抗?jié)⒔Y(jié)復(fù)發(fā)方對UC模型大鼠血漿TXB2、6-Keto-PGF1α 含量的影響

安賀軍 ，王新月 *，于 玫 ，沈 靜

（1.解放軍第306醫(yī)院中醫(yī)科，北京 100101；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院消化科，北京100700；3.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029）

·方藥研究·

抗?jié)⒔Y(jié)復(fù)發(fā)方對UC模型大鼠血漿TXB2、6-Keto-PGF1α含量的影響

安賀軍1，王新月2*，于 玫3，沈 靜3

（1.解放軍第306醫(yī)院中醫(yī)科，北京 100101；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院消化科，北京100700；3.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029）

目的 探討抗?jié)⒔Y(jié)復(fù)發(fā)方對潰瘍性結(jié)腸炎(UC)模型大鼠血漿TXB2、6-Keto-PGF1α含量及TXB2/6-Keto-PGF1α比值的影響。方法 用三硝基苯磺酸（TNBS）復(fù)制實驗性大鼠UC模型，隨機分為模型組、正常組、奧沙拉秦鈉膠囊劑（暢美）對照組、抗?jié)⒔Y(jié)復(fù)發(fā)方組。結(jié)果 給藥10 d后，兩個給藥組皆可降低血漿TXB2水平及TXB2/6-Keto-PGF1α比值；給藥 30 d后，西藥組血漿 TXB2水平及 TXB2/6-Keto-PGF1α比值低于中藥組(P＜0.01，P＜0.05）；停藥10 d后，中藥組TXB2/6-Keto-PGF1α比值低于西藥組(P＜0.01）。結(jié)論 抗?jié)⒔Y(jié)復(fù)發(fā)方與奧沙拉秦鈉膠囊劑（暢美）比較，發(fā)揮作用較晚，維持時間長，在抑制血小板活化方面遠(yuǎn)期效果優(yōu)于西藥暢美，可能在UC緩解期促進病情康復(fù)和減少復(fù)發(fā)方面發(fā)揮作用。

抗?jié)⒔Y(jié)復(fù)發(fā)方；潰瘍性結(jié)腸炎；TXB2；6-Keto-PGF1α；大鼠；黃芪；白術(shù)；蒲黃

潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative Colitis，UC）是一種以慢性炎癥和潰瘍形成為主要病理特點的消化道疾病。由于其患病率逐漸增加、高復(fù)發(fā)率和結(jié)腸直腸癌發(fā)生關(guān)系密切而成為目前研究熱點；本研究觀察了以益氣活血解毒立法的抗?jié)⒔Y(jié)復(fù)發(fā)方對三硝基苯磺酸（TNBS）誘發(fā)的UC模型大鼠血漿 TXB2、6-Keto-PGF1α含量及 TXB2/6-Keto-PGF1α比值的影響，探討其抗?jié)冃越Y(jié)腸炎復(fù)發(fā)的作用機制?，F(xiàn)將實驗方法及結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 清潔級健康雄性SD大鼠，體質(zhì)量160～200 g，由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK（京）2006-0006。

1.1.2 藥物 抗?jié)⒔Y(jié)復(fù)發(fā)方（生黃芪30 g，炒白術(shù)10 g，炒五靈脂 10 g，赤白芍各 10 g，生蒲黃 10 g，當(dāng)歸10 g，焦檳榔 10 g，煨木香 10 g，黃連 10 g，黃柏 10 g，連翹20 g），由北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院制劑室煎制；濃煎為生藥量5 g/mL灌胃用。奧沙拉秦鈉膠囊劑（暢美）：由天津力生制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H20000247，0.25 g/粒，蒸餾水配成混懸液，0.067 g/mL溶液，給藥劑量均按60 kg成年人體表面積換算。

1.1.3 試劑 2,4,6—三硝基苯磺酸（TNBS），為 Sigma公司產(chǎn)品，批號：074K007；水合氯醛，購自恒業(yè)中遠(yuǎn)化工有限公司。

1.1.4 儀器 離心機：北京醫(yī)用離心機廠生產(chǎn)，型號：LDZ5-2；Labsystems Dragon Wellscan MK-3 全自動多功能酶標(biāo)儀。

