漢族兒童細(xì)胞色素P450單核苷酸多態(tài)性及其代謝表型分布的研究

肖 婧 顧 藝 孫 琳 苗 青 焦偉偉 馮衛(wèi)星 吳喜蓉 郭雅潔 申阿東

細(xì)胞色素P450(CYP450)是人體內(nèi)最重要的藥物Ⅰ相代謝酶，主要分布在肝臟，在腸道、肺、腎和腦等組織中也有少量分布，該酶可促進(jìn)氧化、羥化、脫烷基和脫氨基等反應(yīng)的發(fā)生[1,2]。人類CYP450目前已發(fā)現(xiàn)了18個(gè)家族、44個(gè)亞家族[3～5]，其中CYP1、CYP2和CYP3家族占肝臟CYP450總量的80%以上，參與目前市場(chǎng)上90%以上藥物的代謝[6～8]，同時(shí)還對(duì)毒物、致癌物的活化與解毒有著重要作用。

20%～95%藥物療效和不良反應(yīng)的個(gè)體差異由遺傳變異所決定[4]。遺傳變異決定了藥物代謝酶在不同個(gè)體中含量和活性的差異，從而導(dǎo)致不同個(gè)體對(duì)藥物反應(yīng)的不同。單核苷酸多態(tài)性(SNPs)是決定個(gè)體間差異最主要的多態(tài)形式?？梢罁?jù)CYP450不同亞型的SNPs將人群劃分為不同的代謝表型[9]。CYP450亞型中某些位點(diǎn)的多態(tài)性可引起相應(yīng)酶活性的升高、降低甚至失活。其中，位于啟動(dòng)子區(qū)的CYP2E1 -1053C>T突變可使下游基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平提高10倍以上[10]；位于外顯子區(qū)的CYP3A4 878T>C突變可引起氨基酸改變，使CYP3A4酶活性呈輕至中度增強(qiáng)[11,12]；位于外顯子區(qū)的CYP2D6 100C>T和CYP2C9 1075A>C突變可引起氨基酸改變，使相應(yīng)酶活性明顯下降[13,14]；位于內(nèi)含子區(qū)的CYP2E1 7632T>A突變引起酶活性降低的原因尚不明確[10]；而位于外顯子區(qū)的CYP2C19 636G>A、681G>A/C和位于內(nèi)含子區(qū)的CYP3A5 6986A>G突變則分別導(dǎo)致終止密碼和異常剪切，從而使翻譯提前終止或產(chǎn)生無功能的截短蛋白[12,13]。

目前，中國漢族人群CYP450基因型和代謝表型的研究已有報(bào)道，為進(jìn)一步了解CYP450亞型重要SNPs及其代謝表型在中國漢族人群的分布，豐富和完善中國漢族人群相關(guān)遺傳學(xué)數(shù)據(jù)庫，本研究通過實(shí)時(shí)PCR基因分型法，對(duì)中國漢族分析人群CYP450 6個(gè)亞型的8個(gè)SNPs位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，為今后從分子水平進(jìn)行個(gè)體化用藥提供依據(jù)。

1 方法

1.1 樣本來源和選擇 選擇2005年3月至2008年12月首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京兒童醫(yī)院門診及病房收治的漢族患兒，并除外患有嚴(yán)重感染性疾病、自身免疫性疾病、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病、遺傳性疾病及先天性疾病患兒。以進(jìn)行血生化的檢測(cè)剩余血樣量能保證本研究血樣需要量的1 200份作為研究樣本，使用隨機(jī)數(shù)字表法從中隨機(jī)選取其中的300份進(jìn)行CYP450基因型檢測(cè)。

1.2 倫理審核 本研究經(jīng)首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京兒童醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過。300份進(jìn)行CYP450基因型檢測(cè)患兒不謀求其社會(huì)人口學(xué)和病史資料

