EDTA-K2誘導(dǎo)的血小板聚集對(duì)血細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響

066100 北京軍區(qū)北戴河療養(yǎng)院 陳松楠

EDTA-K2誘導(dǎo)的血小板聚集對(duì)血細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響

066100 北京軍區(qū)北戴河療養(yǎng)院 陳松楠

目的 研究EDTA-K2誘導(dǎo)血小板聚集所引起的血液分析儀計(jì)數(shù)RBC、WBC及PLT的數(shù)值變化。方法 采用血液分析儀檢測(cè)EDTA-K2抗凝血，同時(shí)手工計(jì)數(shù)標(biāo)本和涂片鏡檢，并作相應(yīng)比較得出結(jié)論。結(jié)果 血液分析儀檢測(cè)的部分EDTA-K2抗凝血血小板計(jì)數(shù)低于手工法計(jì)數(shù)的結(jié)果，而白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果卻高于后者，二者差別均有臨床意義。結(jié)論 對(duì)于EDTA-K2抗凝的靜脈血個(gè)別患者可能會(huì)發(fā)生血小板聚集，從而引起血小板假性減少PTCP(pseudothrombocytopenia)，WBC計(jì)數(shù)假性增高，所以應(yīng)該引起重視，及時(shí)糾正，避免一些不必要的檢查和治療。

EDTA-K2；血小板聚集；血細(xì)胞計(jì)數(shù)

血液分析儀在全國(guó)各級(jí)醫(yī)院已普及，相對(duì)于傳統(tǒng)的手工法來(lái)說(shuō)其優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單、快捷、重復(fù)性好等，但很多外界因素都會(huì)影響其檢測(cè)的準(zhǔn)確性。EDTA-K2抗凝血引起的個(gè)別人血小板發(fā)生聚集就是典型的例子，它可以導(dǎo)致EDTA依賴性的假性血小板減少(EDTA-dependent PTCP)[1]，同時(shí)還造成白細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)的偏高，引起臨床誤診，本次實(shí)驗(yàn)對(duì)7例血小板聚集患者進(jìn)行了分析研究。

1 資料與方法

1.1 檢測(cè)對(duì)象 2007年8月～2008年8月EDTA-K2抗凝有血小板聚集的患者7例，其中男3例，女4例；年齡15～55歲，平均為34歲。

1.2 儀器與試劑 深圳邁瑞公司BC-3200血細(xì)胞分析儀及儀器配套試劑，質(zhì)控品是PHC-3D血細(xì)胞質(zhì)控物(南京普朗生物技術(shù)有限公司)，Olympus公司生產(chǎn)的雙目顯微鏡BH-2，EDTA-K2真空抗凝管 (滄州永康醫(yī)藥用品有限公司)，鹽酸稀釋液、草酸銨血小板稀釋液及瑞氏染液。

1.3 方法 首先用PHC-3D血細(xì)胞質(zhì)控物監(jiān)控其穩(wěn)定性，然后嚴(yán)格按照儀器操作規(guī)程用血液分析儀檢測(cè)并記錄EDTA-K2抗凝血的WBC、RBC及PLT的數(shù)值，然后采集患者末梢血20 μL加0.38 mL鹽酸及草酸銨稀釋液由有經(jīng)驗(yàn)的主管技師進(jìn)行手工WBC、RBC及PLT計(jì)數(shù)，并制備血涂片，觀察血小板數(shù)量、形態(tài)及血小板聚集情況。

2 結(jié)果

BC-3200血細(xì)胞分析儀檢測(cè)和手工計(jì)數(shù)WBC、RBC、PLT的結(jié)果及配對(duì)t檢驗(yàn)(表1)。

表1 7例血液分析儀和手工計(jì)數(shù)WBC、RBC、PLT的配對(duì)t檢驗(yàn)

3 討論

1)BC-3200血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)原理是電阻抗法：電阻抗原理又稱庫(kù)爾特原理，其內(nèi)有一個(gè)充滿導(dǎo)電性液體的小孔，它的脈沖是穩(wěn)定的，當(dāng)有細(xì)胞通過(guò)時(shí)，脈沖就會(huì)變化，它的振幅的大小反映細(xì)胞的大小，它的數(shù)量即細(xì)胞的數(shù)量[2]。其中2～35 fl為血小板，35～450 fl為白細(xì)胞，當(dāng)有血小板聚集或存在大血小板且不被溶血素溶解時(shí)，儀器可誤將聚集成團(tuán)的血小板當(dāng)作白細(xì)胞計(jì)數(shù)，因此就會(huì)出現(xiàn)白細(xì)胞計(jì)數(shù)偏高的現(xiàn)象[3]，進(jìn)而引起血小板的假性偏低。

