兩種粘結(jié)系統(tǒng)處理牙本質(zhì)后的磨片觀察

李秋紅,王 如

(大連醫(yī)科大學(xué) 附屬第一醫(yī)院 口腔科，遼寧 大連 116011)

牙本質(zhì)粘結(jié)是牙體粘結(jié)非常重要的環(huán)節(jié)。牙本質(zhì)結(jié)構(gòu)中，牙本質(zhì)小管和管間牙本質(zhì)這種不均質(zhì)結(jié)構(gòu)使得牙本質(zhì)粘結(jié)較牙釉質(zhì)復(fù)雜得多。牙本質(zhì)是牙體硬組織，對(duì)其粘結(jié)處理后，觀察其粘結(jié)面，若在不脫鈣的情況下進(jìn)行切片觀察是很困難的。作者對(duì)牙本質(zhì)粘結(jié)處理后在不脫鈣的情況下，在光鏡下觀察經(jīng)自酸蝕及全酸蝕兩種粘結(jié)系統(tǒng)處理牙本質(zhì)獲得的混合層情況，為臨床提供參考。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2008年1月～2008年3月在大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院口腔頜面外科因牙周病須拔除患牙6例患者的后磨牙6顆，頜面具有典型硬化性牙本質(zhì)，視覺(jué)分級(jí)三級(jí)以上(根據(jù)North Carolina dentine sclerotic scale[1])。因正畸減數(shù)須拔除前磨牙3例患者的6顆前磨牙，根尖孔已形成。使用超聲潔治器去除所有樣本牙的菌斑和牙石；離體牙在4%氯胺溶液中4 ℃存放，拔除后1個(gè)月內(nèi)使用。將前磨牙頜面釉質(zhì)用金剛砂車(chē)針磨除，暴露牙本質(zhì)，高速金剛砂車(chē)針平行于牙長(zhǎng)軸將牙分成兩部分，即A組和B組；后磨牙頜面均為硬化性牙本質(zhì)，直接用高速金剛砂車(chē)針平行于牙長(zhǎng)軸將牙分成兩部分，即C組和D組。每一部分均有牙本質(zhì)小管平行于牙長(zhǎng)軸和垂直于牙長(zhǎng)軸的粘結(jié)面，且供粘結(jié)的牙本質(zhì)均用細(xì)砂金剛砂車(chē)針打磨。A組和C組用于全酸蝕粘結(jié)觀察，B組和D組用于自酸蝕粘結(jié)觀察。

1.2 方 法

1.2.1 全酸蝕粘結(jié)觀察樣本：粘結(jié)面35 %磷酸(3 M ESPE，美國(guó))酸蝕粘結(jié)面20 s后，蒸餾水沖洗20 s，干海綿球吸干多余水分，Single Bond粘結(jié)劑(3M公司，美國(guó))均勻涂布在粘結(jié)面上，停留10 s后，用氣槍將殘留水分吹干，再次涂布粘結(jié)劑，將過(guò)多粘結(jié)劑用小毛刷吸出，光固化燈固化20 s，復(fù)合樹(shù)脂Z350(3 M ESPE，美國(guó))覆蓋粘結(jié)面，光固化燈固化樹(shù)脂。自酸蝕粘結(jié)觀察樣本：粘結(jié)面SE BOND自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)(可樂(lè)麗菲露，日本)涂布粘結(jié)面20 s后，氣槍輕輕吹干再涂布Bond粘結(jié)劑10 s，光固化機(jī)固化20 s，樹(shù)脂覆蓋粘結(jié)面，光固化燈固化樹(shù)脂。

1.2.2 非脫鈣牙磨片制作方法：樣本于70 %酒精中固定72 h后，梯度脫水(80%、90%、95%、100%酒精)，各72 h(每24 h換1次酒精)。甲基丙烯酸甲酯和鄰苯二甲酸二丁酯按4∶1(體積比)混合配制浸透液1，將樣本放入其中，室溫下浸透2周。甲基丙烯酸甲酯和鄰苯二甲酸二丁酯按4∶1(體積比)混合，每100 mL混合液加入過(guò)氧化苯甲酰2.5 g，磁力攪拌器充分?jǐn)嚢? h，配置浸透液2。將樣本放入其中，室溫下浸透1周。甲基丙烯酸甲酯和鄰苯二甲酸二丁酯按4∶1(體積比)混合，每100 mL混合液加入過(guò)氧化苯甲酰6.25克，磁力攪拌器充分?jǐn)嚢? h，配置包埋液，將樣本放入其中，室溫下包埋1周。使用Leica 1600型鋸割切片機(jī)(EXAKT公司，德國(guó))將樣本切薄，并磨薄切片至20～25 μm，磨片制作由解放軍總醫(yī)院口腔研究所完成。10 %甲苯胺藍(lán)溶液浸泡5 min，水洗，干燥，封片。光鏡下觀察。

