迷迭香酸對(duì)高尿酸血癥的影響

【摘要】:目的:研究迷迭香酸對(duì)次黃嘌呤為模型高尿酸血癥小鼠的影響。方法:選用尿酸生成的前體物質(zhì)次黃嘌呤(Hypoxanthine)，i.p小鼠造成高尿酸血癥動(dòng)物模型，首先探討造模劑的時(shí)效關(guān)系。應(yīng)用低、中、高三個(gè)劑量(50，100，200mg·kg-1·d-1)迷迭香酸，i.g給藥，連續(xù)3d。采用生化全自動(dòng)分析儀測(cè)定小鼠血清尿酸水平。結(jié)果:選擇次黃嘌呤i.p后45min血清尿酸水平的峰值造模，迷迭香酸(100，200mg·kg-1·d-1)均能顯著減少小鼠高尿酸血癥的血清尿酸水平，并有一定的量效關(guān)系，對(duì)正常小鼠的血清尿酸水平同樣也有顯著影響。結(jié)論:迷迭香酸對(duì)正常和高尿酸血癥小鼠均具有降低血清尿酸水平的作用。

【關(guān)鍵詞】:迷迭香酸;高尿酸血癥模型;次黃嘌呤;尿酸

【中圖分類號(hào)】R696+4【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1007-8517(2010)06-019-2

高尿酸血癥(hyperuricemia)是指血液中尿酸的濃度不正常升高的現(xiàn)象，系體內(nèi)核酸中嘌呤代謝紊亂或尿酸排泄減少所引起的一組疾病，是痛風(fēng)、腎結(jié)石等病癥的重要生化基礎(chǔ)。高尿酸血癥的臨床特點(diǎn)為高尿酸血癥及由此而引起的痛風(fēng)性急性關(guān)節(jié)炎反復(fù)發(fā)作、痛風(fēng)石沉積、痛風(fēng)石性慢性關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)畸形，常累及腎臟引起慢性間質(zhì)性腎炎和尿酸腎結(jié)石形成，有較高的危害性?？煞衷l(fā)性和繼發(fā)性兩大類，不論原發(fā)或繼發(fā)性，除少數(shù)由于藥物引起者可停用外，大多缺乏病因治療，因此不能根治。

目前常用促進(jìn)尿酸排泄的藥物和尿酸合成抑制藥物緩解高尿酸血癥，控制病情發(fā)展。別嘌呤醇是唯一在臨床上使用的黃嘌呤氧化酶和黃嘌呤脫氫酶抑制劑，可有效減少尿酸生成，但是，臨床使用發(fā)現(xiàn)此藥可誘發(fā)中毒性肝炎、胃腸道反應(yīng)、血液系統(tǒng)白細(xì)胞及血小板減少、變態(tài)反應(yīng)等多方面的不良反應(yīng)[1]。

國(guó)內(nèi)外在應(yīng)用民間草藥治療這方面疾病均有著悠久的歷史，從天然來(lái)源中尋找新型抗高尿酸血癥藥物依然是藥學(xué)研究的一個(gè)熱點(diǎn)[2-5]。迷迭香酸在植物中的分布較為廣泛，是一種天然抗氧化劑，有抗炎，抗病毒，抗菌，護(hù)肝，抑制腎小球細(xì)膜細(xì)胞增生，免疫抑制等多方面的藥理作用[6-7]。據(jù)尚雁君等[8]首次體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)迷迭香酸對(duì)黃嘌呤氧化酶有較強(qiáng)的抑制作用，從而顯著抑制尿酸生成。Masuka等[9]報(bào)道迷迭香酸對(duì)黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)的黃嘌呤氧化酶競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合的抑制作用。因此，本次實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立小鼠高尿酸血癥模型，研究迷迭香酸在體內(nèi)對(duì)高尿酸血癥的影響。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1動(dòng)物清潔級(jí)昆明種小鼠，雄性，體重(26±2)g，上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。使用前在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性飼養(yǎng)1W。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中自由飲水和供給小鼠專用飼料。

1.2儀器和試劑貝克曼LX20全自動(dòng)生化分析儀(美國(guó));迷迭香酸(Rosmarinic acid)、次黃嘌呤(Hypoxanthine)為Sigma產(chǎn)品;別嘌呤醇為廈門邁克制藥有限公司產(chǎn)品，批號(hào):07072501。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.10.8%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)配制稱取0.8克CMC-Na加少量蒸餾水濕潤(rùn)膨化調(diào)成糊狀，再加蒸餾水至100mL，加熱煮沸，邊攪拌直至全部溶解。

2.2別嘌呤醇(Allopurinol)和次黃嘌呤混懸液的制備精密稱取別嘌呤醇和次黃嘌呤，分別用0.8%CMC-Na配制混懸液，其濃度分別為0.5mg·mL-1和50mg·mL-1。

