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    祛瘀化痰法對(duì)哮喘大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子及白介素12表達(dá)的影響

    2009-07-31 08:52楊建民
    中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥 2009年9期
    關(guān)鍵詞:性反應(yīng)生理鹽水炎性

    賀 明 楊建民 張 靜

    【摘要】 目的 研究蠲哮湯對(duì)哮喘大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子(ICAM-1)及白介素12(IL-12)表達(dá)的影響。方法 建立由卵蛋白誘發(fā)的支氣管哮喘大鼠模型;采用ELISA法檢測(cè)哮喘大鼠靜脈血和肺泡灌洗液(BALF)中ICAM-1、IL-12的含量。結(jié)果 模型組ICAM-1高表達(dá),IL-12低表達(dá),蠲哮湯能減少造模動(dòng)物ICAM-1的表達(dá),提高IL-12的表達(dá)。結(jié)論 蠲哮湯能減少造模動(dòng)物ICAM-1,提高IL-12的表達(dá),而且隨著藥物劑量的減少,各分表達(dá)呈遞增趨勢(shì),具有量效關(guān)系。

    【關(guān)鍵詞】蠲哮湯;哮喘大鼠動(dòng)物;祛瘀化痰法;ICAM-1;IL-12

    Effects of Juanxiao decoctionon expression of ICAM-1 and IL-12 in asthmatic rats

    HE Ming,YANG Jian-min,ZHANG Jing.Guangdong Xinhai Hospital,Guangzhou 510300,China

    【Abstract】 Objective To explore effects of Juanxiao decoction on expression of ICAM-1 and IL-12 in asthmatic rats.Methods Ovalbumin-inducedasthmatic rat modelwas established ; venous blood and Bronchoalveolar Lavage Fluid were collected from asthmatic rats to measure the levels ofICAM-1 and IL-12 with ELISA.Results Higher expression of ICAM-1 and lower expression of IL-12 were found in model group.Conclusion Juanxiao decoctiondecreased expression of ICAM-1 and increased expression of IL-12 in model rats,anddose-effect relationship between the Juanxiao decoction and model rats was showed.

    【Key words】Juanxiao decoction; Asthmatic rat model; Removing blood stasis and dissipating phlegm; ICAM-1; IL-12

    支氣管哮喘是一種以嗜酸性細(xì)胞反應(yīng)為主的慢性氣道炎性反應(yīng),嗜酸性細(xì)胞等分泌TXA2、PGI2等炎性介質(zhì)可引起支氣管平滑肌收縮、微血管擴(kuò)張、通透性增高和滲出物增多等一系列的炎性反應(yīng)。目前認(rèn)為,白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞表面的細(xì)胞黏附分子特別是ICAM-1等的相互作用是炎性反應(yīng)形成的基礎(chǔ)。細(xì)胞因子誘發(fā)黏附分子表達(dá)則對(duì)氣道炎性反應(yīng)的形成起決定作用,而在哮喘中IL-12缺陷導(dǎo)致IL-4等TH-2類細(xì)胞因子增多,誘發(fā)黏附分子表達(dá)增強(qiáng)而產(chǎn)生炎性反應(yīng)。研究表明,提高IL-12水平或阻斷ICAM-1的激活可以減少炎性介質(zhì)的釋放,減輕氣道炎性反應(yīng)。臨床實(shí)踐表明袪血化瘀法(如蠲哮湯)治療哮喘有滿意的療效,且能改善微循環(huán)、減少TXA2等炎性介質(zhì)的釋放,故推測(cè)袪血化瘀方蠲哮湯可能通過提高IL-12水平、阻斷ICAM-1的激活或使其處于低表達(dá)水平,抑制炎性介質(zhì)的釋放,從而達(dá)到治療哮喘的目的。本文以臨床經(jīng)驗(yàn)為基礎(chǔ),研究蠲哮湯對(duì)哮喘大鼠血管ICAM-1及IL-12表達(dá)的影響,從子生物學(xué)水平探討祛痰化瘀法治療哮喘的作用機(jī)理,現(xiàn)報(bào)告如下。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)SD大鼠48只,體質(zhì)量200~250 g,雄性,由中山醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào):醫(yī)動(dòng)字第26-98A001),隨機(jī)分為6組,包括正常對(duì)照組、哮喘模型組、蠲哮湯大、中、小劑量組、陽(yáng)性藥對(duì)照組各8只。

