劉無(wú)逸,陸愛(ài)云
●研究報(bào)道Short Communications
補(bǔ)充精氨酸對(duì)過(guò)度訓(xùn)練大鼠肌糖原、AMPK及GLUT-4的影響
劉無(wú)逸,陸愛(ài)云
目的:觀察體外補(bǔ)充L-精氨酸對(duì)過(guò)度訓(xùn)練大鼠的作用。方法:9周齡SD雌性大鼠40只,隨機(jī)分為安靜對(duì)照組(A組)、大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組(B組)、大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)服L-精氨酸組(C組)、過(guò)度訓(xùn)練組(D組),其中D1組為過(guò)度訓(xùn)練組,D2組為過(guò)度訓(xùn)練加服L-精氨酸組。上坡跑訓(xùn)練9周后測(cè)各組白腓腸肌和比目魚(yú)肌的肌糖原含量、AMPK活性和肌膜GLUT-4含量。結(jié)果:B組和D1組糖原含量較A組有升高趨勢(shì),但無(wú)顯著性;C組顯著高于A組(P<0.01);D2組大鼠比目魚(yú)肌糖原含量較A組顯著升高(P<0.01);D2組較D1組升高,但未達(dá)到顯著水平(P>0.05)。B組、C組和D2組AMPK活性顯著高于A組(P<0.01);D2組較D1組有明顯增加,差異顯著(P<0.05)。B組、C組和D2組GLUT-4含量分別較A組增加100%左右,D1組增加11%;D2組較D1組增加57%。結(jié)論:體外補(bǔ)充L-精氨酸可能有利于延緩或治療過(guò)度訓(xùn)練。
大鼠;過(guò)度訓(xùn)練;L-精氨酸;肌糖原;AMP-活化的蛋白激酶;葡萄糖載體蛋白-4
目前,過(guò)度訓(xùn)練在運(yùn)動(dòng)員中仍是較為常見(jiàn)的運(yùn)動(dòng)性疾病之一。研究認(rèn)為,高水平運(yùn)動(dòng)員常在他們的職業(yè)生涯中發(fā)生過(guò)度訓(xùn)練,如徑賽運(yùn)動(dòng)員發(fā)生率達(dá)60%,澳大利亞國(guó)家游泳隊(duì)在半年的賽季中發(fā)生率是21%,印度國(guó)家藍(lán)球隊(duì)在6周集訓(xùn)期間發(fā)生率是33%,半職業(yè)的足球運(yùn)動(dòng)員在5個(gè)月的賽季以后發(fā)生率在50%以上。盡管過(guò)度訓(xùn)練的發(fā)病率較高,但產(chǎn)生的機(jī)制目前尚未完全明了,許多研究認(rèn)為與代謝紊亂關(guān)系密切,Petibois等[1]將其稱(chēng)為代謝紊亂綜合癥(a metabolism alteration process syndrome)。
左旋精氨酸(L-arginine,L-Arg)是體內(nèi)合成一氧化氮(NO)的天然底物,即L-Arg和O2在一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的作用下,生成NO和瓜氨酸(L-Cit)。NO在體內(nèi)具有廣泛的生理作用,其中對(duì)骨骼肌葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)具有促進(jìn)作用。近年來(lái)在對(duì)心、肺、肝等臟器缺血/再灌注的研究中發(fā)現(xiàn),L-Arg可明顯減輕再灌注損傷[2],同時(shí),L-Arg也被用于燒傷、心力衰竭等多種臨床疾病。本實(shí)驗(yàn)的目的是觀察體外補(bǔ)充(口服)L-Arg對(duì)過(guò)度訓(xùn)練大鼠骨骼肌糖原含量及部分調(diào)節(jié)因素的影響,探討過(guò)度訓(xùn)練發(fā)生的可能機(jī)制。
1.1.1 大鼠分組9周齡Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠40只,由中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,以國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類(lèi)動(dòng)物飼料(由上海海軍醫(yī)學(xué)研究所動(dòng)物中心提供)每籠5只(鼠籠體積40 cm×27 cm×22 cm)飼養(yǎng),自由進(jìn)食、飲水,室溫20℃~25℃,相對(duì)濕度45%~55%,每天光照時(shí)間12 h。大鼠隨機(jī)分4個(gè)大組:對(duì)照組(A組),7只;大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組(B組),7只;大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)服L-精氨酸組(C組),8只;過(guò)度訓(xùn)練組(D組),18只;再分D1組9只;D2組(服L-精氨酸組),9只。
