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    香砂六君子湯對脾胃虛弱型CAG大鼠胃黏膜細胞能量代謝相關(guān)酶活性和分泌功能的影響

    2016-04-21 01:23:38段云燕成映霞魯鵬程高建平李蘭珍段永強楊曉軼劉雪松王慶勝劉臻華
    中國老年學雜志 2016年7期
    關(guān)鍵詞:總酸

    段云燕 王 強 成映霞 魯鵬程 高建平 李蘭珍 段永強 楊曉軼 杜 娟 劉雪松 王慶勝 劉臻華

    (甘肅中醫(yī)藥大學甘肅省中醫(yī)方藥挖掘與創(chuàng)新轉(zhuǎn)化重點實驗室,甘肅 蘭州 730020)

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    香砂六君子湯對脾胃虛弱型CAG大鼠胃黏膜細胞能量代謝相關(guān)酶活性和分泌功能的影響

    段云燕1王強成映霞魯鵬程高建平李蘭珍1段永強1楊曉軼2杜娟2劉雪松王慶勝劉臻華

    (甘肅中醫(yī)藥大學甘肅省中醫(yī)方藥挖掘與創(chuàng)新轉(zhuǎn)化重點實驗室,甘肅蘭州730020)

    〔摘要〕目的探討香砂六君子湯(XSLJZ)對脾胃虛弱型萎縮性胃炎(CAG)大鼠胃黏膜能量代謝相關(guān)酶琥珀酸脫氫酶(SDH)、乳酸脫氫酶(LDH)活性以及胃壁細胞分泌功能的影響。方法54只大鼠按隨機數(shù)字表法分為空白組(n=8)和模型組(n=46)。采用綜合法復制脾胃虛弱型CAG動物模型。造模40 w并評價CAG模型成功后,取40只大鼠按隨機法將模型大鼠分為模型組、XSLJZ高、中、低劑量組和陽性對照組,每組8只。其中空白對照組和模型組大鼠每日給予容積為10 ml/kg蒸餾水灌胃,XSLJZ大、中、小劑量組分別給予24、12、6 g·kg(-1)·d(-1)香砂六君子湯藥劑灌胃,陽性對照組給予 0.30 g·kg(-1)·d(-1)維霉素灌胃。持續(xù)治療120 d后,分別對各組大鼠一般生存狀態(tài)、平均每日體重增加量、平均每日攝食量、能量代謝相關(guān)酶SDH、LDH活性及胃液游離酸、總酸含量進行檢測。結(jié)果與空白組比較,模型組大鼠一般生存狀態(tài)較差,平均每日體重增加量和平均每日攝食量顯著降低(P<0.01),胃組織SDH活性顯著下降,而LDH活性顯著升高(P<0.05,P<0.01),胃液游離酸、總酸含量顯著降低(P<0.01);與模型組比較,XSLJZ組大鼠一般生存狀態(tài)良好,平均每日體重增加量和平均每日攝食量顯著增加(P<0.05),胃組織SDH活性顯著升高(P<0.05),LDH活性顯著下降(P<0.05),胃液游離酸、總酸含量顯著升高(P<0.05,P<0.01),且以XSLJZ大劑量作用顯著。結(jié)論XSLJZ具有改善脾胃虛弱型CAG大鼠一般生存狀況、促進胃壁細胞能量代謝相關(guān)酶活性和胃黏膜分泌功能的作用。

    〔關(guān)鍵詞〕萎縮性胃炎;脾胃虛弱型;香砂六君子湯;琥珀酸脫氫酶;乳酸脫氫酶;游離酸;總酸

    慢性萎縮性胃炎(CAG)是消化系統(tǒng)多發(fā)病和常見病,尤其在CAG伴有腸上皮化生和異常增生改變時,繼發(fā)性胃癌發(fā)生率高達10 %〔1〕,亦是臨床治療中的難點之一。香砂六君子湯(XSLJZ)出自《古今名醫(yī)方論》,是臨床防治脾胃虛弱型CAG的有效復方。臨床實踐表明規(guī)范化應(yīng)用XSLJZ及其加減方治療CAG療效顯著〔2~4〕,值得進一步研究和推廣。本研究旨在通過動物實驗觀察以健脾理氣和胃法為指導的XSLJZ對脾胃虛弱型CAG大鼠胃壁細胞能量代謝相關(guān)酶琥珀酸脫氫酶(SDH)、乳酸脫氫酶(LDH)活性及胃液游離酸、總酸含量的影響,探討該經(jīng)典復方防治CAG的作用機制。