    1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 蠲哮湯組成:葶藶子10 g、青皮10 g、陳皮10 g、檳榔10 g、大黃10 g、生姜10 g、牡荊子15 g、鬼箭羽15 g。中藥飲片購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,均為合格藥材,將各個(gè)組成成分均研細(xì)末過100目篩,然后按比例混合,加蒸餾水煎汁濃縮到0.5 g生藥/ml備用。

    1.1.3 試劑 Elisa試劑盒IL-12,ELISA試劑盒由深圳晶美生物工程有限公司提供。卵白蛋白(OVA)為Sigma公司產(chǎn)品。

    1.1.4 主要儀器 PE480熱循環(huán)儀,高速冷凍離心機(jī)(SORVALLRC5C Plus),UV1601型紫外分光光度儀(SHIMADZU),ZF型紫外分析儀(上海嘉鵬科技有限公司),凝膠圖像分析儀(SYNGENE)。

    1.2 方法

    1.2.1 造模及各組干預(yù)措施 參照文獻(xiàn)方法造模[1,2],先以10%卵蛋白生理鹽水1 ml腹腔注射,2周后將致敏大鼠放入半密閉的有機(jī)玻璃罩內(nèi),以50 kPa(1 kPa=7.5 mm Hg)恒壓噴入2%卵蛋白生理鹽水20 s后再在霧室中放置30 s;隔日誘喘1次共5次;以大鼠腹肌明顯收縮為陽(yáng)性。①正常對(duì)照組:用0.9%生理鹽水1 ml腹腔注射,2周后用同樣的方法霧化吸入0.9%生理鹽水。分別于第3、4、5次霧化吸入0.9%生理鹽水誘喘后胃內(nèi)注入蒸餾水3 ml;②哮喘模型組:按上法制備哮喘動(dòng)物模型,于第3、4、5次誘喘后胃內(nèi)注入蒸餾水3 ml;③蠲哮湯大、中、小劑量組藥物組:按上法制備哮喘動(dòng)物模型,分別于第3、4、5次誘喘后胃內(nèi)注入(灌胃)已煎好的中藥3 ml(用藥量相當(dāng)于成人每千克用藥量的3倍);④陽(yáng)性藥對(duì)照組:按上法制備哮喘動(dòng)物模型,分別于第3、4、5次誘喘后胃內(nèi)注入。

    1.2.2 標(biāo)本采集及處理 ①末次給藥后禁食12 h,在各組動(dòng)物的胃內(nèi)分別灌入相應(yīng)的藥物或生理鹽水,40 min后以0.4%的戊巴比妥鈉麻醉動(dòng)物,剖腹抽取腹腔靜脈血5 ml,4℃、3000轉(zhuǎn)/min離心5~10 min,取上清液-20℃保存待檢ICAM-1、IL-12。②10 ml生理鹽水注入各組大鼠支氣管肺組織內(nèi)反復(fù)抽吸3次,將抽吸的BALF放入離心管中1000轉(zhuǎn)/min離心5~10 min,取上清液-20℃保存待檢ICAM-1、IL-12。按照試劑盒說明書檢測(cè)血清及支氣管肺泡灌洗液中ICAM-1、IL-12。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,各組數(shù)據(jù)均用t檢驗(yàn)。采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,以P為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    蠲哮湯可以減少細(xì)胞黏附因子(ICAM-1)的表達(dá),蠲哮湯藥物組與正常對(duì)照組、哮喘模型組和陽(yáng)性藥物對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中蠲哮湯高中低劑量組之間減低ICAM-1表達(dá)之間也存在差異,隨著劑量減低,減少ICAM-1表達(dá)的效果減低。見表1。