2.3迷迭香酸水溶液的制備精密稱取迷迭香酸，用蒸餾水配制成濃度為10mg·mL-1，再取部分依次對(duì)倍稀釋，配制濃度分別為5mg·mL-1和2.5mg·mL-1的溶液。

2.4次黃嘌呤i.p致小鼠高尿酸血癥模型的建立及造模時(shí)效關(guān)系的探討 [10-11]小鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，設(shè)正常對(duì)照組，其余3組i.p次黃嘌呤1000mg·kg-1造模，分別于造模后15、45、60min，摘除小鼠眼球從眼眶取血，血樣分別置于1.5mL的離心管中，在室溫下自然凝血1h，2500r·min-1離心5min，分離血清，采用貝克曼LX20全自動(dòng)生化分析儀及其原裝配套試劑測(cè)定血清尿酸濃度，結(jié)果見表1。

2.5迷迭香酸對(duì)小鼠高尿酸血癥模型的影響實(shí)驗(yàn)分組和給藥:正常小鼠實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為5組，每組10只，即生理鹽水組、迷迭香酸低、中、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照藥別嘌呤醇組。模型實(shí)驗(yàn)分為6組，即生理鹽水組、高尿酸血癥空白組、以及迷迭香酸低、中、高劑量組和別嘌呤醇組。開始時(shí)生理鹽水組和高尿酸血癥空白組每天均按20mL·kg-1劑量ig生理鹽水，連續(xù)3d，高尿酸血癥空白組在取血樣前45min用次黃嘌呤按1000mg·kg-1劑量i.p小鼠。正常小鼠組實(shí)驗(yàn)和模型組實(shí)驗(yàn)中，迷迭香酸低、中、高劑量組和別嘌呤醇組每天i.g給藥1次，連續(xù)3d，迷迭香酸低、中、高劑量分別為50，100，200mg·kg-1，別嘌呤醇劑量為10mg·kg-1，在最后1次給藥前15min，模型組同上ip次黃嘌呤，30min后從小鼠眼眶后靜脈叢進(jìn)行采血，測(cè)定血清尿酸水平。

2.6統(tǒng)計(jì)與處理結(jié)果以±s表示，采用spss11.5軟件包進(jìn)行方差檢驗(yàn)。

3結(jié)果

3.1次黃嘌呤腹腔注射致小鼠高尿酸血癥的造模時(shí)效關(guān)系結(jié)果見表1。

表1 次黃嘌呤造模的時(shí)效關(guān)系(±s，n=10)

組別 N/只劑量/mg·kg-1血清尿酸水平/μmol·L-1

生理鹽水

30min

45min

60 min 10

10 1000

10 1000

10 1000113.9±23.7

193.1±70.81)

377.7±122.72)3)

237.5±56.14)

注:與生理鹽水組比較1)P<0.05，與30min組比較2)P<0.001，與60min組比較3)P<0.05，與30min組比較4)P>0.05

表1顯示，腹腔注射次黃嘌呤后，30min后小鼠血清尿酸水平已明顯升高，45min小鼠血清尿酸水平最高，60min后又明顯下降。

3.2迷迭香酸對(duì)正常小鼠血清尿酸水平的影響結(jié)果見表2。

與生理鹽水組比較，迷迭香酸低劑量對(duì)正常小鼠血清尿酸水平無(wú)影響(P>0.05)，而高、中劑量組可降低正常小鼠血清尿酸水平(P<0.001，P<0.001)，且迷迭香酸低、中、高劑量組有顯著性差異(P<0.001，P<0.05)。迷迭香酸降低正常小鼠血清尿酸水平具有一定的量效關(guān)系。別嘌呤醇組可顯著地降低正常小鼠血清尿酸水平(P<0.001)，迷迭香酸高劑量組與別嘌呤醇組對(duì)正常小鼠血清尿酸水平的影響無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表2 迷迭香酸對(duì)正常小鼠血清尿酸水平的影響

(±s，n=10)

組別N/只劑量/mg·kg-1血清尿酸水平/μmol·L-1

生理鹽水 10

迷迭香酸 10

10

10

別嘌呤醇 10

50

100

200

10113.9±23.7

104.5±12.71)

62.0±15.32)3)

40.7±10.82)4)5)

30.8±8. 62)

注:與生理鹽水組比較1)P﹥0.05;2)P<0.001，迷迭香酸高劑量與低劑量組比較3)P<0.001，與中劑量組比較4)P<0.05，迷迭香酸高劑量與別嘌呤醇組比較5)P>0.05。

3.3迷迭香酸對(duì)高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響結(jié)果見表3。

在此實(shí)驗(yàn)條件下，高尿酸血癥模型空白組與生理鹽水組比較，血清尿酸水平具有非常顯著性差異(P<0.001)，表示實(shí)驗(yàn)造模較滿意。迷迭香酸中、高劑量組與高尿酸血癥空白組比較，均非常顯著地降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平(P<0.001，P<0.001)，且迷迭香酸低、中、高劑量組之間有顯著性差異(P<0.001，P<0.05)，而迷迭香酸低劑量對(duì)高尿酸血癥小鼠的血清尿酸水平無(wú)顯著性影響(P>0.05)。說(shuō)明迷迭香酸降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平，并具有一定的量效關(guān)系。別嘌呤醇非常顯著地降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平。迷迭香酸高劑量組與別嘌呤醇組有無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表3 迷迭香酸對(duì)高尿酸血癥小鼠尿酸水平的影響

