biāo)的中性氧化鋁活性調(diào)整的方法沒(méi)有明確給出活化后保存方式以及保存期限，實(shí)際操作性不強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)采用成品SPE小柱，免去了活化和滅活的過(guò)程，使用效果較好，但是需要注意的是成品SPE小柱每批次的活性也不盡相同，使用前應(yīng)采用測(cè)定加標(biāo)回收率的方式加以確認(rèn)。試驗(yàn)中改用和國(guó)標(biāo)方法不同的30%丙酮的正己烷溶液，增加了洗脫能力，能更徹底地洗脫掉固相萃取柱上的待測(cè)物質(zhì)。

2.4 線性方程、線性范圍及檢出限

按照1.4(1)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，在選定的實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)定并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性方程、線性范圍見(jiàn)表1。

對(duì)空白溶液進(jìn)行10次重復(fù)測(cè)定，以3倍的標(biāo)準(zhǔn)偏差除以工作曲線的斜率，計(jì)算蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ號(hào)的檢出限分別為8、9、9、10 μg/kg。

表1 線性方程、線性范圍及檢出限

注：y代表含量，x代表響應(yīng)值。

2.5 精密度試驗(yàn)

取一種濃度的檢測(cè)用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)測(cè)定6次，測(cè)試結(jié)果及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn)方法具有良好的精密度。

表2 精密度試驗(yàn)

2.6 回收試驗(yàn)

準(zhǔn)確移取1.0 mL加標(biāo)回收測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到不含蘇丹紅的辣椒油樣品中，按1.3處理后測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 回收試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

對(duì)國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法(高效液相色譜法)測(cè)定蘇丹紅的檢測(cè)方法進(jìn)行了改進(jìn)，改進(jìn)后的方法具有簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，方法的線性關(guān)系、精密度和回收率均能滿足日常檢測(cè)工作要求，對(duì)國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法起到了補(bǔ)充和完善的作用。

[1] 黃曉蘭，吳惠勤，黃芳，等. GC-MS/SIM法同時(shí)測(cè)定食品中的

蘇丹紅Ⅰ-Ⅳ[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2005(4)：78-80.

[2] GB 2760-2007 食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[S].

[3] GB/T 19681-2005 食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)方法 高效液相法[S].

[4] 沈兵，奚奇輝，于天祥，等.對(duì)食品中蘇丹紅檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的改進(jìn)[J].理化檢驗(yàn)：化學(xué)分冊(cè)，2008,44：535-537