水牛初乳中免疫因子和生長(zhǎng)因子質(zhì)量濃度的研究

陳瑞芳，王士長(zhǎng)，李興芳，姜偉偉，陳小亮，黃怡

(廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，南寧530005)

水牛初乳中免疫因子和生長(zhǎng)因子質(zhì)量濃度的研究

陳瑞芳，王士長(zhǎng)，李興芳，姜偉偉，陳小亮，黃怡

(廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，南寧530005)

研究水牛初乳中免疫球蛋白IgG，IgA和類胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF-I）質(zhì)量濃度的變化特點(diǎn)。用ELISA方法檢測(cè)水牛分娩后7 d內(nèi)初乳樣品的IgG，IgA和IGF-I質(zhì)量濃度，同時(shí)檢測(cè)3種成分在水牛常乳中的質(zhì)量濃度。結(jié)果表明：分娩后3 h的水牛初乳IgG，IgA和IGF-I質(zhì)量濃度最高，分別為78.22 g/L，8.83 g/L和1 099.78 μg/L，常乳中的質(zhì)量濃度分別為1.87 g/L，0.71 g/L和358.30 μg/L。IgG在泌乳的第1天內(nèi)下降91.18%，IGF-I下降57.02%，IgA在頭2 d內(nèi)下降85.84%，之后緩慢下降接近常乳。因此，水牛泌乳最初的1～2 d內(nèi)初乳含有豐富的IgG，IgA和IGF-I，具有很高的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。

水牛初乳；IgG；IgA；IGF-I；ELISA法

0 引 言

牛初乳含有豐富的免疫因子和生長(zhǎng)因子，其中IgG，IgA和IGF-I是最受關(guān)注的三種活性成分，被證實(shí)對(duì)人和動(dòng)物有免疫調(diào)節(jié)、促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育以及降低糖尿病患者血糖等功能，因而成為開(kāi)發(fā)功能性食品和提取相關(guān)活性物質(zhì)的原料[1-3]。國(guó)內(nèi)外對(duì)荷斯坦牛初乳的研究報(bào)道較多，但到目前為止，在水牛初乳方面研究較少，未見(jiàn)有關(guān)于生物活性物質(zhì)含量特點(diǎn)的研究報(bào)道。水牛乳品質(zhì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于荷斯坦牛乳，市場(chǎng)前景廣闊[4]，因此，水牛乳產(chǎn)品開(kāi)發(fā)成為近年來(lái)乳制品研究的熱點(diǎn)之一。本研究以目前存欄數(shù)最多的摩×本雜交水牛為研究對(duì)象，系統(tǒng)地分析水牛分娩后7d內(nèi)初乳的IgG，IgA和IGF-I質(zhì)量濃度的變化規(guī)律以及在常乳中的質(zhì)量濃度，對(duì)正確認(rèn)識(shí)水牛初乳的生物學(xué)特性和利用價(jià)值、合理開(kāi)發(fā)水牛初乳資源有重要的意義。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 材料

泌乳水牛：摩×本三代雜交水牛，產(chǎn)犢第2～5胎次，分娩后7日內(nèi)和處于泌乳中期各10頭。

采樣地點(diǎn)：廣西南寧雄牛牧業(yè)有限責(zé)任公司那馬奶水牛生產(chǎn)基地。

動(dòng)物管理：泌乳水牛每日定量采食兩次，日糧由粗料和精料混合組成，粗料主要是新鮮象草和青貯全株玉米，少量的玉米芯和豆腐渣。舍飼飼養(yǎng)，牛舍為開(kāi)放式，有運(yùn)動(dòng)場(chǎng)，泌乳水牛每天可以在水塘里浸泡7 h左右。手工擠奶，每天兩次。

主要儀器和試劑：瑞士Sunrise酶標(biāo)儀；IgG和IgA測(cè)試盒：美國(guó)UCL公司；IGF-I測(cè)試盒：美國(guó)RB公司。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集和處理

分別于水牛分娩后3h，12h及1，2，3，4，5，6，7 d采集乳樣品各100 mL/頭，另外采集常乳樣品100 mL/頭，立即于-20℃保存。測(cè)定前，樣品于4℃解凍，將同一時(shí)間段的樣品等量混合均勻，并于4℃，6 000 r/min離心20 min，去除脂肪，取上清分析各項(xiàng)指標(biāo)。

1.2.2 指標(biāo)測(cè)定

IgG和IgA質(zhì)量濃度采用競(jìng)爭(zhēng)抑制酶標(biāo)免疫分析法，IGF-I含量采用雙抗體夾心ELISA法。初乳上清分別用相應(yīng)的試劑盒處理，在酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)處讀數(shù)，用Curve Expert 1.3軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算結(jié)果。IgG，IgA和IGF-I的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。生物看出，水牛初乳的密度隨泌乳時(shí)間增加而呈下降趨勢(shì)實(shí)異的。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Microsoft Office Excel 2003軟件處理并繪制曲線圖。