1.2.1 主要試劑與材料肌糖原測(cè)定試劑盒由南京建成生物研究所提供;SAMSPeptide為UPSTATE產(chǎn)品;[γ-32P]ATP,福瑞生物工程公司核酸研究室提供;兔抗鼠GLUT-4,Chemicon產(chǎn)品;辣根酶標(biāo)記山羊抗兔IgG,北京中山生物技術(shù)有限公司;三磷酸腺苷(ATP),Sigma產(chǎn)品;Whatman P81濾紙,Whatman公司產(chǎn)品;L-精氨酸,上海醫(yī)藥集團(tuán)上?;瘜W(xué)試劑公司提供;一氧化氮測(cè)定試劑盒和一氧化氮合酶測(cè)定試劑盒,南京建成生物研究所提供。1.2.2測(cè)試方法稱(chēng)取肌肉組織120mg用眼科剪剪碎后,加緩沖液A(210mM蔗糖,2mMEGTA,40mM NaCl,30mM HEPES,pH 7.4,蛋白酶抑制劑)3 mL,置試管內(nèi)冰水浴中用MICCRA D-8型勻漿器15 s×2次勻漿。取1 mL勻漿上清液置-78℃冰箱保存?zhèn)溆茫溆鄤驖{液經(jīng)超速離心提取肌膜。
肌糖原含量、肌NO含量、肌NOS活性均按南京建成生物研究所提供的試劑盒說(shuō)明書(shū)操作,蛋白定量采用BCA法;肌AMP-活化的蛋白激酶(AMPK)活性的測(cè)試根據(jù)Derave等[5]方法進(jìn)行;肌膜葡萄糖載體蛋白-4葡萄糖載體蛋白-4(GLUT-4)蛋白測(cè)定按Dubouchaud等[6]的方法進(jìn)行。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 9.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(D)表示,計(jì)數(shù)資料用百分率表示,組間比較分別采用單因素方差分析。顯著性標(biāo)準(zhǔn)為P<0.05,P<0.01為差異具有高度顯著性。
9周訓(xùn)練后,D1和D2組大鼠毛發(fā)聳立無(wú)光澤,活動(dòng)減少,反應(yīng)遲緩,后期不能完成120min的運(yùn)動(dòng)時(shí)間;但體重與其他各組比較差異均無(wú)顯著性(P>0.05)(見(jiàn)圖1)。
圖1 大鼠訓(xùn)練期間體重變化Figure 1 Changes in rats body weightduring breeding
大鼠在9周運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練后比目魚(yú)肌安靜肌糖原含量有明顯的升高(見(jiàn)表2),與A組比較C組和D2組達(dá)到顯著和非常顯著水平(P<0.05;P<0.01);D2組與D1組比較糖原含量雖有升高,但尚未達(dá)到顯著水平。
9周訓(xùn)練后白腓腸肌糖原含量有增加趨勢(shì),其中C組與A組比較有非常顯著的差異,P<0.01(見(jiàn)表2);D2組與D1組比較糖原含量雖有升高,但未達(dá)到顯著水平。
表2 各組大鼠肌糖原含量(m g/g肌組織)Table 2 Themusc le glycogen contents in various groups(mg/g wetm uscle)
9周耐力訓(xùn)練后,大鼠比目魚(yú)肌AMPK活性有升高的趨勢(shì),B組與A組比較差異具有顯著性(P<0.05)。D1組肌AMPK活性與B組比較肌AMPK活性下降的差異非常顯著(P<0.01)。D2組肌AMPK活性較D1組提高,差異顯著(P<0.05)(見(jiàn)表3)。
在大鼠白腓腸肌,AMPK活性B組、C組和D2組均較A組增加,差異均非常顯著(P<0.01)。D1組與B組比較,活性下降具有非常顯著意義(P<0.01);D2組與D1組比較,活性明顯增加,差異非常顯著(P<0.01)。腓腸肌AMPK活性D2組較D1組提高,具有非常顯著的差異(P<0.01)(見(jiàn)表3)。
各組比目魚(yú)肌肌膜GLUT-4蛋白質(zhì)印跡試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2(S為參照樣本的膜蛋白)。用Image-pro plus分析軟件對(duì)各條帶的分析結(jié)果見(jiàn)表4。
9周耐力訓(xùn)練使B組、C組、D1組和D2組大鼠比目魚(yú)肌肌膜GLUT-4蛋白積分光密度分別較A組增加115%、92%、11%和75%;D1組GLUT-4蛋白積分光密度較B組下降48%,D2組下降19%;D2組與D1組比較GLUT-4蛋白積分光密度增加了57%。