1.2 方法

1.2.1 造模[1-2]將大鼠正常飼養(yǎng)1周后，禁食24 h（不禁水），稱體質(zhì)量，100 mg/L水合氯醛（3.8 mL/kg）腹腔麻醉，將一直徑2 mm、長約12 cm的橡膠管由大鼠肛門輕緩插入，深約8～10 cm，然后以0.85 mL TNBS/乙醇液（120 mg/kg TNBS+體積分?jǐn)?shù) 50%乙醇 0.25 mL）,約 5 s灌注完畢；將造模鼠倒置8 min后（盡量減少造模試劑流出）放回籠內(nèi)。

1.2.2 分組及給藥方法 動物分組及給藥 將120只大鼠隨機分為4組，其中模型組、奧沙拉秦鈉膠囊劑（以下簡稱西藥組）、抗?jié)⒔Y(jié)復(fù)發(fā)方（以下簡稱中藥組）每組各30只，均予造模；正常組30只，不予造模，但與其余3組同步禁食、麻醉，同步飼養(yǎng)觀察。于造模后第2天起：正常組、模型組以蒸餾水灌胃，每次1 mL/只；西藥組以暢美混懸液按0.266 g/（kg·d）劑量給藥；中藥組以抗?jié)⒔Y(jié)復(fù)發(fā)方按 20 g/（kg·d）劑量給藥，均每天 1 次，共 40 d。

1.2.3 標(biāo)本處理 分別于給藥后10、30 d和停藥后10 d，各組隨機取10只大鼠，以100 mg/L水合氯醛（3.8 mL/kg）腹腔麻醉，腹主動脈取血，2%EDTA-Na2-0.7%NaCl（2%乙二胺四乙酸二鈉鹽及0.7%氯化鈉）抗凝，立即分離血漿，放-70℃冰箱保存待檢。

1.2.4血漿 TXB2、6-Keto-PGF1α含量測定 大鼠血漿TXB2、6-Keto-PGF1α試劑盒，購自蘇州醫(yī)學(xué)院血栓和止血研究室。按放射免疫分析試劑盒說明書操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 13.0 for Windows統(tǒng)計軟件。組間比較用單因素方差分析，多個樣本均數(shù)比較用重復(fù)測量數(shù)據(jù)的方差分析，采用LSD檢驗方法。

2 結(jié)果

2.1 各組血漿TXB2含量的比較

模型組造模10 d時，血漿TXB2含量顯著升高，與正常組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；給藥30 d后，西藥組含量顯著降低，與中藥組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；停藥10 d時中藥組含量明顯降低，與西藥組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表1。

表1 各組UC模型大鼠血漿TXB2含量的比較（±s，pg/mL）

表1 各組UC模型大鼠血漿TXB2含量的比較（±s，pg/mL）

注：與正常組比較 *P＜0.05；與西藥組比較◆P＜0.01，△P＞0.05。

組 別正常組模型組中藥組西藥組給藥后10 d 386.500±218.623 990.811±560.593*756.014±574.440 893.781±698.700給藥后30 d 388.415±218.625 409.213±337.622 728.711±324.030◆284.721±197.525停藥后10 d 390.325±218.622 240.341±170.122 248.531±139.831△230.372±92.982

2.2 各組血漿6-Keto-PGF1α含量比較

給藥10 d后，各組血漿6-Keto-PGF1α含量與正常組相比均升高，以西藥組升高明顯，與正常組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。給藥30 d后，模型組、西藥組含量下降，中藥組升高，與模型組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。停藥后 10 d時，各組含量均下降，中藥組、模型組、西藥組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表2。

2.3 各組血漿TXB2/6-Keto-PGF1α比值的比較

模型組造模10 d后，TXB2/6-Keto-PGF1α比值明顯高于正常組（P＜0.01）；中藥組給藥10 d后與同期各組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），停藥后10 d中藥組與各組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；結(jié)果見表3。

表2 各組UC模型大鼠血漿6-Keto-PGF1α含量的比較（±s，pg/mL）

表2 各組UC模型大鼠血漿6-Keto-PGF1α含量的比較（±s，pg/mL）

注：與正常組比較*P＜0.05；與模型組比較△P＜0.05；與西藥組、中藥組比較□P＜0.05。

組 別正常組模型組中藥組西藥組給藥后10 d 37.531±13.060 56.746±24.952 57.963±33.581 80.084±41.575*給藥后30 d 35.380±13.066 44.792±18.701 62.555±19.673△65.426±13.681△停藥后10 d 34.445±13.066□41.391±15.981 58.072±32.431 49.103±10.792

