冷鮮牛肉中蜂房哈夫尼亞菌(Hafnia alvei)的分離與鑒定

張旭東,閆超杰,孫 劍,姚 佳,蘇明明,王植朔,盧行安

(1.錦州出入境檢驗(yàn)檢疫局,遼寧錦州 121013;2.遼寧出入境檢驗(yàn)檢疫局,遼寧大連 116001)

蜂房哈夫尼亞菌(Hafnia alvei)是革蘭陰性兼性厭氧桿菌,存在于人和動(dòng)物的糞便、自然界水和土壤中,是腸桿菌科哈夫尼亞屬唯一的一種細(xì)菌。該菌屬于條件致病菌,在特定的條件下可引起多種腸道感染疾病,同時(shí)與傷口感染、化膿、腹瀉等多種疾病有關(guān)[1]。蜂房哈夫尼亞菌在腐肉中的分離幾率很高,該菌的存在是造成肉制品腐敗變質(zhì),影響風(fēng)味和保存時(shí)間的因素之一。蜂房哈夫尼亞菌喜好厭氧潮濕的環(huán)境,真空包裝的冷藏環(huán)境是其適合的生長(zhǎng)環(huán)境,在開始階段,蜂房哈夫尼亞菌存在于肉及肉制品的比例是比較低的,但是經(jīng)過冷藏儲(chǔ)存,溫度達(dá)到它能生長(zhǎng)的最低溫度4℃左右之后,其他非低溫耐受細(xì)菌的生長(zhǎng)受到損害抑制,而蜂房哈夫尼亞菌仍能正常生長(zhǎng)繁殖,其數(shù)量便急速增加,影響肉制品的風(fēng)味和品質(zhì)。本文從真空包裝的出口冷鮮牛肉沙門氏菌檢驗(yàn)過程中分離出1株可疑菌,通過對(duì)其形態(tài)特征、生理生化特性的觀察和檢測(cè),同時(shí)結(jié)合BBL Crystal半自動(dòng)微生物檢測(cè)儀進(jìn)行鑒定,結(jié)果為蜂房哈夫尼亞菌。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種來源 冷鮮真空包裝牛肉,錦州綠源肉業(yè)公司提供。

1.1.2 培養(yǎng)基與試劑 緩沖蛋白凍水(BPW)、SC增菌液、TTB增菌液、DHL瓊脂、BS瓊脂、TSI(三鐵糖)瓊脂、EH瓊脂、科瑪嘉顯色平板、沙門菌生化試劑套裝,北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司;BBL Crystal半自動(dòng)檢測(cè)革蘭陰性菌試劑盒,BD公司。

1.1.3 儀器 電熱恒溫培養(yǎng)箱、BBL Crystal半自動(dòng)微生物檢測(cè)儀、數(shù)碼熒光生物顯微鏡。

1.2 方法[2-3]

1.2.1 取樣 在無菌環(huán)境中,打開冷鮮牛肉包裝,用已滅菌的剪刀、鑷子在牛肉的表層和里層肌肉進(jìn)行取樣,取樣時(shí)避開脂肪組織。取樣點(diǎn)要全面有代表性,取冷鮮牛肉100 g左右混勻作為樣品備用。

1.2.2 增菌培養(yǎng) 取冷鮮牛肉樣品25 g放入225 mL BPW增菌液中進(jìn)行初步增菌,(36±1)℃培養(yǎng)8～18 h,轉(zhuǎn)移培養(yǎng)物10 mL至100 mL SC增菌液,(36±1)℃培養(yǎng)20 h進(jìn)行2次增菌培養(yǎng),同時(shí)轉(zhuǎn)移培養(yǎng)物10 mL至100 mL TTB增菌液(42±1)℃培養(yǎng)20 h。

1.2.3 分離培養(yǎng) 取增菌液1接種環(huán),三段畫線法涂布BS、HE、科瑪嘉顯色平板進(jìn)行菌落分離培養(yǎng)。平板(36±1)℃培養(yǎng)24～48 h。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌落觀察

觀察BS、HE、科瑪嘉顯色平板培養(yǎng)后分離出的單個(gè)菌落的特征,選擇HE平板上灰黑色至灰綠色、圓形、濕潤(rùn)、光滑的菌落和科瑪嘉顯色平板上的灰白色、濕潤(rùn)、光滑的菌落,挑選可疑菌落底層穿刺斜面劃線接種TSI,TSI經(jīng)24 h培養(yǎng)結(jié)果為斜面紅色不產(chǎn)酸,底層黃色產(chǎn)酸,不產(chǎn)氣,H2S陰性。染色鏡檢為革蘭陰性無芽胞、桿狀細(xì)菌,見圖1。

圖1 蜂房哈夫尼亞菌革蘭染色結(jié)果和瓊脂上的菌落特征Fig.1 The result of Gram stain and the conlony characteristics on agar of H.alvei

2.2 Crystal微生物半自動(dòng)檢測(cè)儀輔助鑒定

取三糖鐵培養(yǎng)物接種革蘭陰性腸桿菌科發(fā)酵生化鑒定試劑盒,用Crystal微生物半自動(dòng)檢測(cè)儀輔助檢測(cè)鑒定,鑒定結(jié)果為蜂房哈夫尼亞菌,見表1。

2.3 生化鑒定

結(jié)合伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)選擇典型試驗(yàn)做生化試驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)[4],結(jié)果見表2。

表1 微生物半自動(dòng)檢測(cè)儀鑒定結(jié)果Table 1 The identification result ofBBL Crystal

續(xù)表

表2 蜂房哈夫尼亞菌生化鑒定結(jié)果Table 2 The physiological and biochemical characteristics ofHafnia alvei

3 結(jié)論與討論

本文綜合形態(tài)鑒定、生化試驗(yàn)和BBL半自動(dòng)微生物檢測(cè)儀的檢測(cè)結(jié)果,判定從冷鮮牛肉中分離出的可疑菌為蜂房哈夫尼亞菌。該菌屬于條件致病菌,在特定條件下可引起多種腸道疾病,在生活中就有該菌引起腹瀉等疾病的病例[5]。此外,

該菌還可以引起禽畜肉的腐爛變質(zhì),對(duì)冷鮮保存的禽畜肉的質(zhì)量風(fēng)味造成影響。因此,為了保證肉類品質(zhì)并預(yù)防該菌對(duì)人類健康的潛在危害,肉品加工生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)定期對(duì)該菌進(jìn)行嚴(yán)密監(jiān)控,各有關(guān)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)在冷鮮肉的檢驗(yàn)過程中也應(yīng)提高警惕,加大蜂房哈夫尼亞菌的檢驗(yàn)力度。

[1] R.Podschun,A.Fischer,U.Ullmann.Characterisation ofHafnia alveiisolates from human clinical extra-intestinal specimens：haemagglutintns,serum resistance and siderophore synthesis[J].The Pathollgical Society of Great Britain and Ireland,2001,50：208-214.

[2] 劉秀梅,郭云昌,劉桂華,等.食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)GB/T4789.4-2008[S],2008.

[3] 曹際娟,盧行安,鄭秋月,等.食品微生物學(xué)與現(xiàn)代檢測(cè)技術(shù)[M].大連：遼寧師范大學(xué)出版社,2006：41-60.

[4] R.E.布坎南,N.E.吉本斯.伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)(第8版)[M].北京：科學(xué)出版社,1984：388.

[5] M.John Albert,Khorshed Alam,Moyenul Islam,et al.Hafnia alvei,a Probable Cause of Diarrhea in Humans[J].Infection and Immunity,Apr.,1991,59(4)：1507-1513.