表3 各組AMPK活性(nm ol·m in-1·mg-1 prot)Table 3 Muscle AMPKactivity in variousg loups(nmol·m in-1·mg-1 pro)
圖2 各組比目魚(yú)肌GLUT-4蛋白含量(S為參照)Figure 2 sarcolemma GLUT4 protein contens in soleus
表4 各組比目魚(yú)肌GLUT-4蛋白含量比較Table 4 sa rcolemma GLUT4 protein contens in soleus
經(jīng)9周耐力訓(xùn)練,B組和C組比目魚(yú)肌和白腓腸肌NOS活性較A組有一定提高(見(jiàn)表5),但均未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;D1組和D2組較B組降低,具有顯著性(P<0.05);D2組與D1組之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
表5 各組肌NOS活性(U/mg prot)Table 5 Musc le NOS activity in various gloups(U/mg prot)
9周耐力訓(xùn)練后B組和C組大鼠比目魚(yú)肌NO含量略有升高,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見(jiàn)表6);D1組和D2組比目魚(yú)肌NO含量基本維持在A組水平。在白腓腸肌,B組和C組肌NO含量較A組升高,差異均非常顯著,P<0.01;D1組和D2組肌NO含量分別較B組和C組降低,D1組差異具有顯著性,P<0.05。
L-Arg被認(rèn)為是免疫營(yíng)養(yǎng)成分之一,在體內(nèi)可通過(guò)NO合成途徑和誘導(dǎo)生長(zhǎng)激素、胰島素及高血糖素等作用于免疫系統(tǒng)的途徑發(fā)揮生理作用[7],被用于嚴(yán)重的創(chuàng)傷、感染和應(yīng)激等。
過(guò)度訓(xùn)練是運(yùn)動(dòng)員在運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練中較容易出現(xiàn)的一種運(yùn)動(dòng)性疾病,是長(zhǎng)期應(yīng)激狀態(tài)下的一種病理狀態(tài),主要表現(xiàn)為身體機(jī)能低下,其產(chǎn)生的機(jī)制較為復(fù)雜,Petibois等[1]將其稱(chēng)之謂代謝紊亂綜合癥,其依據(jù)之一認(rèn)為過(guò)度訓(xùn)練與肌糖原耗竭有關(guān)[8]。我們將L-Arg用于過(guò)度訓(xùn)練大鼠,觀察對(duì)肌糖原含量及部分調(diào)節(jié)因素可能產(chǎn)生的影響。
表6 各組肌NO含量(um ol/g pro t)Table 6 Musc le NO contents in various gloups(umol/g p rot)
實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充L-Arg可提高正常訓(xùn)練大鼠和過(guò)度訓(xùn)練大鼠肌糖原的含量,比目魚(yú)肌的表現(xiàn)尤為明顯,機(jī)制可能與NO可促進(jìn)骨骼肌葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)。肌細(xì)胞對(duì)葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)有兩條途徑,即胰島素依賴(lài)途徑和非胰島素依賴(lài)途徑。據(jù)Balon和Nadler[9]的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),L-Arg可引起趾長(zhǎng)伸肌NO濃度升高,增加大鼠骨骼肌基礎(chǔ)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)。L-Arg的這種作用可被L-NG-甲基精氨酸(L-NMMA,NOS的阻斷劑)抑制,且不受胰島素濃度的影響,表明NOS/NO參與骨骼肌葡萄糖代謝是通過(guò)非胰島素依賴(lài)的途徑進(jìn)行的[10-11]。
長(zhǎng)期耐力運(yùn)動(dòng)可促進(jìn)NOS活性的提高[12],增加NO的合成,但我們發(fā)現(xiàn)在過(guò)度訓(xùn)練狀態(tài)下,大鼠肌NOS活性較正常訓(xùn)練組顯著下降,其值甚至低于安靜對(duì)照組的水平。補(bǔ)充L-Arg對(duì)其活性無(wú)激活作用,顯示在過(guò)度訓(xùn)練狀態(tài)下,NOS的活性受到抑制。