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 基因組DNA抽提 取EDTA抗凝靜脈血2 mL，采用改進(jìn)的Miller鹽析法抽提全血中人基因組DNA，溶于TE溶液，經(jīng)分光光度計(jì)測(cè)定濃度后，于-20℃保存。

1.3.2 SNPs位點(diǎn)的選擇 SNPs的選擇依據(jù)主要基于2點(diǎn)：①可引起CYP450含量或活性改變的SNPs；②在HapMap(The International HapMap Project，國際人類基因組單體型圖計(jì)劃)數(shù)據(jù)庫(http://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/)中，中國漢族人群的次要等位基因頻率(minor allele frequency，MAF)>2%的SNPs。基于此，本研究共選取CYP450 6個(gè)亞型(CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4和CYP3A5)的8個(gè)SNPs位點(diǎn)進(jìn)行突變檢測(cè)，基本信息見表1。

表1 CYP450 6個(gè)亞型的8個(gè)SNPs位點(diǎn)的基本信息

Notes 1) The major allele names were accordant with Human Cytochrome P450 Allele Nomenclature Committee (http://www.cypalleles.ki.se/index.htm); 2) Rs was NCBI dbSNP

1.3.3 PCR擴(kuò)增 CYP450亞型SNPs位點(diǎn)檢測(cè)的引物及探針的序列(ABI公司合成)見表2，目的片段擴(kuò)增使用TaqMan SNPs genotyping Assays在MJ Opticon-2(CYP2E1的2個(gè)位點(diǎn))和Stratagene-Mx3005P熒光定量檢測(cè)儀(其余的6個(gè)位點(diǎn))上進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增條件為：95℃ 10 min；92℃ 15 s，60℃ 1 min，40個(gè)循環(huán)。每個(gè)循環(huán)結(jié)束時(shí)測(cè)定每孔的A值，擴(kuò)增循環(huán)結(jié)束后，根據(jù)定量PCR儀分析軟件獲得的熒光曲線及Ct值來判定樣品的SNP類型，并用DNA測(cè)序結(jié)果來驗(yàn)證實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.4 代謝表型的定義 依據(jù)文獻(xiàn)[15，16]可分為4種不同的代謝表型：①慢代謝型：含有2個(gè)使酶活性完全喪失的等位基因(突變純合子)；②中間代謝型：含有2個(gè)使酶活性減弱的等位基因(突變純合子)；③快代謝型：正常表型，具有2個(gè)正常等位基因(野生型純合子)，或具有1個(gè)使酶活性減弱或喪失的突變等位基因(突變雜合子)；④超快代謝型：含有多個(gè)拷貝或具有使酶活性增強(qiáng)的等位基因。

1.5 不同人群CYP450亞型突變等位基因頻率對(duì)比分析 應(yīng)用主題詞或關(guān)鍵詞 “P450”、“cytochrome”、“gene”和“polymorphisms”，檢索1996年1月至2009年12月PubMed、OVID及中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)光盤數(shù)據(jù)庫，收集高加索人群、日本人群以及非洲黑種人群的CYP450亞型等位基因頻率的文獻(xiàn)，并輔以文獻(xiàn)追溯的方法，手工檢索相關(guān)的參考文獻(xiàn)，入選的文獻(xiàn)需有相關(guān)的基因型和等位基因頻率的數(shù)據(jù)。各人群和各SNPs位點(diǎn)均選擇1篇樣本量大、方法可靠和種族特點(diǎn)明確的文獻(xiàn)與本研究中國漢族分析人群CYP450 6個(gè)亞型的8個(gè)SNPs位點(diǎn)等位基因頻率進(jìn)行對(duì)比分析。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SHEsis在線軟件(http://analysis.bio-x.cn/myAnalysis.php)統(tǒng)計(jì)各SNP位點(diǎn)等位基因頻率和基因型頻率分布，各SNP位點(diǎn)基因頻率行Hardy-Weinberg遺傳平衡定律(HWE)檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[17]。采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