2 結(jié) 果

C組硬化性牙本質(zhì)經(jīng)全酸蝕粘結(jié)處理后，可見(jiàn)粘結(jié)混合層與牙本質(zhì)粘結(jié)緊密，大部分混合層厚度均勻，部分區(qū)域不均勻，有些較薄，有些較厚，部分區(qū)域可見(jiàn)混合層牙本質(zhì)面呈鋸齒形似樹(shù)脂突(圖1a，黑色箭頭示)。D組硬化性牙本質(zhì)經(jīng)SE BOND自酸蝕粘結(jié)處理，可見(jiàn)粘結(jié)混合層清晰明顯，與牙本質(zhì)粘結(jié)緊密，有些區(qū)域可見(jiàn)混合層牙本質(zhì)面呈鋸齒形似樹(shù)脂突(圖1b，黑色箭頭示)。

圖1 硬化性牙本質(zhì)Fig 1 Sclerotic dentin(×400)a:3M全酸蝕粘結(jié)(3M total-etching bonding); b:SE BOND自酸蝕粘結(jié)(SE BOND self-etching bonding)黑色箭頭示混合層牙本質(zhì)側(cè)凸凹不平似樹(shù)脂突(black arrow shows resin tags look like waved line in hybrid layer)

A組正常牙本質(zhì)經(jīng)全酸蝕粘結(jié)處理，可見(jiàn)混合層與牙本質(zhì)粘結(jié)緊密，但不及與樹(shù)脂粘結(jié)緊密，混合層厚度大部分區(qū)域均勻，有些區(qū)域較薄，有些區(qū)域較厚(圖2a)。B組正常牙本質(zhì)經(jīng)SE BOND自酸蝕粘結(jié)處理，可見(jiàn)粘結(jié)混合層清晰明顯，與牙本質(zhì)粘結(jié)緊密(圖2b)。

圖2 硬化性牙本質(zhì)Fig 2 Sclerotic dentin(×400)a:3M全酸蝕粘結(jié)(3M total-etching bonding); b:SE BOND自酸蝕粘結(jié)(SE BOND self-etching bonding)

牙齒磨片光鏡下觀察混合層：全酸蝕系統(tǒng)正常牙本質(zhì)獲得的混合層與硬化性牙本質(zhì)獲得的混合層無(wú)明顯差別。SE BOND自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)正常牙本質(zhì)獲得的混合層與硬化性牙本質(zhì)獲得的混合層無(wú)明顯差別。

3 討 論

3.1 研究方法

本實(shí)驗(yàn)是對(duì)牙本質(zhì)粘結(jié)面的形態(tài)學(xué)觀察。對(duì)于牙本質(zhì)粘結(jié)的觀察，應(yīng)用掃描電鏡和激光掃描共聚焦顯微鏡是常用的研究方法[2-5]。本研究選擇硬組織磨片觀察牙本質(zhì)粘結(jié)是考慮牙體硬組織在不脫鈣的情況下制作切片觀察更符合硬組織的實(shí)際原貌。且為切片能觀察硬組織內(nèi)部情況。應(yīng)用掃描電鏡觀察牙本質(zhì)粘結(jié)混合層情況，樣本也不需要脫鈣，但只能觀察樣本的表面，若想觀察硬組織內(nèi)部，需將硬組織處理后劈裂觀察粘結(jié)界面。掃描電鏡觀察樣本的倍數(shù)可以達(dá)到2000倍以上，操作簡(jiǎn)便且經(jīng)濟(jì)。牙體硬組織切片觀察最終厚度為20～25 μm，因切片過(guò)厚只能在光鏡下觀察，最大放大倍數(shù)為400，由于切片厚度限制，在更高的放大倍數(shù)下，圖像就會(huì)模糊不清。從此點(diǎn)考慮掃描電鏡具有優(yōu)勢(shì)。硬組織切片觀察在光鏡下獲得的圖像與掃描電鏡相比質(zhì)感不同；牙齒磨片可長(zhǎng)期保存重復(fù)觀察，而掃描電鏡的樣本必須干燥保存，而且對(duì)于形態(tài)不規(guī)則的樣本，觀察重復(fù)性差、重復(fù)觀察成本高。所以兩種方法各有優(yōu)勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用硬組織磨片觀察牙本質(zhì)粘結(jié)情況獲得的結(jié)果和結(jié)論與作者應(yīng)用掃描電鏡觀察[6]的情況一致，這是一種牙本質(zhì)觀察方法的探索和嘗試。

3.2 正常牙本質(zhì)與硬化性牙本質(zhì)

無(wú)論使用何種粘結(jié)系統(tǒng)，硬化性牙本質(zhì)和正常牙本質(zhì)均可獲得厚度均勻的混合層，但所有樣本混合層都存在某些較薄或較厚的區(qū)域，這與粘結(jié)面的平滑程度有關(guān)，較厚的地方是由于齲壞或牙本質(zhì)粘結(jié)面自然形成的凹陷造成粘結(jié)劑的堆積。臨床上粘結(jié)面若想獲得均勻一致的混合層，需用風(fēng)速微弱的氣槍將粘結(jié)劑吹薄，或用小毛刷將粘結(jié)劑涂勻，特別在粘結(jié)劑易于堆積的轉(zhuǎn)角或凹陷處去除多余的粘結(jié)劑，以免粘結(jié)劑過(guò)多影響粘結(jié)強(qiáng)度。