表3 各組UC模型大鼠血漿TXB2/6-Keto-PGF1α比值的比較（±s）

表3 各組UC模型大鼠血漿TXB2/6-Keto-PGF1α比值的比較（±s）

注：與正常組比較*P＜0.01；與停藥10 d后各組比較△△P＜0.01。

組 別正常組模型組中藥組西藥組給藥后10 d 8.929±5.847 17.905±1.320*13.295±5.262 12.191±4.090給藥后30 d 9.426±5.847 10.615±8.782 11.117±3.353 6.761±1.844□停藥后10 d 8.913±4.525 7.099±1.356 3.598±0.558△△6.973±0.651□

3 討論

潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病與血小板活化關(guān)系密切，血小板增多是炎癥性腸病活動期的一種標(biāo)志[3]；血小板活化臨床上常用的標(biāo)記物有血栓烷A2（TXA2）、血小板表面纖維蛋白原受體（PAC-1）、血小板第四因子（PF4)及血小板α-顆粒膜糖蛋白（CD62P）等，其中血栓烷A2(TXA2)常作為測定血小板活化程度的敏感與特異性高的指標(biāo)之一。TXA2具有很強的促進血管收縮和血小板聚集的作用，可導(dǎo)致血管內(nèi)廣泛微血栓形成，并能加速和促進血小板活化，血栓烷B2(TXB2)是TXA2的無活性代謝產(chǎn)物，研究[4-5]表明，UC患者體內(nèi)TXB2升高，血小板黏附、聚集等功能增強。6-酮前列腺素 F1α(6-keto-PGF1α)是前列環(huán)素(PGI2)的代謝產(chǎn)物，PGI是血管內(nèi)皮細(xì)胞合成和釋放的一種抗血小板聚集和具有舒張血管功能的生物活性物質(zhì)，TXA2和PGI2形成了一對生理作用完全相反的調(diào)控系統(tǒng)，是機體內(nèi)調(diào)節(jié)血小板聚集的一對生物活性物質(zhì)，二者的平衡是影響血小板動能的主要因素。正常情況下兩者處于動態(tài)平衡，從而維持著血液的正常狀態(tài)，它們的活性很強，PGI2和TXA2在體內(nèi)均不穩(wěn)定，迅速代謝生成 TXB2與 6-Keto-PGF1α，TXB2及 6-keto-PGF1a分別是這兩者的穩(wěn)定代謝產(chǎn)物，通過檢測血漿TXB2和6-keto-PGF1α的水平，可以間接了解TXA2和PGI2的水平，借以評價機體內(nèi)血液循環(huán)狀態(tài)。

抗?jié)⒔Y(jié)復(fù)發(fā)方以黃芪、白術(shù)為君，黃芪益衛(wèi)固表，補中氣，升清氣，托瘡毒，利小便，能補脾胃之不足，并促進局部內(nèi)瘍之收斂；白術(shù)甘溫補中，苦溫燥濕，既能補脾益氣，又能燥濕利水。赤、白芍伍用，白芍?jǐn)筷?，赤芍涼血，二藥相合，而退血分之熱，白芍柔肝，赤芍行血，二藥參合，止痛之功益彰。?dāng)歸補血活血，消腫止痛，排膿生肌。五靈脂炒用氣味俱厚，專走血分，功?；钛叙?，行氣止痛；蒲黃生用辛香行散，性涼而利，專入血分，功善涼血止血，活血消瘀。二藥伍用，通利血脈、活血散瘀、消腫止痛力量增強。焦檳榔消積行氣力強，用于治療瀉痢后重。黃連配黃柏燥濕清熱，涼血解毒而止大便膿血。木香行腸胃滯氣，疏肝開郁，和胃健脾。木香配黃連，以木香行腸胃滯氣而除里急后重，兼能芳香化濕。連翹清熱解毒，消癰散結(jié)，前人稱之為瘡家圣藥，用于熱毒蘊結(jié)所致的各種瘡毒癰腫，與潰結(jié)之內(nèi)瘍病機暗合。