表2 CYP450 6個(gè)亞型的8個(gè)SNPs位點(diǎn)突變檢測(cè)的引物和探針序列

2 結(jié)果

2.1 一般情況 300份中國漢族分析人群男性182例，女性118例，年齡0.2～16.0歲，平均年齡(5.0±4.3)歲。

2.2 CYP450亞型各SNP位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布 CYP450 6個(gè)亞型的8個(gè)SNPs位點(diǎn)的PCR基因測(cè)序結(jié)果見圖1。各位點(diǎn)等位基因頻率均符合Hardy-Weinberg平衡(P均>0.05)，表明樣本具有群體代表性(表3)。

如表3所示，CYP2C19 681G>A/C、CYP2D6 100C>T和CYP3A5 6986A>G位點(diǎn)的野生型雜合子基因型頻率在本研究漢族分析人群中的分布較高，分別為46.3%、47.0%和43.7%；CYP2D6 100C>T和CYP3A5 6986A>G突變純合子的頻率均高于野生型純合子的頻率(35.3%vs17.7%，41.7%vs14.7%)。CYP2C19 681G>A/C、CYP2D6 100C>T和CYP3A5 6986A>G位點(diǎn)的突變等位基因頻率也較高，分別為34.5%、58.8%和63.5%。CYP2C9 1075A>C、CYP2C19 636G>A、CYP2E1 -1053C>T、CYP2E1 7632T>A和CYP3A4 878T>C位點(diǎn)的野生型純合子基因型頻率較高，分別為100%、89.3%、61.3%、58.3%和98.0%，CYP2C9 1075A>C、CYP3A4 878T>C位點(diǎn)的野生型雜合子基因型頻率較低，僅為0和2.0%。

圖1 CYP450 6個(gè)亞型的8個(gè)SNPs位點(diǎn)的PCR基因測(cè)序結(jié)果

Fig 1 Results of sequencing of 8 SNPs in 6 CYP450 subtypes

Notes A:CYP2C9 1075A>C;B,C:CYP2C19 636G>A;D-F:CYP2C19 681G>A/C;G-I:CYP2D6 100C>T;J-L:CYP2E1 -1053C>T;M-O:CYP2E1 7632T>A;P,Q:CYP3A4 878T>C;R-T:CYP3A5 6986A>G

表3 300例中國漢族分析人群CYP450各亞型SNP位點(diǎn)基因型和等位基因的頻率分布[n(%)]

Notes 1) The genotype and allele frequencies of another SNP in CYP2C19 681 locus (wild heterozygote GC, mutant homozygote CC, and mutant allele C) were zero, data was not shown

2.3 中國漢族分析人群CYP450各亞型突變等位基因與其他人群的對(duì)比分析 CYP3A4 878T>C位點(diǎn)在歐洲高加索人群和非洲黑種人群中未找到相關(guān)數(shù)據(jù)。本研究中國漢族分析人群CYP450 6個(gè)亞型8個(gè)SNPs位點(diǎn)的突變等位基因頻率與日本人群[18～23]較為接近，與歐洲高加索人群[24～28]和非洲黑種人群[29～32]有較大差異。CYP2C19 681G>A/C、CYP2D6 100C>T和CYP3A5 6986A>G位點(diǎn)的突變等位基因頻率在中國漢族分析人群和日本人群中較高，CYP3A5 6986A>G位點(diǎn)的突變等位基因頻率在歐洲高加索人群中分布亦較高。其余5種突變等位基因頻率在中國漢族分析人群和日本人群中較低。

圖2 CYP450各亞型突變等位基因在不同人群中的分布

Fig 2 The distribution of mutant alleles in CYP450 subtypes in different race population

Notes The data of CYP3A4 878T>C in European Gaucasian and African Black ethnic or regional groups were not found