    1材料與方法

    1.1動物造模與分組采用2月齡SPF級健康Wistar大鼠120只,體重(160±10)g,雌雄各半,標準飼料喂養(yǎng),均由甘肅中醫(yī)學院醫(yī)學實驗中心提供(動物合格證號:SCXK〔甘〕2011-0001-0001010;實驗設(shè)施合格證號:SYXK〔甘〕2011-0001-0000313)。本實驗中動物處理的相關(guān)程序遵守了中國國家健康與醫(yī)學研究委員會動物道德準則并得到了甘肅中醫(yī)學院動物實驗倫理委員會的批準(批準號為2014045)。

    1.2藥物與試劑XSLJZ以人參、白術(shù)、茯苓、陳皮、半夏、炒砂仁、木香、生姜、甘草按6∶12∶12∶5∶6∶5∶2∶12∶4比例配制(以上中藥材均購自蘭州復興厚中藥材有限責任公司,并經(jīng)甘肅中醫(yī)學院藥學院中藥生藥學教研室楊扶德教授鑒定合格),第1次加10倍量蒸餾水浸泡2 h后,按常法煎煮2次,40 min/次,濾出藥液加熱濃縮至每1 ml藥液含生藥2 g,冷卻后置4 ℃冰箱備用,使用時稀釋至所需濃度。維酶素,批號20140108(新鄉(xiāng)恒久遠藥業(yè)有限公司,0.2 g/片);脫氧膽酸鈉(Sodium deoxycholate)批號SLBC0243V,西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易有限公司;吲哚美辛,批號120702(上海信誼黃河制藥有限公司);氨水,批號120102(白銀良友化學試劑有限公司);乙醇,批號120100107(天津市富宇精細化工有限公司);NaOH,批號20120321(天津市德恩化學試劑有限公司);酚酞指示劑,批號20121004(天津市大茂化學試劑廠)??捡R斯亮藍蛋白測定試劑盒,批號20140813;琥珀酸脫氫酶試劑盒(succinic dehydrogenase,SDH),批號20140821;乳酸脫氫酶試劑盒(lactic dehydrogenase,LDH),批號20140816;均購自南京建成生物工程研究所。

    1.3主要儀器DF110型電子分析天平,江蘇常熟衡器工業(yè)公司;XYJ80-2離心機,廣東塘廈駿越機電設(shè)備廠;PHS-29A型酸度計,上海雷磁儀器廠;HH-4數(shù)顯恒溫水浴箱,江蘇省金壇市友聯(lián)儀器研究所;Benchmark Plus酶聯(lián)免疫檢測儀,美國BIO-RAD公司。

    1.4分組與造模除空白組(n=8)大鼠正常飼養(yǎng)不予造模外,其余大鼠(n=46)造模參照文獻〔5〕方法:造模組采用復合慢性損傷因素聯(lián)合作用:①60 %乙醇,每3 d空腹灌胃1次(前一日晚上撤除飼料),每次8 ml/kg;②20 mmol/L 脫氧膽酸鈉灌胃,每日1 次,每次8 ml/kg;③每日配制0.1%氨水作為大鼠日常飲用水自由飲用,并記錄每日飲用量;④0.05%吲哚美辛灌胃,每日1 次,每次8 ml/kg;⑤采用饑飽失常喂養(yǎng)法:2 d足量喂養(yǎng),1 d禁食,連續(xù)造模40 w。待綜合法造模30 w后,每隔1 w隨機抽檢大鼠,取胃黏膜組織做病理檢查并判定胃黏膜萎縮病理變化,評價CAG模型大鼠胃黏膜萎縮病理形成后開始治療。造模成功后取40只CAG大鼠按體重編號,用隨機數(shù)字表法分為模型組、XSLJZ大、中、小劑量組和陽性對照組,每組8只,雌雄各半分籠飼養(yǎng)。

    灌胃給藥治療共120 d??瞻捉M、模型組給予同體積蒸餾水灌胃;XSLJZ大、中、小劑量組分別予24、12、6 g·kg-1·d-1XSLJZ藥劑灌胃;給予對照組0.30 g·kg-1·d-1維酶素灌胃,等效劑量按人與動物體型系數(shù)折算〔6〕。

    1.5標本采集與檢測大鼠CAG造模成功并治療后,各組動物于末次灌胃給藥后禁食不禁水24 h,測體重作記錄并用烏拉坦(1 g/kg)麻醉后全部殺檢。

    胃黏膜組織勻漿制備:采血后斷頭處死,低溫條件下快速剖取胃黏膜組織,以冰冷的生理鹽水沖洗,濾紙吸干,稱重后用眼科小剪刀盡快剪碎,置于勻漿器中,用組織重9倍生理鹽水勻漿(勻漿器的末端置于放冰塊的冷水中),后以3 500 r/min離心10 min,取上清液置4℃冰箱保存,待測SDH和LDH活性。