2 結(jié)果與分析

水牛初乳的IgG，IgA和IGF-I質(zhì)量濃度變化及在常乳中的質(zhì)量濃度如圖2～圖4所示。

由圖2可以看出，IgG在3h水牛初乳中的質(zhì)量濃度最高，為78.22 g/L，是常乳的41.83倍。IgG在泌乳的第1天內(nèi)下降91.18%，之后下降幅度顯著減小，并逐漸接近常乳。常乳中IgG的質(zhì)量濃度很低，為1.87 g/L。

由圖3可以看出，3 h水牛初乳中的IgA質(zhì)量濃度最高，為8.83 g/L，是常乳的12.44倍。IgA在頭2 d內(nèi)下降85.84%，之后緩慢下降接近常乳。IgA在常乳中的質(zhì)量濃度為0.71 g/L。

圖4表明，3h水牛初乳中的IGF-I質(zhì)量濃度最高，達(dá)到1 099.78 μg/L，是常乳的3.07倍。 第1天內(nèi)IGF-I的下降幅度為57.02%，之后持續(xù)緩慢下降至接近常乳。IGF-I在常乳中保持較高水平，為358.30 μg/L。

3 結(jié)果與討論

動(dòng)物的品種、泌乳階段、年齡以及健康狀態(tài)等因素影響免疫球蛋白和IGF在乳中的質(zhì)量濃度[5]。與其他品種奶牛的初乳相比，在相同的泌乳時(shí)間里，除了24h外，水牛初乳其他時(shí)段的IgG質(zhì)量濃度均高于中國(guó)荷斯坦奶牛[6]和新疆褐牛[7]，但在72 h內(nèi)比瑞典黑白花牛低[8]；而IgA質(zhì)量濃度則比瑞典黑白花[8]牛高5～10倍，和胡松華[9]報(bào)道的結(jié)果接近，但3～6d內(nèi)的水平不如曾林等[10]報(bào)道的結(jié)果；盡管初乳的IGF-I質(zhì)量濃度在不同的研究報(bào)道中差距很大[8，11-12]，但是水牛初乳的IGF-I水平都遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于這些研究結(jié)果。本次研究還發(fā)現(xiàn)，水牛常乳的IgG，IgA以及IGF-I質(zhì)量濃度均高于國(guó)內(nèi)外黑白花牛等品種奶牛常乳中的水平。乳中的生物活性成分主要來(lái)自母體血液，部分IGF-I還可以由乳腺組織合成。血清中的IGF-I質(zhì)量濃度與能量平衡、黃體的活性以及胰島素水平有關(guān)，這些指標(biāo)的變化水平因品種而異[11]。水牛體內(nèi)合成和轉(zhuǎn)移這些生物活性物質(zhì)的能力與其養(yǎng)分代謝、激素水平、乳腺功能和繁殖性能等的關(guān)系，以及這些生物活性物質(zhì)合成在營(yíng)養(yǎng)和分子水平上的調(diào)控途徑，是進(jìn)一步的研究方向。這些方向的突破，對(duì)生物活性物質(zhì)的生物反應(yīng)器研究有重大意義。

水牛在泌乳最初的1～2d內(nèi)的初乳含有豐富的IgG，IgA和IGF-I，具有很高的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。

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Studies on contents of immune factors and growth factor in water buffaloes colostrums

CHEN Rui-fang，WANG Shi-chang，LI Xing-fang，JIANG Wei-wei，CHEN Xiao-liang，HUANG Yi
(College of Animal Science and Technology，Guangxi University,Nanning 530005,China)

Changes in immunoglobulin IgG，IgA and insulin-like growth factor-I(IGF-I)concentration in water buffaloes colostrums were studied.Colostrums within 7days postpartum and mature milk were detected IgG,IgA and IGF-I level by using ELISA kits.The results shown that the highest contents appeared in 3h postpartum by 78.22 g/L,8.83 mg/mL and 1 099.78 μg/L,respectively.They were 1.87 g/L,0.71 g/L and 358.30 μg/L in mature milk,respectively.IgG and IGF-I descended by 91.18%and 57.02%within the initial 1st day,respectively.IgA decreased by 85.84%within the first 2 days.After this,the concentrations got close to that of the mature milk by slow descending extents.Conclusion:Water buffaloes colostrums is rich in IgG,IgA and IGF-I within 1～2 days postpartum and is worth of exploitation.

water buffalo colostrums;IgG;IgA;IGF-I;ELISA

TS252.59

A

1001-2230（2010）03-0019-03

2009-10-21

廣西科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（桂科轉(zhuǎn)0718005-5B）。

陳瑞芳（1983-），女，碩士研究生，從事水牛初乳的開(kāi)發(fā)利用研究。

黃怡