2.4 中國漢族人群CYP450代謝表型的分布 由表4可見，CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4和CYP3A5的快代謝型和超快代謝型比例分別100%，83.3%，64.7%，95%，100%和58.3%。CYP2C19、CYP2D6和CYP3A5的中間代謝型和慢代謝型比例分別為11.4%、35.3%和41.7%，高于CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4的中間代謝型和慢代謝型比例(分別為0，5.0%和0)。由于慢代謝型的劃分還需明確該基因其他多態(tài)性位點(diǎn)的情況，且該型在人群中的比例較低，可初步提示此3種CYP450亞型的中間代謝型在中國漢族分析人群中的比例較高。CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4的快代謝型和超快代謝型的比例非常高，分別為100%、95.0%和100%，由于超快代謝型的劃分還需明確該基因其他多態(tài)性位點(diǎn)的情況，且該型在人群中的比例較低，初步提示此3種CYP450亞型的快代謝型在中國漢族分析人群中的比例較高。

表4 300例中國漢族分析人群CYP450代謝表型的分布[n(%)]

Tab 4 Metabolic phenotype frequencies of CYP450 subtypes in 300 cases of Chinese Han population[n(%)]

SubtypesPMand/orIMEMand/orUMCYP2C91075C/C0(0)1075A/A；1075A/C300(100)CYP2C191)681A/Aand636G/G681G/Gand636A/A681A/Aand636G/A681G/Aand636A/A681A/Aand636A/A34(11．4)681G/Gand636G/G681G/Gand636G/A681G/Aand636G/G250(83．3)CYP2D6100T/T106(35．3)100C/C；100C/T194(64．7)CYP2E12)7632A/Aand?1053C/C7(2．3)7632T/Tand?1053C/C7632T/Aand?1053C/C7632T/Aand?1053C/T7632T/Tand?1053C/T7632T/Tand?1053T/T7632T/Aand?1053T/T285(95．0)CYP3A4--878T/T；878T/C；878C/C300(100)CYP3A56986G/G125(41．7)6986A/A；6986A/G175(58．3)

Notes PM:Poor metabolizer; IM: Intermediate metabolizer;EM: Extensive metabolizer; UM:Ultrarapid metabolizer;1) The metabolic phenotype of individuals with genotype combination as ′681G/681A and 636G/636A′ [16(5.3)] could not be determined. 2) The metabolic phenotype of individuals with genotype combination as ′7632A/7632A and -1053C/-1053T′ [5(1.7)], ′7632A/7632A and -1053T/-1053T′ [3(1.0)] could not be determined；"-":because of the increasing effect of this variant, the PM and/ or IM could not be existed

3 討論

本研究結(jié)果顯示，CYP2C19 681G>A/C、CYP2D6 100C>T、CYP3A5 6986A>G突變等位基因的頻率較高，均可引起酶活性降低或缺失，說明在中國漢族人群中可能有一部分個(gè)體因?yàn)檫@3個(gè)位點(diǎn)的突變引起相應(yīng)酶活性的降低，可入選本研究后續(xù)優(yōu)化SNPs位點(diǎn)的研究；而CYP2C9 1075A>C、CYP2C19 636G>A和CYP3A4 878T>C突變等位基因的頻率則較低，提示由此引起的相應(yīng)酶活性的改變對(duì)中國人群的影響可能較小。本研究CYP2C9 1075C等位基因頻率為0，與既往的研究結(jié)果(3.5%)[33]不一致，可能與人群的選擇不同有關(guān)?？稍诤罄m(xù)的研究中，考慮增加其他多態(tài)性較高或與代謝表型緊密相關(guān)的SNPs檢測(cè)位點(diǎn)，從而篩選出能代表中國漢族人群遺傳特點(diǎn)的SNPs位點(diǎn)優(yōu)化組合方式。

另外，通過與不同種族人群的既往研究結(jié)果對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，中國漢族分析人群CYP450各亞型的突變等位基因與高加索人群和黑種人群有種族上的差異，而與日本人群較為接近。提示CYP450基因型存在種族差異。但這些既往研究多以單個(gè)亞型進(jìn)行研究，而本研究則對(duì)CYP450 6個(gè)亞型的8個(gè)SNPs位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，獲得了更多的關(guān)于中國漢族人群CYP450不同亞型的遺傳學(xué)數(shù)據(jù)，對(duì)個(gè)體化用藥的指導(dǎo)更具意義。