2)EDTA-K2抗凝已在1993年被ICSH(International Council for Standardization in Haematology，國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì))推薦用作血常規(guī)檢測(cè)的抗凝劑。它對(duì)血液中細(xì)胞形態(tài)和血小板聚集性幾乎均無(wú)影響，然而在臨床的廣泛使用中，它偶爾會(huì)引起血小板的聚集，且這種聚集不易被溶血素破壞，因?yàn)槿苎氐闹饕煞质顷?yáng)離子表面活性劑，其作用于細(xì)胞中的磷脂，使之溶解后與蛋白分離[4]，從而引起血小板假性減低(PTCP)，至今未發(fā)現(xiàn)該現(xiàn)象的發(fā)生有何病理、生理意義，也與特殊藥物的作用無(wú)關(guān)[5]。EDTA-K2誘導(dǎo)的血小板聚集可能與血小板表面存在某種隱匿性抗原有關(guān)[6]。它可導(dǎo)致血小板活化，血小板形態(tài)發(fā)生變化，由正常的圓盤狀變?yōu)閳A球形，改變了血小板膜表面某種隱匿性抗原構(gòu)象，與存在血漿中的自身抗體結(jié)合，激活細(xì)胞膜中的磷酸酯酶A2和磷脂酶C，使血小板膜磷脂水解并釋放花生四烯酸、ADP、5-TH、膠原、凝血酶原、內(nèi)源性鈣離子等活性物質(zhì)。這些物質(zhì)能活化血小板纖維蛋白原受體，促使血小板與纖維蛋白原聚集成團(tuán)[7]。

3)對(duì)EDTA-K2抗凝血分別進(jìn)行手工計(jì)數(shù)和麥瑞B(yǎng)C-3200血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)，結(jié)果儀器法血小板計(jì)數(shù)明顯低于手工法，儀器法白細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯高于手工法，差異均有顯著性(P＜0.01)，而紅細(xì)胞變化不大，差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。個(gè)別患者體外的EDTA-K2抗凝血在室溫條件下發(fā)生EDTA依賴性凝集，血液分析儀對(duì)凝集體的結(jié)構(gòu)不能辨別，而誤以為是白細(xì)胞，所以造成血小板計(jì)數(shù)的偏低和白細(xì)胞計(jì)數(shù)的偏高。而EDTA-K2抗凝血涂片鏡檢可見(jiàn)大量聚集成堆的血小板，且多分布在片尾部。此時(shí)儀器所測(cè)的血小板計(jì)數(shù)和白細(xì)胞計(jì)數(shù)是錯(cuò)誤的，應(yīng)采取手工計(jì)數(shù)及鏡檢。

4)在我們平時(shí)的工作中經(jīng)常會(huì)遇到血小板較低的情況，特別是低于50×109/L時(shí)，不僅要及時(shí)手工計(jì)數(shù)，還應(yīng)該涂片觀察細(xì)胞形態(tài)變化，確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。另外，采血的過(guò)程及血液和抗凝劑的比例都很重要，采血速度慢、多次穿刺和血液比例過(guò)高都可能引起血小板凝集，堵塞儀器而無(wú)法測(cè)得真實(shí)的結(jié)果，以上問(wèn)題應(yīng)該引起我們的注意，加強(qiáng)責(zé)任心，避免給病人的診斷和治療帶來(lái)不必要的麻煩，引起醫(yī)療糾紛。

[1]邢輝，吳健民.EDTA-K3依賴性血小板假性減少癥分析[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2004，22(4)：277.

[2]熊立凡，李樹仁，主編.血液分析儀及臨床應(yīng)用[M].第3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003.

[3]叢玉隆.血液分析儀中的幾個(gè)問(wèn)題[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，1994，17(6)：325.

[4]崔穎鳴.血細(xì)胞自動(dòng)分析與溶血?jiǎng)J].國(guó)外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)分冊(cè)，2000，21(1)：29.

[5]BizzaroN.EDTA-dependent pseudothrombocytopenia;a clinical and epidemiological study of 11 case,with 10-year follow up[J].Am JH ematol,1995,50(2):103-109.

[6]BragnaniG,BianconciniG,Brogna R,etal.pseudothrom bocytopenia;clinical connent on 37 case[J].M inerva M ED,2001,92(1):13.

[7]李明，王超，魯家才.EDTA依賴性血小板聚集導(dǎo)致血細(xì)胞計(jì)數(shù)誤差分析[J].華中醫(yī)學(xué)雜志，2004，28(4)：269.

2009-04-23)

1005-619X(2009)08-0749-02