    胃液收集并做游離酸、總酸含量檢測:將受試大鼠仰臥位固定于手術(shù)板上,麻醉后沿腹正中線剪開并迅速結(jié)扎賁門,予十二指腸處剪一小口插入引流管,用潔凈注射器緩慢抽取胃液及胃黏膜沖洗液,記錄胃液量后注入離心管離心5 min取上清液待測。胃液總酸度和游離酸度測定參考文獻〔7,8〕:將收集的胃液和胃黏膜沖洗液混合共為4 ml,用酸度計測定其pH值,然后滴入1%的酚酞指示劑,用0.01 mol/L的NaOH緩慢滴定中和至酸度計值達7.0,記錄NaOH的消耗量V1,V1×10即為胃液中所含的游離酸含量;繼續(xù)滴加NaOH至出現(xiàn)酚酞色(pH8.5左右),記錄NaOH的消耗量V2,V2即為胃液總酸量。

    1.6統(tǒng)計學方法采用SPSS13.0軟件行F檢驗、q檢驗。

    2結(jié)果

    2.1各組大鼠一般生存情況空白組大鼠始終表現(xiàn)為反應(yīng)靈敏,活動及攝食量正常,被毛濃密柔順而有光澤,糞便呈棕褐色顆粒狀。CAG模型1/2數(shù)量大鼠在第6周即開始出現(xiàn)倦臥,被毛稀疏干枯,攝食量減少;第8周后出現(xiàn)少食怠動、消瘦、對外界反應(yīng)遲鈍的病理表現(xiàn),尤其隨著造模時間延長,大鼠生存能力明顯下降,表現(xiàn)為怠動少食、消瘦弓背、毛發(fā)枯槁疏散,3/4數(shù)量大鼠攝食量明顯減少,容易出現(xiàn)瞇眼蜷縮,反應(yīng)遲鈍,平均每日體重增加量和攝食量明顯下降。經(jīng)藥物干預后,XSLJZ各劑量組和陽性對照組大鼠在治療第10周開始上述癥狀逐漸減輕或消失,表現(xiàn)為反應(yīng)較為靈敏、被毛疏散但有光澤、活動及飲食量正常,平均每日體重增加量和攝食量恢復接近正常,尤其以XSLJZ大劑量組大鼠一般生存情況恢復正常明顯。

    2.2各組大鼠平均每日攝食量和平均每日體重增加量的比較與空白組比較,模型組大鼠平均每日攝食量和平均每日體重增加量顯著降低(P<0.01);與模型組比較,XSLJZ高、中、低劑量和陽性對照藥均能升高大鼠平均每日攝食量和平均每日體重增加量,且以香砂六君子湯大劑量作用顯著(P<0.05)。見表1。

    表1 各組大鼠平均每日攝食量和

    與空白組比較:1)P<0.05,2)P<0.01;與模型組:3)P<0.05,4)P<0.01;下表同

    2.3各組大鼠胃黏膜組織SDH和LDH活性的比較與空白組比較,模型組大鼠胃黏膜組織SDH活性顯著降低,LDH活性顯著升高(P<0.05,P<0.01);與模型組比較,XSLJZ高、中、低劑量和陽性對照藥均能升高大鼠胃黏膜組織SDH活性,降低LDH活性,且以XSLJZ大劑量和陽性對照藥作用顯著(P<0.05)。見表2。

    表2 各組大鼠胃黏膜組織SDH和LDH活性的

    2.4各組大鼠胃液總酸量和游離酸含量的比較與空白組比較,模型組大鼠胃液總酸量和游離酸含量顯著降低(P<0.01);與模型組和陽性對照組比較,XSLJZ高、中、低劑量均能升高大鼠胃液總酸量和游離酸含量,且以XSLJZ大劑量作用顯著(P<0.05,P<0.01)。見表3。

    表3 各組大鼠胃液總酸量和游離酸含量的比較±s,n=8)