目前，調(diào)整個(gè)體化用藥主要通過血藥濃度的監(jiān)測(cè)，而利用基因檢測(cè)來指導(dǎo)個(gè)體化用藥還處于起步階段，雖在部分藥物如華法林、β2受體拮抗劑已有小范圍的推廣[21,34]，但尚無臨床通用指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)。采用探針?biāo)幬锸悄壳按_定代謝表型的公認(rèn)方法，但需受試者服用探針?biāo)幬?，采血測(cè)定原藥和代謝產(chǎn)物的血藥濃度，依從性較差。因此根據(jù)多態(tài)性位點(diǎn)確定代謝表型是一種可行的方法。本研究選取的CYP450 6個(gè)亞型的8個(gè)SNPs位點(diǎn)均為已被既往研究證實(shí)可影響其代謝表型的位點(diǎn)。由于藥物代謝酶的編碼基因常存在多個(gè)功能性多態(tài)性位點(diǎn)，僅根據(jù)一個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)來判斷個(gè)體的代謝表型有一定局限性，因此本研究采用基因分型結(jié)果來預(yù)測(cè)代謝表型可能有一定誤差。但本研究將慢代謝型與中間代謝型、快代謝型與超快代謝型進(jìn)行合并分析，由于慢代謝型和超快代謝型在人群中的比例非常低，因此本研究的結(jié)果仍可初步反映中國漢族人群各CYP450亞型的中間代謝型和快代謝型的分布態(tài)勢(shì)。

不同代謝表型的個(gè)體應(yīng)采用不同的用藥方案。本研究結(jié)果顯示，中國漢族分析人群中CYP2C19、CYP2D6和CYP3A5中間代謝型和慢代謝型占較高比例(分別為11.4%、35.3%和41.7%)，因此建議對(duì)CYP2C19、CYP2D6和CYP3A5進(jìn)行SNPs的檢測(cè)，確定其代謝表型，如為中間代謝型或慢代謝型的患者應(yīng)適當(dāng)減少用藥劑量或延長(zhǎng)用藥間隔時(shí)間，并密切監(jiān)測(cè)藥物的不良反應(yīng)。而對(duì)于CYP2E1和CYP3A4超快代謝型個(gè)體，則可適當(dāng)增加用藥劑量或縮短用藥間隔時(shí)間。

除本研究選取的SNPs外，仍存在其他可影響CYP450代謝表型的遺傳變異，如插入、缺失、隨機(jī)重復(fù)和微衛(wèi)星等[35～37]，以及其他未發(fā)現(xiàn)和未入選的SNPs。進(jìn)一步檢測(cè)影響CYP450代謝表型的其他遺傳變異、或補(bǔ)充SNPs檢測(cè)位點(diǎn)，以提高預(yù)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性；但過多位點(diǎn)的入選會(huì)增加經(jīng)濟(jì)和人力成本，不利于該技術(shù)的推廣應(yīng)用。因此，如何平衡好這兩者的關(guān)系，是將來進(jìn)行個(gè)體化用藥研究所面臨的主要問題。

本研究的不足之處和局限性：①樣本人群可能存在選擇偏倚；②未采用探針?biāo)幬锎_定代謝表型，使本研究代謝表型結(jié)果存在一定誤差。

[1]Guengerich FP. Cytochrome P450 and chemical toxicology. Chem Res Toxicol, 2008, 21 (1): 70-83

[2]Kirchheiner J, Seeringer A. Clinical implications of pharma-cogenetics of cytochrome P450 drug metabolizing enzymes. Biochim Biophys Acta, 2007, 1770 (3): 489-494

[3]Paine MF, Hart HL, Ludington SS. The human intestinal cytochrome P450 "pie".Drug Metab Dispos, 2006, 34 (5): 880-886

