白藜蘆醇對自然衰老小鼠H₂O₂含量和ATP酶活力影響的實驗研究

[摘要]目的:研究白藜蘆醇是否對自然衰老小鼠的老化具有延緩作用。方法:健康4月齡昆明種小鼠12只，作為青年組對照組(A);健康18月齡昆明種小鼠60只，隨機分為五組:老年空白對照組(B)，老年陽性對照組(C)，老年絞股藍皂苷對照組(D)，老年白藜蘆醇高劑量組(E)，老年白藜蘆醇低劑量組(F)，以灌胃方式給藥，用生化分析方法測定過氧化氫(H₂O₂)含量和三磷酸腺苷(adenosine-triphosphate，ATP)酶活力。結(jié)果:與青年對照組比較，其余五個老年組小鼠血清中H₂O₂含量均增高，皮膚組織中ATP酶的活力均明顯減弱。結(jié)論:白藜蘆醇對自然衰老小鼠的老化具有延緩作用。

[關(guān)鍵詞]白藜蘆醇;自然衰老;自由基;過氧化氫;ATP酶

[中圖分類號]Q813.1[文獻標識碼]A [文章編號]1008-6455(2010)01-0063-02

Effect of resveratrol on content of H₂O₂ and activities of ATP enzyme of naturally senile mice

WANG Pei， WU Jing-dong，ZHANG Hui-shu，LI Dong-zi

(Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，Liaoning，China)

Abstract:ObjectiveTo study if resveratrol have function on delaying naturally senile mice or not.Methods12 kind of Kunming age in four-month female small mice contrast a group as youth(A)，60 kind of Kunming age in eighteen- month female small mice at random divides 5 group， 12 for a group: Old age blank group(B)，old age masculine group(C)，old age gypenoside group(D)， resveratrol high dose(E)，resveratrol low dose(F). Filling the stomach with medicine. Determine the content of H₂O₂ and the activities of ATP enzyme by the biochemistry analysis method.ResultsCompares with the youth group， the other five old age group can enhance the content of H₂O₂ in the serum and weaken the activities of ATP enzyme in the skin organization.ConclusionResveratrol have function on delaying naturally senile mice.

Key words:resveratrol;natural aging;free radical;H₂O₂;adenosine-triphosphate enzyme

白藜蘆醇(resveratro1，Res)， 又叫三羥基芪，是一種植物雌激素，已發(fā)現(xiàn)其存在于70余種植物及其制品中。大量的研究表明[1]，白藜蘆醇具有多方面有益于人類健康的重要生物藥理活性，包括抗腫瘤、抗心血管疾病、治療突變、抗氧化、抗菌抗炎、保肝、誘導細胞凋亡及雌激素調(diào)節(jié)等重要的生理功能。本實驗探索一定劑量的白藜蘆醇是否具有對自然衰老小鼠具有延緩衰老的作用，為研究和開發(fā)延緩衰老的藥物提供實驗依據(jù)。

1資料和方法

1.1實驗動物及分組方法:選用健康4月齡昆明種小鼠12只，作為青年對照組(A);健康18月齡昆明種小鼠60只，作為老年組，再隨機分為五組:老年空白對照組(B)，老年陽性對照組(C)，老年絞股藍皂苷對照組(D)，老年白藜蘆醇高劑量組(E)，老年白藜蘆醇低劑量組(F)，每組12只，每組小鼠均為雌性，由遼寧中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。

1.2實驗藥物及給藥方法

1.2.1 實驗藥物:市售白藜蘆醇(購于成都曼斯特生物科技有限公司)，臨用前以0.5%羧甲基纖維素(沈陽纖維素廠)作為溶媒，置4℃冰箱備用。絞股藍皂苷(購自成都曼斯特生物科技有限公司)。維生素EC顆粒(國藥準字H11022348北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司)。0.9%生理鹽水(國藥準字h22022056吉林省廣春藥業(yè)有限公司)。

1.2.2 給藥方法:A組:給予生理鹽水(20ml/kg);B組:給予生理鹽水(20ml/kg);C組:給予維生素EC混懸液(30mg/kg);D組:給予絞股藍皂苷混懸液30mg/kg;E組:給予白藜蘆醇混懸液30mg/kg;F組:給予白藜蘆醇混懸液10mg/kg。以上操作每日一次，共進行30天。每隔7天稱量小鼠體重，隨其體重加減灌胃量。

1.3 取材方法:第31天采用眼眶取血法，離心制備血清。取小鼠下腹部的全層皮膚(不含皮下脂肪)，制備成組織勻漿。

1.4 主要試劑和儀器:H₂O₂、ATP酶活性測定試劑盒，均購于南京建成生物工程研究所。各項指標的測定均按照試劑盒說明書進行測定，采用化學比色法。

BLG10電子秤、DY89-Ⅱ電動玻璃勻漿機、AnKeTDL-5-A離心機、水浴箱、酶標儀(美國)等設備及其它實驗器材均由遼寧中醫(yī)學院中心實驗室提供。

1.5 統(tǒng)計學處理:所有數(shù)據(jù)均通過SPSS11.5 版本軟件進行處理，各組實驗參數(shù)以x±s表示，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果與分析

