枸杞多糖與丹參酮延緩小鼠皮膚衰老的實驗研究

梁　杰　李　響

【摘要】 目的 比較枸杞多糖與丹參酮對衰老小鼠皮膚的抗衰老作用。方法 60只雌性昆明種小鼠，隨機(jī)分為4組(n=15)：正常對照組皮下注射生理鹽水；其余3組每日頸背部皮下注射 D-半乳糖［1000 mg/(kg?d)］ 造成小鼠衰老模型，同時各組分別灌胃生理鹽水(衰老模型組)、枸杞多糖［200 mg/(kg?d)］、丹參酮［1 500 mg/(kg?d)］。42 d后，測定小鼠背部皮膚組織勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)活力、過氧化脂質(zhì)代謝產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量和皮膚羥脯氨酸(Hyp)含量。結(jié)果 枸杞多糖可使衰老模型小鼠皮膚中MDA含量顯著降低,較丹參酮組明顯； 但SOD活力顯著升高,不及丹參酮組改變顯著；枸杞多糖和丹參酮均可使羥脯氨酸含量升高，且效果相當(dāng)。結(jié)論 枸杞多糖與丹參酮都有顯著的抗小鼠皮膚衰老作用，枸杞多糖清除皮膚中脂質(zhì)過氧化代謝產(chǎn)物方面較丹參酮明顯,而提高皮膚抗氧化酶活力則不及丹參酮顯著，在增強(qiáng)成纖維細(xì)胞活性方面兩者效果相當(dāng)。

【關(guān)鍵詞】皮膚衰老；枸杞多糖；丹參酮

Experimental research on the skin aging function of tanshinoneand lycium barbarum polysaccharides

LIANG Jie，LI Xiang.Department of Plastic Surgery，Affiliated Hospital of Guangdong Medical College,Zhanjiang,Guangdong 524001，China

【Abstract】 Objective To compare the anti-aging effects of Lycium barbarum polysaccharides and Tanshinone on the skin of D-galactose-induced mice aging model．Methods 60 female mice were randomly divided into 4 groups (n=15):Mice in normal control group received subcutaneous injection of normal saline and mice in the other 3 groups received cervicodorsal injection of D-galactose［1000 mg/(kg1?d)］ for 42 d to establish subacute aging model.The experimental groups included agingmodel group (without further treatment)，Lycium barbarum polysaccharides ［200 mg／(kg?d)group，Tanshinone ［1 500 mg／(kg?d)］ group．Forty two days later，the dorsal skin samples were collected to determine SOD activities、MDA and hydroxyproline contents． Results The effect of Lycium barbarum polysaccharides isbetter than Tanshinone significantly in decrease the content of MDA，but in increase the SOD activity Tanshinone have better effection.Both of them can increaseing the hydroxyproline contents，but these is no different.Conclusion Both Lycium barbarum polysaccharides and Tanshinone have noticeable anti-skin aging effects，Lycium barbarum polysaccharides is better than Tanshinone in clearing skin lipid peroxidation metabolites aspects，but Tanshinone have better effection in enhancing Oxidase activity，they have no different effection in enhanceing fibroblasts.

【Key words】Skin aging；Lycium barbarum polysaccharides；Tanshinone

當(dāng)今社會由于老齡化的加速到來以及人們對美的強(qiáng)烈追求，希望借助醫(yī)學(xué)手段延緩衰老，永保青春。枸杞為茄科植物枸杞成熟果實，明朝李時珍在《本草綱目》中記載：枸杞有“久服，堅筋骨，輕身不老，……，令人長壽” 等功效。枸杞多糖(lycium barbarumpoysaccharides，LBP) 是枸杞子的主要活性成分之一，有抗氧化延緩皮膚衰老的作用。丹參酮是唇形科植物(salvia miltorrhiza Bge)的有效成分，有明顯抗衰老作用［1］。筆者在D-半乳糖所致小鼠衰老模型基礎(chǔ)上分別灌服枸杞多糖或丹參酮，比較二者對衰老小鼠皮膚中某些抗衰老指標(biāo)的影響。

1 材料與方法

1.1 動物 3月齡清潔級雌性昆明種小鼠60只，平均體質(zhì)量(25±2) g購自廣東醫(yī)學(xué)院實驗動

物中心，隨機(jī)分為4組，正常對照組、D-半乳糖衰老模型組、枸杞多糖組、丹參酮組，每組15只。

1.2 方法

1.2.1 實驗步驟 灌胃、皮下注射均按無菌操作進(jìn)行。42 d 后，小鼠斷頸處死，背部皮膚取下后迅速冰凍保存，擬作皮膚組織勻漿及測定皮膚抗衰老指標(biāo)用。正常對照組：每日頸背部皮下注射生理鹽水0．2 ml，同時灌服生理鹽水(0．1 ml /10 g)；D-半乳糖(衰老模型)組：每日頸背部皮下注射D-半乳糖［1000 mg/（kg?d）］，同時灌服生理鹽水(0.1 ml / 10 g)；枸杞多糖組：每日頸背部皮下注射D-半乳糖［(1000 mg/（kg?d)］，同時灌服枸杞多糖［200 mg/（kg? d)］； 丹參酮組：每日頸背部皮下注射D-半乳糖［1000 mg/（kg?d)］，同時灌服丹參酮 ［1 500 mg/（kg?d)］。