正常情況下,NOS的活性受AMP-活化的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的調(diào)節(jié)。近年來(lái)的研究表明,AMPK能感知細(xì)胞能量代謝狀態(tài)的改變,并通過(guò)影響細(xì)胞物質(zhì)代謝的多個(gè)環(huán)節(jié)維持細(xì)胞能量供求平衡。當(dāng)細(xì)胞ATP減少時(shí),AMPK一方面抑制糖原、脂肪和膽固醇合成,減少能量消耗;另一方面促進(jìn)脂肪酸氧化、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn),增加能量的產(chǎn)生。因此,被認(rèn)為是調(diào)節(jié)細(xì)胞能量代謝的開(kāi)關(guān)[13]。
實(shí)驗(yàn)顯示過(guò)度訓(xùn)練大鼠肌AMPK活性與正常訓(xùn)練組比較受到明顯抑制,補(bǔ)充L-Arg可顯著提高肌AMPK的活性,顯示L-Arg對(duì)肌AMPK活性具有一定的保護(hù)作用,但這一現(xiàn)象從肌收縮促進(jìn)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)增加的信號(hào)鏈角度很難解釋。
Fryer等學(xué)者認(rèn)為[14]AMPK可通過(guò)NOS依賴(lài)的途徑促進(jìn)骨骼肌的葡萄糖攝取。他們發(fā)現(xiàn)NOS活性隨著葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)而增加,NOS抑制劑可阻斷AMPK活化引起的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)作用。在體外,nNOS和eNOS能被AMPK磷酸化,其產(chǎn)物NO可激活鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶,然后催化cGMP的合成。用鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶抑制劑可防止這些細(xì)胞由AICAR(5-Am inoim idazole-4-carboxam ide 1-β-D-ribofuranoside,為AMPK刺激劑)刺激引起的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)。這些結(jié)果表明AMPK在誘導(dǎo)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)方面,NOS是重要因素之一。目前認(rèn)為這一信號(hào)鏈由肌收縮發(fā)動(dòng),隨著肌組織中AMP含量增加使AMPK活化,后者可引起NOS磷酸化(活化),增加NO的合成,NO進(jìn)一步活化鳥(niǎo)氨酸環(huán)化酶,加快cGMP形成,促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)GLUT-4向肌膜轉(zhuǎn)位,提高葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)[15]??梢?jiàn),NO位于AMPK的下游,對(duì)AMPK不產(chǎn)生直接的作用,最大的可能是通過(guò)間接的途徑減輕AMPK抑制因子對(duì)AMPK活性的抑制,提高AMPK的活性。如通過(guò)cGMP對(duì)AMPK產(chǎn)生一定的調(diào)節(jié)作用。
盡管長(zhǎng)期耐力訓(xùn)練可提高NOS活性,過(guò)度訓(xùn)練狀態(tài)下,NOS活性受到抑制,但實(shí)驗(yàn)中補(bǔ)充L-Arg對(duì)正常訓(xùn)練大鼠或過(guò)度訓(xùn)練大鼠比目魚(yú)肌和白腓腸肌的NO含量無(wú)顯著性的改變。這可能與NO分子在體內(nèi)半衰期短(約5 s左右)、作用迅速,我們采用的分析方法不夠靈敏有關(guān)。
肌細(xì)胞攝取葡萄糖需葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(GLUT)作為載體,其中載體蛋白4(Glucose transporter type 4,GLUT-4)是骨骼肌葡萄糖跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的主要載體,葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)被認(rèn)為是肌細(xì)胞葡萄糖代謝的限速步驟。安靜時(shí),GLUT-4主要分布在細(xì)胞內(nèi)的管泡狀結(jié)構(gòu)(TGN區(qū))內(nèi),當(dāng)受到胰島素或肌收縮刺激時(shí),可向胞膜和T管轉(zhuǎn)移,增加肌膜表面GLTU-4的含量。