與青年對照組比較，五個老年各組小鼠血清中H₂O₂含量顯著增高，分別是P﹤0.01，P﹤0.05， P﹤0.05， P﹤0.05， P﹤0.01;與老年空白組比較，老年陽性對照組、絞股藍皂苷組、白藜蘆醇高劑量組和白藜蘆醇低劑量組均可降低H₂O₂含量，分別是P﹤0.01，P﹤0.01， P﹤0.01，P﹤0.05，以上均有統(tǒng)計學意義。(見表1)。

與青年對照組比較，其余五個老年各組小鼠皮膚組織中ATP酶的活力均明顯減弱，分別是P﹤0.01，P﹤0.05，P﹤0.05，P﹤0.05，P﹤0.01;與老年空白組比較，其他用藥老年組均可提高ATP酶的活力，分別是P﹤0.01，P﹤0.05，P﹤0.01，P﹤0.05，以上均有統(tǒng)計學意義。(見表2)。

3討論

衰老是任何生物生命過程的必然規(guī)律，是“在成熟后已高度分化的系統(tǒng)走向組織紊亂以及趨異分化的過程” [2]?，F(xiàn)已明確皮膚衰老是內(nèi)源性因素和外源性因素共同作用的結(jié)果，其中內(nèi)源性衰老(自然衰老)是不可避免的漸進過程，外源性衰老(如風、光、熱、化學物質(zhì)等)中以光衰老最為明顯。本項實驗主要針對皮膚的內(nèi)源性衰老進行研究。

本實驗所用白藜蘆醇為虎杖提取物，虎杖具有清熱解毒、祛風利濕的功用，《醫(yī)林纂要》記載其“堅腎、強陽益精、壯筋骨、增氣力”，其作為我國傳統(tǒng)的天然中草藥，含有多種藥理活性成分，有擴張血管、抑制血小板、降血脂、抗氧化等廣泛的作用[3]。白藜蘆醇最初是作為葡萄屬植物的抗逆物質(zhì)-- 植物抗毒素(phytoalexin)而被發(fā)現(xiàn)的，繼而又先后在百合科、豆科、棕櫚科等多種植物中發(fā)現(xiàn)，但其含量在虎杖中較高[4]。1989 年WHO證實優(yōu)質(zhì)葡萄酒中所含白藜蘆醇大大降低了法國人心臟病發(fā)病率和死亡率(即法國悖論現(xiàn)象)[5]。白藜蘆醇自被發(fā)現(xiàn)以來，一直受到醫(yī)藥學界的重視，它被美國專著《抗衰老圣典》一書列為“100種最熱門有效抗衰老物質(zhì)”之一[6]。大量的研究表明[7]，白藜蘆醇具有多方面有益于人類健康的重要生物藥理活性，包括抗菌消炎、抗氧化、生長抑制活性、抗血小板聚集、激素調(diào)節(jié)和抗腫瘤活性等重要的生理功能。近來還發(fā)現(xiàn)其具有免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗突變、輻射防護 、抗艾滋病活性、預防急性傳染性非典型肺炎(非典) 等藥用價值。

本實驗的理論依據(jù)是自由基學說，此學說是Denham harman[8]于1956年提出的，該理論認為生物體內(nèi)具有一整套產(chǎn)生和清除自由基的平衡體系，隨著年齡的增長發(fā)生退行性變化，致使體內(nèi)的自由基物質(zhì)過量。體內(nèi)產(chǎn)生自由基的過程就是氧化還原反應過程， 其產(chǎn)生過程是體內(nèi)有機物在微量元素的催化下， 被氧化形成游離基， 包括過氧化氫和羥自由基等。自由基具有極強的氧化能力，可使生物膜中不飽和脂類發(fā)生過氧化，形成過氧化脂質(zhì)。HUNG等研究證實白藜蘆醇的抗氧化作用強于維生素E及維生素C，并具有較強的清除自由基和抗脂質(zhì)過氧化效應[9]。本次實驗結(jié)果表明，白藜蘆醇能夠清除自由基，減少皮膚組織中H202含量和提高ATP酶的活力，推測和證明了其在延緩皮膚自然衰老方面的作用。因此在開發(fā)成具有抗氧化作用的保健食品方面有較大的空間和市場潛力。

[參考文獻]

[1]牛培勤，郭傳勇.白藜蘆醇藥理作用的研究進展[J].醫(yī)藥導報，200 6，25(6):524.

[2]湯璐佳，李青峰.皮膚抗衰老研究進展[J].組織工程與重建外科雜志，2007，3(3):172.

[3]孫艷萍.虎杖“扶正驅(qū)邪”功用概說[J].職業(yè)與健康，2002，18(6):144.

[4]張學景，鄒 永，鐘榮清，等.白藜蘆醇的雌激素樣作用及相關(guān)治療意義[J].中國新藥雜志，2004，13(8):692.

[5]白楊，潘雋麗，蘇薇薇.白藜蘆醇與白藜蘆醇甙的研究進展[J].中藥材，2004，27(1):55.

[6]耿華田.話說葡萄酒中的抗癌明星--白藜蘆醇[J].化學教育，2007，(9):8-9.

[7]張梅 楊林.白藜蘆醇生物學作用的研究進展[J].華北煤炭醫(yī)學院學報，2007，9(3):333-334.

[8]Harman D.Aging:atheory based on free radical and radiation chemistry[J].J Gerontol，1956，11:298-300.

[9]畢紅彬，閻曉卓，邵攀科.白藜蘆醇的研究進展[J].河北化工，2006，29(6):23.

[收稿日期]2009-09-19 [修回日期]2009-12-08

編輯/張惠娟