針刺足三里對小鼠皮膚光老化的影響

[摘要]目的:研究針刺足三里對紫外線照射引起的無毛小鼠皮膚光老化模型皮膚組織丙二醛(MDA)含量、超氧化

物歧化酶(SOD)活力的影響。方法:實(shí)驗(yàn)選取2月齡健康昆明種無毛小鼠32只，雌雄各半，體重18～22g。隨機(jī)分成4組:正常對照組、模型組、針刺組、電針組，每組8只。用紫外線燈管模擬紫外線照射，造成無毛小鼠皮膚光老化，造模同時針刺小鼠足三里，采用生化分析方法測定SOD活性及MDA含量。結(jié)果:與對照組比較，模型組無毛小鼠皮膚組織SOD活性明顯降低(P<0.01)，MDA 含量明顯增加(P<0.05);與模型組比較，針刺組和電針組對SOD 活性有提高作用(P<0.05)，并可降低MDA 含量(P<0.01)。結(jié)論:針刺足三里對紫外線照射引起的無毛小鼠皮膚光老化具有保護(hù)作用。其機(jī)制可能是:一方面足三里本身具有清除自由基的作用;另一方面可以通過提高SOD活力來達(dá)到抗氧化的目的，從而達(dá)到抗皮膚光老化的目的。

[關(guān)鍵詞]足三里;針刺;皮膚;光老化;超氧化物歧化酶;丙二醛

[中圖分類號]R245.31[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]1008-6455(2010)01-0104-03

Influence to the skin-photoagedemouse caused by acupunctrueing Zusanli

JIN Xiao-zhe1 ，WU Jing-dong2 ，YAN Hai-hui2

(1.Hanfang Cosmetic and Artistic School，Yuanguang Digital Univresity of Korea;2.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine)

Abstract:Objective To investigate acusing Zusanli acupoint influence on the content ofMalondialdehyde(MDA) in the skin of hireless photoageing mice as well as the activity of Superoxide Dismutase (SOD) in their skin. Methods Healthy KM hireless mice were divided into four groups randomly and gavaged respectively， that is negative Control Group (A)，Model Group (B)，needling group(C)， electroacupuncture group(D)，The mice in B，C，D group were irradiated to simulate skin photoageing by long-term ultraviolet irradiation， at the same time ，the C，D group were acupunctured in Zusanli acupoint. While the changes of the contents of Malondialdehyde，as well as the activity of Superoxide Dismutase were measured by biochemical test method in each group of the experiment. Results Compared with the group A ， In model group ，the activity of SOD was decreased(P<0.01) ，while the content of the MDA was increased seriously(P<0.05). Compared with the group B， The contents of MDA in dermal in group C and D had difference with that in group B ，the activity of SOD in dermal in group C and D was increased(P<0.05)，while the content of MDA was reduced(P<0.01). Conclusions Acusing Zusanli acupoint has theprotective effect on the skin of the photoageing hairless mice. The mechanism may be that on one hand， Zusanli acupoint could eliminate free radicals itself， on the other hand ， by increasing the activity of SOD， it could inhibit the oxidative damages of ultraviolet and skin photoage.

Key words: Zusanli acupoint;acupuncture;skin; photoageing;superoxide dismutase (SOD);malondialdehyde(MDA)

隨著人們生活水平的提高，人們對美的要求也逐漸升溫，養(yǎng)顏駐顏已成為眾多學(xué)者研究的內(nèi)容。針灸美容越來越受到學(xué)者們的認(rèn)識，針灸美容作為一種常用的美容方法也逐漸得到認(rèn)可。為了探討針灸美容的機(jī)制，我們以紫外線照射引起的無毛小鼠皮膚光老化模型作為研究對象，進(jìn)行了本項(xiàng)研究，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1材料和方法

1.1材料:由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供健康昆明種小鼠，2個月齡，雌雄各半，體重18～22g。-70℃冰箱、勻漿器、離心機(jī)、恒溫水浴箱、分光光度計、各種手術(shù)用的醫(yī)療器械(均由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供)，針刺用針(0.5寸毫針)、韓氏WQl002F型多用電針儀由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)針灸教研室提供。10%水合氯醛，SOD、MDA測定試劑盒(均購于南京建成生物工程研究所)。

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)動物及分組:將32只無毛小鼠隨機(jī)分成4組:正常對照組、模型組、針刺組、電針組，每組8只。每組無毛小鼠按性別及組別分籠飼養(yǎng)，其中雄性鼠全部分籠飼養(yǎng)。在自然、相同環(huán)境下，常規(guī)飼食飲水，無不良因素影響，飼養(yǎng)1周適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境后開始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2.2造模前準(zhǔn)備:將實(shí)驗(yàn)用及針刺用小鼠稱重，然后腹腔注射10%水合氯醛麻醉(0.35ml/100g)，待麻醉后用繩將其仰面捆綁在鼠架上，用碘伏消毒足三里部位。