牙本質(zhì)的粘結(jié)面經(jīng)過(guò)酸蝕，水沖洗，將玷污層完全去除，使管間牙本質(zhì)脫礦，膠原纖維微孔支架暴露，同時(shí)牙本質(zhì)小管開(kāi)放，底膠潤(rùn)濕并滲入膠原纖維間的微孔及牙本質(zhì)小管，以有利于粘結(jié)劑的隨后滲入，底膠和粘結(jié)劑在原位固化后，即與牙本質(zhì)膠原纖維形成相互扣鎖的混合層，內(nèi)含有許多樹(shù)脂突[7]。硬化性牙本質(zhì)是指牙本質(zhì)小管大部分堵塞，牙本質(zhì)小管中沉積了鈣化鹽結(jié)晶體，其折光率與管間牙本質(zhì)相似，表面呈半透明狀。多數(shù)研究者認(rèn)為硬化牙本質(zhì)的粘接較正常牙本質(zhì)困難得多。硬化性牙本質(zhì)管周牙本質(zhì)，管間牙本質(zhì)和牙本質(zhì)小管內(nèi)礦化結(jié)晶脫礦較正常牙本質(zhì)困難，牙本質(zhì)粘結(jié)形成的混合層

更薄，樹(shù)脂突短，很少甚至沒(méi)有[4]。牙本質(zhì)脫礦與酸蝕劑的種類(lèi)濃度和作用時(shí)間均有關(guān)，譚建國(guó)[2]實(shí)驗(yàn)證明硬化性牙本質(zhì)的大部分牙本質(zhì)小管內(nèi)可見(jiàn)柱狀礦化物結(jié)晶體。15%磷酸或35%磷酸處理30秒和自酸蝕處理劑Adper Prompt-Pop(3M 公司ESPE，美國(guó))處理15 s均不能去除牙本質(zhì)小管內(nèi)硬化結(jié)晶體。硬化牙本質(zhì)表面結(jié)構(gòu)與正常牙本質(zhì)存在差異，其牙本質(zhì)小管內(nèi)堵塞的礦化結(jié)晶體可能對(duì)粘結(jié)產(chǎn)生影響。自酸蝕處理劑Adper Prompt-Pop的脫礦能力低于15%和35%磷酸。本實(shí)驗(yàn)在鏡下觀察無(wú)論硬化性牙本質(zhì)還是正常牙本質(zhì)獲得的混合層樹(shù)脂突并不是每個(gè)視野均可見(jiàn)得，在有些區(qū)域可見(jiàn)混合層與牙本質(zhì)粘結(jié)面呈鋸齒形似樹(shù)脂突，因放大倍數(shù)有限，無(wú)法進(jìn)一步放大證實(shí)。硬化性牙本質(zhì)與正常牙本質(zhì)用全酸蝕或自酸蝕兩種方法處理獲得的混合層厚度，形態(tài)質(zhì)量均在本實(shí)驗(yàn)中無(wú)差別。硬化性牙本質(zhì)同樣可獲得良好的粘結(jié)。從粘結(jié)獲得的形態(tài)上看兩者無(wú)差別，粘結(jié)后獲得的粘結(jié)力兩者有何差別需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)探索。

[1] Kusunoki M,Itoh K,Hisamitsu H,et al.The efficacy of dentine adhesive system sclerotic dentine[J].J Dent,2002,30:91-97.

[2] 譚建國(guó)，周麗晶，馮海蘭．三種酸蝕方法處理硬化性牙本質(zhì)表面的超微形態(tài)研究[J]．口腔醫(yī)學(xué)，2005，25(3):140-145.

[3] 周麗晶，譚建國(guó)，胡白河．牙齒非齲性硬化牙本質(zhì)經(jīng)自酸蝕粘結(jié)劑處理后超微形態(tài)[J]．實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志，2005,21(6):823-825.

[4] 李 瀟，施長(zhǎng)溪，趙信義．牙本質(zhì)表面狀態(tài)對(duì)粘結(jié)界面影響的激光掃描共聚焦顯微鏡研究[J]．實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志，2005，21(1)：71-74.

[5] Kwong SM,Tay FR,Yip HK,et al.An ultrastructural study of the application of dentine adhesive to acid-conditioned sclerotic dentine[J].Dent,2000,28:515-528.

[6] 李秋紅，萬(wàn)君.兩種粘結(jié)系統(tǒng)對(duì)硬化性牙本質(zhì)處理后超微形態(tài)觀察[J]．中國(guó)實(shí)用口腔科雜志，2008，1(5):601-602.

[7] 樊明文.牙體牙髓病學(xué)[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2000,98.