[4]Bozina N, Bradamante V, LovricM. Genetic polymorphism of metabolic enzymes P450 (CYP) as a susceptibility factor for drug response, toxicity, and cancer risk. Arh Hig Rada Toksikol, 2009, 60 (2): 217-242

[5]Bibi Z. Role of cytochrome P450 in drug interactions. Nutr Metab (Lond), 2008, 5: 27

[6]Kim SH, Kim SH, Bahn JW, et al. Genetic polymorphisms of drug-metabolizing enzymes and anti-TB drug-induced hepatitis. Pharmacogenomics, 2009, 10 (11): 1767-1779

[7]Purnapatre K, Khattar SK, Saini KS. Cytochrome P450s in the development of target-based anticancer drugs. Cancer Lett, 2008, 259 (1): 1-15

[8]Ekhart C, Rodenhuis S, Smits PH, et al. An overview of the relations between polymorphisms in drug metabolising enzymes and drug transporters and survival after cancer drug treatment. Cancer Treat Rev, 2009, 35 (1): 18-31

[9]Aomori T, Yamamoto K, Oguchi-Katayama A, et al. Rapid single-nucleotide polymorphism detection of cytochrome P450 (CYP2C9) and vitamin K epoxide reductase (VKORC1) genes for the warfarin dose adjustment by the SMart-amplification process version 2. Clin Chem, 2009, 55 (4): 804-812

[10]Ulusoy G, Arins E, Adali O. Genotype and allele frequencies of polymorphic CYP2E1 in the Turkish population. Arch Toxicol, 2007, 81 (10): 711-718

[11]Tai J, Yang M, Ni X, et al. Genetic polymorphisms in cytochrome P450 genes are associated with an increased risk of squamous cell carcinoma of the larynx and hypopharynx in a Chinese population. Cancer Genet Cytogenet, 2010, 196 (1): 76-82

[12]Hu YF, Qiu W, Liu ZQ, et al. Effects of genetic poly-morphisms of CYP3A4, CYP3A5 and MDR1 on cyclosporine pharmacokinetics after renal transplantation. Clin Exp Pharma-col Physiol, 2006, 33 (11): 1093-1098

[13]Jiang D, Bai X, Zhang Q,et al. Effects of CYP2C19 and CYP2C9 genotypes on pharmacokinetic variability of valproic acid in Chinese epileptic patients: nonlinear mixed-effect modeling. Eur J Clin Pharmacol, 2009, 65 (12): 1187-1193

[14]Qin S, Shen L, Zhang A, et al. Systematic polymorphism analysis of the CYP2D6 gene in four different geographical Han populations in mainland China. Genomics, 2008, 92 (3): 152-158

[15]Zanger UM, Raimundo S, Eichelbaum M. Cytochrome P450 2D6: overview and update on pharmacology, genetics, bio-chemistry. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol, 2004, 369(1): 23-37

[16]Shenfield GM. Genetic polymorphisms, drug metabolism and drug concentrations. Clin Biochem Rev, 2004, 25(4): 203-206

[17]Shi YY, He L. SHEsis, a powerful software platform for analy-ses of linkage disequilibrium, haplotype construction, and genetic association at polymorphism loci. Cell Res, 2005, 15(2): 97-98

[18]Kubota T, Yamaura Y, Ohkawa N, et al. Frequencies of CYP2D6 mutant alleles in a normal Japanese population and metabolic activity of dextromethorphan O-demethylation in different CYP2D6 genotypes. Br J Clin Pharmacol, 2000, 50(1): 31-34

[19]Fukushima-Uesaka H, Saito Y, Maekawa K, et al. Genetic variations and haplotypes of CYP2C19 in a Japanese population. Drug Metab Pharmacokinet, 2005, 20(4): 300-307

[20]Saeki M, Saito Y, Nakamura T, et al. Single nucleotide polymorphisms and haplotype frequencies of CYP3A5 in a Japanese population. Human Mutat, 2003, 21(6): 653-659