1.2.3針刺方法:針刺組:以32號0.5寸毫針針刺小鼠膝關(guān)節(jié)外側(cè)腓骨小頭下3.5mm“足三里”穴，直刺3.5mm，平補(bǔ)平瀉針法，留針10min，隔日一次，共持續(xù)30天。電針組:電壓l～3V，疏密波，頻率2～20Hz，刺激時間10min，以小鼠肢體或針柄微微顫動為度。隔日一次，共持續(xù)30天。

1.2.4造模方法:40W UVB 燈管4根(光譜集中在297nm )，UVA燈管2根(光譜集中在365nm)(燈管購于北京電光源研究所)并列穿插安裝到自制模擬日光箱中。將無毛小鼠分別放入自制照射盒中，將鼠盒分別放于照射箱的左前、左后、右前、右后位置，距離燈源20cm處，每次照射前輪換鼠盒位置，燈管預(yù)熱10min。開始第一天照射1h，2天后改為2h ，1周后改為3h，并保持該劑量直至結(jié)束。照射以5天為一個周期，間隔2天，再開始下一個周期。累計照射UVA 304.5J/cm2，UVB 6.3J/cm2，達(dá)到文獻(xiàn)記載紫外線輻照強(qiáng)度，照射時間總計為一個月。

1.2.5取材:造模一個月后，斷頸處死全部小鼠，立即取下背部照射處全層皮膚(不含皮下脂肪)，面積為2cm×3cm。冷凍于-70℃冰箱內(nèi)保存待測。

1.3 指標(biāo)測定:每個小鼠皮膚組織標(biāo)本取0.5g，在冰生理鹽水中漂洗，除去血液，用濾紙拭干，皮膚組織SOD活性的測定采用黃嘌呤氧化酶法，皮膚丙二醛含量分別采用硫代巴比妥酸法。各項(xiàng)指標(biāo)的具體測定原理、指標(biāo)測定前各試劑的配制方法以及每項(xiàng)指標(biāo)蛋白含量的測定方法等均按照試劑盒說明書進(jìn)行測定。用BECKMAN DU-600核酸蛋白分析儀測定每項(xiàng)指標(biāo)的吸光值，并根據(jù)試劑盒說明書提供的公式計算所需數(shù)據(jù)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理:所有數(shù)據(jù)均通過SPSS11.0軟件進(jìn)行處理，各組實(shí)驗(yàn)參數(shù)以x±s 表示。組間差異按方差分析進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，并用最小顯著差法(LSD法)作兩兩比較。

2結(jié)果

2.1 皮膚組織SOD活性測定:與正常對照組相比，模型組的SOD活性明顯低于正常對照組，且有顯著性差異，說明紫外線照射可使無毛小鼠皮膚組織SOD活性明顯受到抑制;針刺組和電針組與正常對照組相比均有顯著性差異。針刺組和電針組與模型組比較，SOD活性明顯提高，且有顯著性差異。說明針刺能夠使小鼠皮膚組織中SOD活性升高(見表1)。

2.2 皮膚組織MDA含量測定:與正常對照組相比，模型組的MDA含量明顯高于正常對照組，且有顯著性差異，說明紫外線照射可使無毛小鼠皮膚組織MDA含量明顯增加。針刺組和電針組與模型組比較，無毛小鼠皮膚組織MDA含量降低，且有顯著性差異。說明針刺能夠使小鼠皮膚組織中MDA含量降低(見表2)。

3討論

衰老(senescence)是一種多環(huán)節(jié)的生物學(xué)過程，使機(jī)體在退化時期功能下降和紊亂的綜合表現(xiàn)。簡而言之，衰老就是體內(nèi)各臟器細(xì)胞功能減低的現(xiàn)象[1]。皮膚衰老的形成與多種因素有關(guān)，隨著當(dāng)今醫(yī)學(xué)模式的轉(zhuǎn)變及人們保健意識的加強(qiáng)，運(yùn)用中醫(yī)學(xué)的理論采取一系列行之有效的方法對延緩皮膚衰老有一定積極作用。針灸從古至今一直是保健抗衰老的常用方法，而其中胃經(jīng)的足三里為常用穴位。