3.1 抗?jié)⒔Y(jié)復(fù)發(fā)方對UC模型大鼠血漿TXB2含量的影響

在UC模型大鼠炎癥急性期（造模10 d時）血小板被大量激活，血液處于高凝狀態(tài)；在中期（治療30 d時）西藥在降低血漿TXB2含量方面作用明顯，優(yōu)于中藥組；在緩解期（停藥10 d時）中藥下調(diào)血漿TXB2含量方面作用明顯，說明中西藥物均有抑制血小板活化作用，從而減輕血管收縮和血小板聚集狀態(tài)；中藥起效較西藥慢，在緩解期抑制血小板活化明顯，這一點可能在減少潰結(jié)復(fù)發(fā)方面發(fā)揮作用。

3.2 抗?jié)⒔Y(jié)復(fù)發(fā)方對UC模型大鼠血漿6-Keto-PGF1α含量影響

在UC急性炎癥期血小板活化，機體為調(diào)節(jié)血小板聚集狀態(tài)，造模各組血漿6-Keto-PGF1α含量升高，以維持TXB2及6-keto-PGF1a兩者相對的動態(tài)平衡，此階段西藥抗血小板聚集和舒張血管功能明顯。在中期，大鼠應(yīng)激或調(diào)節(jié)能力減弱，模型組含量下降；此期西藥作用減弱，西藥組含量亦下降；中藥組在藥物作用下上調(diào)。中西藥物在抗血小板聚集和舒張血管方面均有作用，西藥較中藥發(fā)揮作用早，但持續(xù)時間短；中藥發(fā)揮作用較晚，但維持時間長。

3.3 抗?jié)⒔Y(jié)復(fù)發(fā)方對UC模型大鼠血漿TXB2/6-Keto-PGF1α 比值的影響

在UC模型大鼠炎癥急性期血小板被大量激活，血液處于高凝狀態(tài)；中西藥物在抑制血小板活化方面均發(fā)揮作用，但西藥作用明顯；在中期西藥繼續(xù)發(fā)揮作用，緩解期作用減弱；中藥發(fā)揮作用起效慢，在急性期和中期與西藥相比作用不明顯，緩解期作用明顯，將比值降到正常以下并低于模型組和西藥組。中藥發(fā)揮作用較晚，維持時間長，在抑制血小板活化方面遠(yuǎn)期效果優(yōu)于西藥，可能在UC緩解期促進病情康復(fù)和減少復(fù)發(fā)方面發(fā)揮作用。

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Influence of prescription for ulcerative colitis relapse on content of TXB2and 6-Keto-PGF1αin rats with US

AN He-jun,WANG Xin-yue,YU Mei,SHEN Jing
（306 Hospital of People's Liberation Army,Beijing 100101,China）

ObjectiveTo investigate influence of prescription for ulcerative colitis anti-relapse(PUCA)on content of TXB2and 6-Keto-PGF1αand ratio of TXB2/6-Keto-PGF1αin blood plasma of ulcerative colitis model in rats.MethodsThe rat models were duplicated with TNBS and randomly divided into model group,normal group,olsalazine sodium control group and PUCA group.ResultsPlasma 6-Keto-PGF1αcontent in both treatment groups was advanced,but not significantly difference（P＞0.05）.After treating 10 days,TXB2content and ratio of TXB2/6-Keto-PGF1αin both treatment groups were reduced.After treating 30 days,TXB2content and ratio of TXB2/6-Keto-PGF1αin western medicine group was remarkably lower than these in Chinese medicine group(P＜0.01 and P＜0.05).After stopping treatment 10 days,the ratio in Chinese medicine group was obviously lower than that in western medicine group(P＜0.05).ConclusionCompared with western medicine,theprescription iseffectivelater,butmaintenancetimemore,and strongerto inhibitthe active blood platelet,which suggeststhattheChinese medicine maybe plays a role in promoting convalescence and decreasing the relapse in the remission period of UC.

prescription for anti-relapse of UC;ulcerative colitis;TXB2,6-Keto-PGF1α;ratio of TXB2/6-Keto-PGF1α;rats;Radix astragal;white atractylodes rhizome;cattail pollen

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674-070X.2010.11.005.015.03

2010-11-02

國家自然科學(xué)基金資助項目（30572390）。

安賀軍（1969-），女，北京人，醫(yī)學(xué)博士，主治醫(yī)師，主要從事中醫(yī)內(nèi)科學(xué)專業(yè)臨床、科研工作。

* 王新月，女，主任醫(yī)師，博士研究生導(dǎo)師，Tel：010-84013361。

（本文編輯 彭芝配）