    3討論

    CAG并無特定的中醫(yī)名稱,但根據(jù)其表現(xiàn)出的胃脘“痞(滿)、脹、痛,消瘦”的臨床表現(xiàn),當屬中醫(yī)“痞滿”、“胃痞”等范疇。鑒于該病癥臨床表現(xiàn)主要為脘腹脹痛、噯氣納呆、運化遲滯、大便或溏或結(jié)、面色萎黃、形體逐漸消瘦等等,中醫(yī)學認為本病在于脾胃虛弱(嚴重者或脾胃虛寒),中焦氣機窒塞,升降失調(diào)而發(fā)展為“痞滿”。譬如《黃帝內(nèi)經(jīng)·素問·至真要大論》云:“心胃生寒,胸膈不利,心痛否滿”;金元醫(yī)家李東垣《蘭室秘藏·中滿腹脹論》中謂“脾胃久虛之人,胃中寒則生脹滿,或臟寒生滿病”,以上理論都強調(diào)“痞滿”、“胃痞”病機在于脾胃虛弱而氣機失調(diào),中醫(yī)臨床治療的基本法則之一亦多從健脾理氣和胃(香砂六君子湯)為主,療效顯著〔9,10〕。XSLJZ出自《古今名醫(yī)方論》,是主治因脾胃虛弱,氣機阻滯,痰濁、濕毒內(nèi)生而生“痞滿”之效方,亦是體現(xiàn)“健脾理氣和胃”治則治法的經(jīng)典方劑。方中人參補中益氣,健脾養(yǎng)胃;白術(shù)健脾燥濕;茯苓健脾滲濕;白術(shù)、茯苓合用,能增強健脾除濕功能,促進脾胃運化;木香、砂仁芳香健脾和胃,理氣消痞而止痛;陳皮、半夏燥濕化痰,理氣降逆;甘草調(diào)胃和中,具有補脾和胃、緩急止痛、調(diào)和諸藥的作用。

    從現(xiàn)代醫(yī)學病理生理學的角度分析,CAG患者常因胃黏膜慢性炎性反應(yīng),或腺體細胞數(shù)量逐漸減少,必然導致胃黏膜細胞各種生理功能(包括細胞能量代謝功能)紊亂,或因胃黏膜腺體發(fā)生不同程度的萎縮,分泌功能降低〔11~13〕。由于正常胃黏膜的胃酸最大分泌量直接與壁細胞的數(shù)量和功能密切相關(guān),故CAG病程中胃壁細胞分泌的胃液量和胃酸含量必然減少。胃液中的胃酸(鹽酸)有兩種形式:一種為解離的游離酸形式,另一種是與蛋白質(zhì)結(jié)合的鹽酸蛋白質(zhì)形式(即結(jié)合酸),二者總量即為胃液總酸含量,正常生理分泌量亦是反映胃黏膜細胞分泌功能的重要指標之一。

    同時細胞能量代謝相關(guān)酶的活性也是反映細胞生理功能的效應(yīng)指標之一,其中SDH是三羧酸循環(huán)和有氧呼吸的功能成分,是連接氧化磷酸化與電子傳遞的樞紐之一,可為真核細胞線粒體和多種原核細胞需氧和產(chǎn)能的呼吸鏈提供電子,為線粒體的一種標志酶〔14,15〕。SDH活性降低表明有氧化反應(yīng)減弱,細胞供能不足,分泌功能降低。其次,LDH廣泛分布于機體各種組織器官,其活性高低可評價機體無氧代謝能力的高低,是無氧氧化的標志酶〔16〕。

    本研究說明CAG病程中存在胃壁細胞能量代謝功能低下,胃酸分泌不足的病理變化。XSLJZ治療CAG胃黏膜病變的機制之一在于能有效促進胃黏膜細胞有氧氧化反應(yīng),降低無氧氧化反應(yīng),促進胃黏膜細胞分泌功能的作用。

    4參考文獻

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    〔2015-12-08修回〕

    (編輯曲莉)

    〔中圖分類號〕R285.5

    〔文獻標識碼〕A

    〔文章編號〕1005-9202(2016)07-1570-03;

    doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2016.07.015

    通訊作者:成映霞(1976-),女,碩士,副教授,主要從事胃病的中醫(yī)治療研究。

    基金項目:國家自然科學基金項目(No.81260519);甘肅省中醫(yī)藥管理局基金項目(No.GZK-2014-73);甘肅省中醫(yī)方藥挖掘與創(chuàng)新轉(zhuǎn)化重點實驗室開放基金項目(No.07-GZK-07)

    1甘肅省中醫(yī)方藥挖掘與創(chuàng)新轉(zhuǎn)化重點實驗室

    2甘肅中醫(yī)藥大學中藥藥理與毒理學重點實驗室

    第一作者:段云燕(1972-),女,實驗師,主要從事中藥方劑配伍規(guī)律和脾胃病教學和科研工作。

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