1.2.2 10%皮膚勻漿的制備 取脫毛后背部皮膚組織0.5 g左右，經(jīng)預(yù)冷生理鹽水漂洗，除去皮下脂肪和其他結(jié)締組織，濾紙拭干，稱重，量筒量取該組織塊9倍重量預(yù)冷生理鹽水，先取2/3量倒入裝有組織塊燒杯中，剪碎組織塊后倒入勻漿管中，將剩余1/3生理鹽水沖洗燒杯壁，一起倒入勻漿器中進(jìn)行勻漿，上下轉(zhuǎn)動研磨數(shù)10次(10~15 min)，充分研磨，使組織漿液化。再將制備好的10%勻漿用低溫低速離心機(jī)以轉(zhuǎn)速3000轉(zhuǎn)/min離心15 min，取上清液備用。

1.2.3 皮膚SOD活力測定 參照南京建成生物工程公司SOD試劑盒說明書方法測定SOD活力，單位以U/ ml表示。

1.2.4 皮膚MDA含量測定 硫代巴比妥酸（TBA）法測定MDA含量［2］。

組織中MDA (μmol/g) = (測定管吸光度-測定空白管吸光度)/(標(biāo)準(zhǔn)管吸光度-標(biāo)準(zhǔn)空白管吸光度)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度(10 μmol/L)/蛋白含量(g / L)

1.2.5 皮膚羥脯氨酸含量測定參見文獻(xiàn)［3］。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 11.0統(tǒng)計分析軟件，計量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差x±s表示，多個樣本均數(shù)的比較用方差齊性檢驗，當(dāng)總體方差齊同時選擇LDS法分析；方差不齊時選擇Dunnet C法分析。P<0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

小鼠皮膚SOD活力及MDA含量檢測結(jié)果見表1。小鼠皮下注射D-半乳糖42 d后皮膚SOD活力較正常對照組顯著降低(P<0.01)，MDA含量較正常對照組顯著升高(P<0.01)，提示造模成功；與半乳糖組相比，枸杞多糖組和丹參酮組小鼠皮膚組織勻漿中SOD含量均明顯升高，丹參酮組升高尤為明顯(P<0.01)，超過正常組水平，提示丹參酮可明顯增強(qiáng)皮膚抗氧化和清除自由基的能力，其作用較枸杞多糖顯著；兩組小鼠皮膚組織勻漿中MDA含量較D-半乳糖組顯著降低，且枸杞多糖組降低較丹參酮組更為顯著(P<0.01)，提示枸杞多糖清除過氧化脂質(zhì)(LPO)能力較VE更強(qiáng)；兩組小鼠皮膚組織勻漿中Hyp含量均明顯升高，且兩組之間沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，說明枸杞多糖和丹參酮均能增強(qiáng)成纖維細(xì)胞活性，促進(jìn)皮膚膠原蛋白合成。

3 討論

皮膚是最早反應(yīng)機(jī)體衰老的組織，已經(jīng)引起眾多學(xué)者對皮膚皺紋、彈性及營養(yǎng)變化等的防治研究［4］，因此預(yù)防和延緩皮膚衰老已成為醫(yī)學(xué)和美容的研究熱點［5］。本實驗結(jié)果證實，枸杞多糖和丹參酮均有顯著的抗皮膚衰老作用，但枸杞多糖提高D-半乳糖所致衰老模型小鼠皮膚中SOD活力作用不及丹參酮顯著。SOD作為體內(nèi)天然的抗氧化酶之一，有清除自由基的作用，其活力的提高有益于機(jī)體抗氧化能力的［6，7］，其機(jī)制可能為丹參酮有明顯擴(kuò)張小血管、抑制血小板聚集、降低血粘度、改善微循環(huán)的作用,從而使毛細(xì)血管網(wǎng)開放,血流加速,動脈血氧分壓和血氧飽和度升高,組織新陳代謝增強(qiáng),ATP合成增加,促進(jìn)抗氧化酶類合成,皮膚中SOD活力增強(qiáng),提高細(xì)胞清除H₂O₂和-O₂能力,保護(hù)細(xì)胞免受自由基損傷,而延緩衰老進(jìn)程；丹參酮又有Ca²⁺拮抗劑作用,可阻止Ca²⁺進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),抑制黃嘌呤脫氫酶向黃嘌呤氧化酶轉(zhuǎn)變,減少自由基產(chǎn)生；另外,丹參酮又有輕微雌激素作用,對皮膚衰老亦有改善作用。枸杞多糖降低D-半乳糖所致衰老模型小鼠皮膚中MDA含量作用卻較丹參酮顯著，其機(jī)制可能為枸杞多糖有很強(qiáng)的抗氧化作用，能保護(hù)細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶類活性，從而阻止多價不飽和脂肪酸的過氧化反應(yīng)，抑制過氧化脂質(zhì)生成，維持生物膜正常脂質(zhì)結(jié)構(gòu)和生理功能而發(fā)揮抗衰老作用。枸杞多糖和丹參酮均可使成纖維細(xì)胞活性增強(qiáng),膠原蛋白合成增加,而延緩衰老進(jìn)程?？傊?，枸杞多糖和丹參酮均有顯著抗皮膚衰老作用,但二者側(cè)重點不同。

參考文獻(xiàn)

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