脾胃為氣血生化之源，后天之本，陽明胃經(jīng)多氣多血，善調(diào)氣血，且胃經(jīng)對于脾胃具有良好的雙相調(diào)節(jié)作用，從而調(diào)節(jié)整體的氣血陰陽使其達(dá)到平衡的狀態(tài)。而人體是一個有機(jī)整體，所謂“皮之不存，毛將焉附”，“有諸內(nèi)必形諸外”，機(jī)體的衰老必然導(dǎo)致皮膚的老化，皮膚衰老不僅是機(jī)體衰老的一部分，也是對臟腑氣血虛衰的一個外在反映。通過調(diào)整經(jīng)絡(luò)氣血陰陽達(dá)到抗衰老的目的，而“色隨氣華”。經(jīng)絡(luò)通暢，氣血充而不滯，陰平陽秘，必然可達(dá)“外濡腠理”之功。使面色悅澤濡潤，以達(dá)美容顏，悅肌膚，抗皮膚衰老之效。足三里穴為臨床上常用的要穴，古云“三里功多數(shù)不清”。此穴除用于臨床治療外，對于防病和抗衰老亦存重要的影響[2-3]。金元時代的李東垣就提倡“以胃合三里穴推而揚(yáng)之以伸元?dú)狻?，認(rèn)為刺激足三里穴有補(bǔ)益脾胃、振奮元?dú)庵?。因此針刺按摩足三里不僅具有抗整體衰老的作用，對于皮膚的衰老也是很有效的。

機(jī)體在正常代謝中，不可避免地產(chǎn)生許多自由基，這是一種強(qiáng)氧化劑，對機(jī)體起破壞作用，引發(fā)機(jī)體衰老。但因體內(nèi)同時存在著自由基防御系統(tǒng)，如超氧化物歧化酶，保護(hù)機(jī)體免受損傷[4]。年老時自由基防御系統(tǒng)下降，谷胱甘肽過氧化物酶等活性減弱，引起大量不飽和脂肪酸氧化，造成生物膜破壞，DNA突變，蛋白質(zhì)變性等細(xì)胞廣泛性損傷，從而促進(jìn)機(jī)體衰老。而針刺能顯著提高谷胱甘肽過氧化物酶活性，抑制脂質(zhì)過氧化。因此證明針刺具有抗氧化作用，增強(qiáng)酶的活性，消除自由基，抑制脂質(zhì)過氧化這一途徑而實(shí)現(xiàn)的。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果使自由基損傷學(xué)說得到驗(yàn)證，皮膚呈現(xiàn)光老化外觀，與紫外線照射引起自由基產(chǎn)生過多，抗氧化酶活性降低密切相關(guān)[5]。減少自由基的產(chǎn)生和清除老化代謝產(chǎn)物，提高抗氧化酶活性確實(shí)是目前延緩皮膚光老化的有效方法。因此，用中醫(yī)的方法清除自由基對抗光老化，正以其高效無副作用優(yōu)勢成為中醫(yī)學(xué)一個十分活躍的研究領(lǐng)域。從本次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果來看，針刺足三里能夠通過提高SOD活性達(dá)到清除自由基的目的，從而抗皮膚的光老化。其機(jī)制可能因?yàn)樽闳镅ㄎ槐旧砑词蔷哂袕?qiáng)身，保健抗衰老作用穴位，通過針的刺激，可達(dá)到清除體內(nèi)過多的自由基，延緩衰老的作用。

此外，本實(shí)驗(yàn)分組中加入了電針與手針的對照比較，是為了檢驗(yàn)這兩種常用針刺方法作用效果的異同。實(shí)驗(yàn)中電針組小鼠連接的韓氏電針儀，我們選用的波形為隨機(jī)變化的疏密脈沖波(頻率為2～100Hz交替)，電壓l～3V，以動物肢體微顫為度，是由于這種波形電脈沖的頻率隨時發(fā)生不規(guī)律的變化， 機(jī)體不易產(chǎn)生電刺激適應(yīng)現(xiàn)象[6]。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，電針組與手針組小鼠各項(xiàng)指標(biāo)均無顯著性差異，說明手針和電針這兩種干預(yù)手段的作用效果接近。

本研究以自由基學(xué)說和針灸理論為基礎(chǔ)，通過實(shí)驗(yàn)表明針灸足三里穴能夠使光老化小鼠皮膚組織中的丙二醛(MDA)含量減少，超氧化物歧化酶(SOD)活力增強(qiáng)，從而說明針刺足三里穴能夠改善皮膚組織新陳代謝，對皮膚衰老具有一定的拮抗作用。

綜上，我們認(rèn)為針刺足三里可通過激發(fā)機(jī)體的內(nèi)在調(diào)節(jié)能力，從而起到延緩衰老，具有防護(hù)紫外線引起的皮膚光老化作用，且從抗自由基角度分析，其抗光老化的作用機(jī)制可能是通過提高SOD活性減少自由基代謝產(chǎn)物的堆積以及其本身具有清除自由基的協(xié)同作用而發(fā)揮的。

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[收稿日期]2009-10-15 [修回日期]2009-12-20

編輯/李陽利