我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)過(guò)度訓(xùn)練大鼠肌膜GLUT-4含量較正常訓(xùn)練組減少48%,補(bǔ)充L-Arg可使過(guò)度訓(xùn)練大鼠肌膜GLUT-4含量增加57%,但在正常訓(xùn)練組大鼠這一作用不明顯。前者可能因?yàn)檫^(guò)度訓(xùn)練時(shí),AMPK的活性受到抑制,對(duì)NOS的活化作用減弱。補(bǔ)充外源性L(fǎng)-Arg,增加了NOS的作用底物,有利于NO的產(chǎn)生,促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)GLUT-4向肌膜轉(zhuǎn)位,提高胞膜的GLUT-4含量。后者可能由于肌AMPK、NOS活性正常,增加底物對(duì)進(jìn)一步提高NO的意義不大。因此,在正常訓(xùn)練狀態(tài)下,補(bǔ)充外源性L(fǎng)-Arg對(duì)提高肌膜GLUT-4含量的作用不明顯。
過(guò)度訓(xùn)練產(chǎn)生的機(jī)制復(fù)雜,肌細(xì)胞能量代謝障礙可能是重要因素之一。從肌細(xì)胞對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)角度出發(fā),過(guò)度訓(xùn)練狀態(tài)下雖然肌AMPK活性、NOS活性受到抑制,肌膜GLUT-4含量降低,但糖原含量基本正常。補(bǔ)充L-Arg可在一定程度上改善AMPK的活性,提高肌膜GLUT-4含量,增加肌糖原的含量,可能有利于延緩或治療過(guò)度訓(xùn)練。實(shí)驗(yàn)顯示過(guò)度訓(xùn)練在肌糖原含量基本正常情況下仍可發(fā)生,可能提示肌細(xì)胞對(duì)糖利用的障礙,值得進(jìn)一步研究。
體外補(bǔ)充L-精氨酸可增加過(guò)度訓(xùn)練大鼠肌糖原的含量,并可提高肌AMPK活性,增加肌膜GLUT-4含量,可能有利于延緩或治療過(guò)度訓(xùn)練。
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Effect of Supp lying L-arginine on Skeletal M uscle G lycogen,AMPK Activity and Sarcolemm a GLUT4 Protein Contentsin Overtraining Rats
LIUWuyi,LU Aiyun
(School of Sport&Exercise Science,ShanghaiUniversity of Sport,Shanghai200438,China)
Objective:The purpose of the present study was to observe effect of supplying L-arginine on skeletalmuscle glycogen contents,AMP-activated protein kinase(AMPK)activity and sarcolemma Glucose transporter type 4(GLUT4)protein contents in overtraining rats.Methods:Forty SD ratswere randomly divided into group A(sedentary),group B(underwentendurance exercise 60minutes/day),group C(underwentendurance exercise 60minutes/day, supplying L-arginine)and group D(underwentendurance exercise 120minutes/day),group D subdivided group D1(without L-arginine)and group D2(with L-arginine).All exercise groups were trained 6 days/wk for 9 weeks.Muscle glycogen,sarcolemma GLUT4 contents and muscle AMPK activity were determined after the 9-week training.Results:Muscle glycogen contents in group B and group D1 exist a trend of increase compared with that in group