HPLC-MS測定大黃魚中環(huán)丙沙星與恩諾沙星含量

【摘要】:目的:建立HPLC-MS法同時測定大黃魚糜樣中環(huán)丙沙星與恩諾沙星含量，并對部頒方法進(jìn)行可行性改進(jìn)。方法:色譜柱Zorbax SB Aq(2.1x100mm，3.5m)，流動相:0.1%甲酸溶液—乙腈=(82:18).ESI源，正離子模式，環(huán)丙沙星母離子332子離子(288/245)，恩諾沙星母離子360子離子(316/245)。結(jié)果:在5～200ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系好，檢測限1.0μg/Kg(S/N=10)，環(huán)丙沙星與恩諾沙星的平均回收率分別為96.5%、100.2%，RSD分別為1.0%、1.3%。結(jié)論:本方法簡單快速，可用于同時測定大黃魚中環(huán)丙沙星與恩諾沙星含量。

【關(guān)鍵詞】:HPLC-MS;大黃魚;環(huán)丙沙星;恩諾沙星

【中圖分類號】R122.1+1【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1007-8517 (2010) 02-035-2

大黃魚肉質(zhì)細(xì)膩，味道鮮美，為閩東特產(chǎn)。近年來野生大黃魚數(shù)量逐漸稀少，人工養(yǎng)殖大黃魚規(guī)模逐年擴(kuò)大。為有效控制人工養(yǎng)殖大黃魚的質(zhì)量，提高百姓的生活水平，我所開展水產(chǎn)品藥物殘留的檢測。目前測定大黃魚中環(huán)丙沙星與恩諾沙星的殘留主要是采用農(nóng)業(yè)部頒布的1077號公告-1-2008[1]。我們針對其方法進(jìn)行部分改進(jìn)，使得方法更加準(zhǔn)確、快速、簡便。

1儀器與試藥

Agilent1200-6410 LC/MS QQQ(美國);CP225D電子分析天平(北京塞多利斯);IKA MS3震蕩器(德國);R201BL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申生);TGL-40B離心機(jī)(上海安亭);BF2000-M氮?dú)獯蹈蓛x(北京八方世紀(jì))。

環(huán)丙沙星對照品(130451-200302中檢所)

恩諾沙星對照品(C:14861400德國Dr.Ehrenstorfer公司)

甲酸(色譜純，美國TEDIA公司)甲醇(色譜純，德國MERCK公司)乙腈(色譜純，德國MERCK公司)

其余試劑均為分析純

2色譜條件

色譜柱:ZorbaxSBAq (2.1x100mm，3.5μm)

流動相:0.1%甲酸溶液—乙腈=(82:18)

柱溫:25.0℃流速:0.3ml/min進(jìn)樣量:10μL

A色譜圖 大黃魚空白樣

B色譜圖 環(huán)丙沙星(前)與恩諾沙星(后)

3質(zhì)譜條件

離子化模式:電噴霧離子源(ESI)，正離子模式;

離子噴霧電壓:4KV 干燥氣:10L/min

干燥氣溫度:350℃霧化氣壓力:40psi

檢測條件見表一:

A:環(huán)丙沙星質(zhì)譜圖(288，245)B:恩諾沙星質(zhì)譜圖(316，245)

4大黃魚樣品前處理

取樣品5.0g±0.01g，加冰乙酸2mL，加乙腈20mL，振搖2min，4500轉(zhuǎn)/min離心5min，加15mL二氯甲烷，手動振搖并放氣，精密量取下層溶液10mL移入雞心瓶中，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加入1mL20%乙腈水溶液旋渦混合90秒，加入2mL乙腈飽和的正乙烷混合10秒，12000轉(zhuǎn)/min離心5min，取下層溶液用0.2μm濾膜過濾，取續(xù)濾液10μL進(jìn)樣。

5加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別稱取環(huán)丙沙星與恩諾沙星對照品適量，加甲醇制成1.0mg/mL的對照品儲備液。依次用甲醇制成濃度為5、10、20、40、100、200ng/mL的溶液按“4”項下方法進(jìn)行處理后進(jìn)樣。

環(huán)丙沙星回歸方程為:Y=5.1386X+1.07468R=0.9998

恩諾沙星回歸方程為:Y=0.11914X+0.2658R=0.9993

本實(shí)驗(yàn)的線性范圍為5～200ng/mL;

定量下限為1.0μg/Kg

檢出限為1.0μg/Kg(S/N=10)

6方法精密度

精密量取環(huán)丙沙星與恩諾沙星對照品儲備液適量，用甲醇制成濃度為20ng/mL的溶液加至空白大黃魚糜樣中。按“4”項下方法進(jìn)行處理后進(jìn)樣，重復(fù)進(jìn)樣6次。環(huán)丙沙星與恩諾沙星濃度的RSD(n=6)分別為0.65%、0.38%。

7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

因陽性樣品獲取不易，故取環(huán)丙沙星與恩諾沙星對照品儲備液適量，用甲醇制成濃度為20ng/mL的溶液6份空白大黃魚糜樣中，按“4”項下方法進(jìn)行處理后進(jìn)樣，環(huán)丙沙星與恩諾沙星濃度的RSD分別為1.2%、0.85%。

8加樣回收率

精密量取環(huán)丙沙星與恩諾沙星對照品儲備液適量，用甲醇制成濃度為20ng/mL的溶液6份空白大黃魚糜樣中，按“4”項下方法進(jìn)行處理后進(jìn)樣。環(huán)丙沙星與恩諾沙星的平均回收率分別為96.5%、100.2%，RSD分別為1.0%、1.3%

小結(jié)

(1)魚肉中的水分對本實(shí)驗(yàn)有干擾，部頒標(biāo)準(zhǔn)采用無水硫酸鈉除水，我們經(jīng)過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)結(jié)果無顯著變化。

(2)將前處理中取全量的乙腈提取液改為精密量取10mL，可提高方法的可操作性，得出的結(jié)果更準(zhǔn)確。

參考文獻(xiàn)

[1] 農(nóng)業(yè)部1077號公告-1-2008.水產(chǎn)品中17種磺胺類及15種喹諾酮類藥物殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法.