[21]Yoshizawa M, Hayashi H, Tashiro Y, et al. Effect of VKORC1-1639 G>A polymorphism, body weight, age, and serum albumin alterations on warfarin response in Japanese patients. Thromb Res, 2009, 124(2): 161-166

[22]Fukushima-Uesaka H, Saito Y, Watanabe H, et al. Haplotypes of CYP3A4 and their close linkage with CYP3A5 haplotypes in a Japanese population. Human Mutat, 2004, 23(1): 100-107

[23]Watanabe S, Hayashi SI, Nakachi K, et al. Pstl and Rsal RFLPs in complete linkage disequilibrium at the CYP2E gene. Nucleic Acids Res, 1990, 18(23): 7194

[24]Sachse C, Brockmoller J, Bauer S, et al. Cytochrome P450 2D6 variants in a Caucasian population: allele frequencies and phenotypic consequences. Am J Hum Genet, 1997, 60(2): 284-295

[25]Scordo MG, Caputi AP, D′Arrigo C, et al. Allele and genotype frequencies of CYP2C9, CYP2C19 and CYP2D6 in an Italian population. Pharmacol Res, 2004, 50(2): 195-200

[26]Garsa AA, McLeod HL, Marsh S. CYP3A4 and CYP3A5 genotyping by pyrosequencing. BMC Med Genet, 2005, 6(1): 19-23

[27]Garcia-Martin E, Martinez C, Ladero JM, et al. High frequency of mutations related to impaired CYP2C9 metabolism in a Caucasian population. Eur J Clin Pharmacol, 2001, 57(1): 47-49

[28]Yang B, O′Reilly DA, Demaine AG, et al. Study of polymorphisms in the CYP2E1 gene in patients with alcoholic pancreatitis. Alcohol, 2001, 23(2): 91-97

[29]Sistonen J, Sajantila A, Lao O, et al. CYP2D6 worldwide genetic variation shows high frequency of altered activity variants and no continental structure. Pharmacogenet Genomics, 2007, 17(2): 93-101

[30]Kudzi W, Dodoo AN, Mills JJ. Characterization of CYP2C8, CYP2C9 and CYP2C19 polymorphisms in a Ghanaian population. BMC Med Genet, 2009, 2(10): 124

[31]Wu X, Shi H, Jiang H, et al. Associations between cytochrome P4502E1 genotype, mutagen sensitivity, cigarette smoking and susceptibility to lung cancer. Carcinogenesis, 1997, 18(5): 967-973

[32]Lee MY, Mukherjee N, Pakstis AJ, et al. Global patterns of variation in allele and haplotype frequencies and linkage disequilibrium across the CYP2E1 gene. Pharmacogenomics J, 2008, 8(5): 349-356

[33]He ZY (何震宇), Sun LM, Li YQ, et al. Allele and genotype frequencies of CYP2C9 in Guangdong population. Guangdong Medical Journal (廣東醫(yī)學(xué)), 2006, 27 (8): 1131-1132

[34]Isada A, Hizawa N, Shimizu K, et al. The Arg16Glybeta2-adrenergic receptor polymorphism influences long term clinical responses to beta2-agonist. Arerugi, 2008, 57(6): 713-721

[35]Timofeeva MN, Kropp S, Sauter W, et al.CYP450 polymorphisms as risk factors for early-onset lung cancer: gender-specific differences. Carcinogenesis, 2009, 30 (7): 1161-1169

[36]Pachkoria K, Lucena MI, Molokhia M, et al. Genetic and molecular factors in drug-induced liver injury: a review. Curr Drug Saf, 2007, 2 (2): 97-112

[37]Wijnen PA, Limantoro I, Drent M, et al. Depressive effect of an antidepressant: therapeutic failure of venlafaxine in a case lacking CYP2D6 activity. Ann Clin Biochem, 2009, 46 (Pt 6): 527-530