(±s，n=10)

組別 N/只劑量/mg·kg-1血清尿酸水平/μmol·L-1

生理鹽水組 10

模型空白組 10

迷迭香酸 10

10

10

別嘌呤醇 10

50

100

200

10106.4±30.61)

382.3±73.1

352.8±65.22)

242.2±49.31)3)

150.6±46.81)4)

99.9±14.71)5)

注:與模型空白組比較1)P<0.001，2)P>0.05;迷迭香酸中劑量與低劑量組比較3)P<0.001，迷迭香酸高劑量與中劑量組比較4)P<0.001;迷迭香酸高劑量與別嘌呤醇組比較5)P>0.05。

4討論

近年來(lái)，由于人民生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)與食物來(lái)源的變化，痛風(fēng)的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，因此，加強(qiáng)對(duì)高尿酸血癥(痛風(fēng))疾病防治藥物的研究尤其是藥效學(xué)方面的研究日益重要。

高尿酸血癥的發(fā)生機(jī)制為尿酸生成增多或腎臟尿酸排泄減少。直接注射生成尿酸的前體物質(zhì)可以較簡(jiǎn)便地成功復(fù)制高尿酸血癥的動(dòng)物模型，可應(yīng)用此模型，對(duì)受試藥物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。本實(shí)驗(yàn)采用直接給小鼠腹腔注射生成尿酸的前體物質(zhì)次黃嘌呤為模型藥建立高尿酸血癥模型，并觀察其時(shí)效關(guān)系，其結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致，本實(shí)驗(yàn)表明45min峰值較高。小鼠i.p次黃嘌呤，造模時(shí)間短，可較簡(jiǎn)便地復(fù)制較穩(wěn)定的高尿酸血癥動(dòng)物模型，應(yīng)用此模型，將有助于篩選、評(píng)價(jià)受試藥物迷迭香酸抗高尿酸血癥的作用及藥效。

基于此模型的特點(diǎn)，本次實(shí)驗(yàn)在建立小鼠的高尿酸血癥模型后，又分別用迷迭香酸低劑量、中劑量、大劑量和別嘌呤醇i.g，測(cè)定各給藥組的血清尿酸水平，結(jié)果迷迭香酸能非常顯著地降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平，并具有一定的量效關(guān)系，且迷迭香酸高劑量組與陽(yáng)性對(duì)照藥別嘌呤醇組有無(wú)顯著差異，對(duì)正常小鼠實(shí)驗(yàn)也得到同樣的結(jié)果。

黃嘌呤氧化酶是人體內(nèi)產(chǎn)生尿酸過(guò)程中的關(guān)鍵酶，因此也是治療痛風(fēng)、腎結(jié)石時(shí)藥物的作用靶點(diǎn)。已知?jiǎng)e嘌呤醇是黃嘌呤氧化酶和黃嘌呤脫氫酶抑制劑，為治療高尿酸血癥(痛風(fēng))的重要藥品，本實(shí)驗(yàn)證明迷迭香酸與別嘌呤醇有相同的藥效。又據(jù)尚雁君等[8]首次體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)迷迭香酸對(duì)黃嘌呤氧化酶有較強(qiáng)的抑制作用，從而顯著抑制尿酸生成。本文從建立高尿酸血癥動(dòng)物模型的在體實(shí)驗(yàn)表明迷迭香酸在體內(nèi)也能抑制黃嘌呤氧化酶，從而降低血清尿酸水平。可見，迷迭香酸可能成為治療高尿酸血癥和痛風(fēng)的的黃嘌呤氧化酶抑制藥物。

迷迭香酸是一種天然抗氧化劑，有多方面的藥理作用，而且毒性低[12]，備受人們的關(guān)注，近年來(lái)有關(guān)迷迭香酸的藥理作用及其機(jī)理的研究不斷展開。我省民間常用腎茶Clerodendranthus spicatus[Thunb.]C.Y.Wu，系唇形科植物又稱貓須草，防治尿路結(jié)石、血尿等多種疾病[12-14]，迷迭香酸是腎茶的主要成分之一。迷迭香酸有抗氧化、抗炎、抗菌、抗過(guò)敏、護(hù)肝及改善腎功能等作用，這方面是別嘌呤醇常見不良反應(yīng)及用藥注意事項(xiàng)。因此，迷迭香酸如能作為防治高尿酸血癥，痛風(fēng)及尿路結(jié)石的藥物較為有利，本實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步研究提供依據(jù)。

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