A,but not significantly(P>0.05).Muscle glycogen contents in soleus showed a significant higher level in group C and group D2 compared with that in group A(P<0.01), and itshowed a trend of increase in group D2 compared with that in group D1,but not significantly(P>0.05).Muscle AMPK activity in group B,group C and group D2 increased significantly compared with that in group A,and it showed a significanthigher level in group D2 compared with that in group D1(P<0.01).Sarcolemma GLUT4 contents in group B,group C and group D2 increased about 100%compared with that in group A,but it only increased 11%in group D1.And that increased by 57%in group D2 as compared with that in group D1.Conclusion:Supplying with L-Arg could increase muscle glycogen cotents, muscle AMPK activity,and sarcolemma GLUT4 content in overtraining rats,whichmightbe helpful in staying or treating overtraining.
rat;overtraining;L-arginine;muscle glycogen;GLUT4;AMPK
G 804.7
A
1005-0000(2010)04-0340-04
2010-04-20;
2010-05-12;錄用日期:2010-05-15
上海市教委課題(項(xiàng)目編號(hào):06IZ004);上海市重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào):S30802)
劉無(wú)逸(1955-),男,浙江寧波人,上海體育學(xué)院副教授。
上海體育學(xué)院運(yùn)動(dòng)科學(xué)學(xué)院,上海200438。
從第7周開(kāi)始,配制濃度為1%的L-精氨酸溶液供C組和D2組大鼠每晚飲用(溶液量略多于給藥前3個(gè)晚上的最大飲水量),連續(xù)3周。
1.1.2 大鼠訓(xùn)練方案購(gòu)入大鼠經(jīng)一周適應(yīng)后,參照Bedford等的大鼠運(yùn)動(dòng)負(fù)荷標(biāo)準(zhǔn)[3],采用BCPF-98型生物醫(yī)學(xué)動(dòng)物跑臺(tái)(由杭州立泰科技有限公司提供)進(jìn)行上坡跑訓(xùn)練。訓(xùn)練時(shí)間為9周,其中前4周為遞增負(fù)荷,后5周維持大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng),每周訓(xùn)練6天。
大鼠過(guò)度訓(xùn)練模型根據(jù)葉劍飛等[4]采用的方法適當(dāng)改進(jìn)后進(jìn)行,具體方案見(jiàn)表1。
表1 9周大鼠訓(xùn)練方案
Table 1 9-week train ing pro tocol for rats
訓(xùn)練周次/(m·min-1)坡度/%時(shí)間/(m·min-1)速度/(m·min-1)坡度/%時(shí)間/(m·min-1)1 15 0 30 15 0 30 2 20 5 45 20 5 60 3 25 10 45 25 10 90 4 30 15 45 30 15 90 5 30 15 60 30 15 120 6 31 15 60 31 15 120 7 32 15 60 32 15 120 8 33 15 60 33 15 120 9 35 15 60 35 15 120 B組和C組D組速度
1.1.3 大鼠處死和取材9周訓(xùn)練結(jié)束后36 h,各組大鼠于安靜狀態(tài)下斷頭處死,均取比目魚(yú)肌和腓腸肌白肌部分,液氮速凍后置-78℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>
天津體育學(xué)院學(xué)報(bào)2010年4期