    蠲哮湯可以增加血清及肺泡灌洗液中IL-12的表達(dá),蠲哮湯藥物組與正常對(duì)照組、哮喘模型組和陽(yáng)性藥物對(duì)照顯著增加(P<0.05)。

    注:與正常組、哮喘模型組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組比較,#P<0.05;與正常對(duì)照組比較,*P<0.05

    3 討論

    哮喘的氣道炎性反應(yīng)主要涉及嗜酸粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。這些炎性細(xì)胞可以合成和釋放多種炎性介質(zhì)并在哮喘的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。目前認(rèn)為,白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞表面的細(xì)胞黏附分子(cell adhesion molecules,CAM)的相互作用是炎性反應(yīng)形成的基礎(chǔ)。因此CAM在哮喘氣道炎性反應(yīng)的發(fā)生中起重要作用,且日益受到重視[4]。CAM是位于細(xì)胞膜表面的一類大分子糖蛋白,根據(jù)其結(jié)構(gòu)不同可分為三類:免疫球蛋白超家族如ICAM-1、VCAM-1等,整合素超家族(VLA-4等),選擇素超家族(E-選擇素等)。主要作用是介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)相互粘連,從而促使白細(xì)胞附壁、外滲、游走、聚集、抗原表達(dá)和淋巴細(xì)胞激活。因此對(duì)白細(xì)胞在哮喘氣道炎性反應(yīng)時(shí)的組織浸潤(rùn)、炎性介質(zhì)的釋放等起重要作用。

    IL-12在哮喘發(fā)病中的作用尤為重要。因?yàn)镮L-12不僅誘導(dǎo)多種細(xì)胞因子的產(chǎn)生,而且可以調(diào)節(jié)TH-1/TH-2細(xì)胞免疫應(yīng)答的平衡來調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能。實(shí)驗(yàn)表明IL-4可誘導(dǎo)TH-2類免疫應(yīng)答導(dǎo)致氣道高反應(yīng)和嗜酸球增多,IL-12則能抑制TH-2免疫應(yīng)答而增加TH-1免疫應(yīng)答,抑制哮喘的氣道高反應(yīng)和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)[5]。Nasser等觀察到過敏性哮喘患者氣道活檢組織中IL-12 mRNA的表達(dá)較正常人顯著降低。以上結(jié)果表明在哮喘發(fā)病中IL-12的缺陷使TH-2細(xì)胞免疫應(yīng)答增強(qiáng)(如IL-4等增多)、TH-1細(xì)胞免疫應(yīng)答減弱,結(jié)果ICAM-1表達(dá)增強(qiáng),炎性反應(yīng)介質(zhì)釋放增多。

    蠲哮湯方中葶藶子、青皮、陳皮、檳榔、牡荊子瀉肺除壅,俾氣順則痰降,氣行則痰消;肺與大腸相表里,哮證病作,多因肺氣壅滯而致腑氣不通,以致濁氣不降而上逆,又加重肺氣壅滯,而使哮喘難以緩解,故方中伍大黃以通肺氣,腑氣通則肺氣自降;鬼箭羽活血化瘀,且有抗過敏作用,與逐瘀除壅之大黃相配,更能增強(qiáng)化瘀之功。哮證發(fā)作,常為外感誘發(fā),伍生姜既可外散表寒,又可內(nèi)散水飲,且能防葶藶子、大黃苦寒傷胃之弊。全方合用,共奏瀉肺除壅,祛痰化瘀,利氣平喘之功。且臨床顯示蠲哮湯可以較好的減少哮喘患者發(fā)作的頻率及減輕發(fā)作時(shí)的癥狀等。

    本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示蠲哮湯可以提高IL-12的表達(dá),減少ICAM-1的表達(dá),起到了控制氣道炎癥及減輕氣道高反應(yīng)的作用,為臨床應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)。

    參考文獻(xiàn)

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