丙戊酸鈉對幼鼠代謝的影響及肝毒性的試驗(yàn)探討

羅運(yùn)好　黃漢輝　王燕莉

[摘要]目的：通過觀察丙戊酸鈉（VPA）作用后的Wistar 幼鼠的肝功能、瘦素、胰島素的變化分析對其影響因素。方法：選用SPF級3周齡雄性Wistar大鼠36只，平均體重48 g。并隨機(jī)分為兩組(每組23只) ，空白對照組：經(jīng)口灌胃等量蒸餾水；VPA組：經(jīng)口灌胃VPA 300 mg/(kg·d)，每周2次；3個(gè)月后檢測體重變化、瘦素、胰島素、血清ALT、血清AST、血清GST、肝MDA、肝GSH以及肝GST。結(jié)果：與空白對照組比較，VPA組AST、肝GST、瘦素、胰島素顯著升高（P<0.01），體重顯著增加（P<0.05），肝GSH含量顯著降低（P<0.01），而血清ASL、血清GST、肝MDA則均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：長期應(yīng)用VPA 會(huì)造成肝毒性及心血管系統(tǒng)潛在危險(xiǎn)。

[關(guān)鍵詞]丙戊酸鈉；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；毒理試驗(yàn)

[中圖分類號] R332 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]1674-4721（2009）05（a）-０59－０2

Effects of valproate on metabolism in rats and liver toxicity tests

LUO Yunhao,HUANG Hanhui,WANG Yanli

(The third Affiliated Hospital of Guangzhou Medical College Pharmacy，Guangzhou 510150，China)

[Abstract]Objective: To investigate the effects of valproate sodium(VPA) on hepatic injury and leptin,insulin via the observations of biochemical indicators in immature rat. Methods: Sixty 3-week-old male Wistar rats were randomly divided into two groups: experimental groups(VPA group) and negative control group (23 for each group).After 3 months,test the weight , Serumleptin, Seruminsulin, SerumALT, SerumAST, SerumGST,liver MDA, SerumGSH and the SerumGST. Results: Serum leptin , insulin, AST and liver GST levels in both experimental groups(VPA group) were remarkably higher than the of the negative control group(P<0.01),but liver GSH levels in both experimental groups(VPA group) were remarkably lower. Conclusion: VPA can cause the potential dangerous in liver and cardiovascular system.

[Key words] Valproate;Animal experiment;Toxicology test

在目前的抗癲癇治療中，因VPA對多種類型的發(fā)作都有效，尤其對失神發(fā)作，原發(fā)性全身強(qiáng)直陣攣發(fā)作效果較好，因此在臨床上仍然作為一線抗癲癇藥。但其對各種代謝尤其是脂質(zhì)代謝的影響及肝臟毒性等不良反應(yīng)也最令人關(guān)注[1]。本研究為VPA的長期使用對機(jī)體代謝功能及肝毒性影響提高試驗(yàn)依據(jù)。

1材料與方法

1.1動(dòng)物分組及給藥

選用SPF級3周齡雄性Wistar大鼠36只，平均體重48 g（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號：0080311號）。將大鼠隨機(jī)分為兩組(每組23只) ，空白對照組：經(jīng)口灌胃等量蒸餾水；VPA組：經(jīng)口灌胃VPA 300 mg/(kg·d)，每周2次。

1.2樣本制備及檢測

連續(xù)用藥3個(gè)月后斷頭取血，分離血清，使用OlymPus AU 100生化儀測定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)；利用放射免疫分析法檢測血清瘦素及胰島素水平，試劑盒由北京解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所提供。取肝左葉同一部位小塊肝臟，備肝勻漿，離心取上清液，用分別用硫代巴比妥法、三硫代二硝基苯甲酸法測定肝勻漿中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量和用谷胱甘肽二硝基苯法測定血清、肝勻漿中谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)活性的測定 （所用試劑盒購自南京建成生物工程研究所，按說明書操作)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 13.0軟件分析處理，用單因素方差分析數(shù)據(jù)以x±s表示，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

與空白對照組比較，VPA組AST、肝GST、瘦素、胰島素顯著升高（P<0.01），體重顯著增加（P<0.05），肝GSH含量顯著降低（P<0.01），而血清ASL、血清GST、肝MDA則均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

3 討論

迄今為止，對于研究幼年期長期服用VPA對血清LEP、INS、ALT、AST、GST、MDA、GSH、GST等多因素綜合水平影響的研究不多。

3.1 VPA引起體重增加、瘦素水平的具體機(jī)制

本實(shí)驗(yàn)觀察到服用VPA的幼年大鼠，均顯著出現(xiàn)了體重增加，同時(shí)血清空腹瘦素、胰島素水平明顯高于對照組，這與以往的試驗(yàn)結(jié)論相一致。國外對丙戊酸鈉對瘦素的影響尚存在分歧，VPA引起體重增加、瘦素水平的具體機(jī)制尚不明確，目前初步認(rèn)為[2]：①VPA可與肉毒堿結(jié)合，形成VPA-肉毒堿復(fù)合體，從而降低血漿中游離的肉毒堿濃度，導(dǎo)致脂肪酸代謝和糖異生受損，葡萄糖消耗增加低血糖刺激下丘腦中部神經(jīng)元引起攝食增加。②VPA是脂肪酸的一個(gè)分支，可與長鏈脂肪酸相互競爭，使血糖水平降低，從而使下丘腦糖受體的刺激降低，影響中樞性飲食調(diào)節(jié)，使進(jìn)食量增大。③VPA通過作用于下丘腦神經(jīng)元而降低交感神經(jīng)系統(tǒng)的活性，引起熱能產(chǎn)生減少。上述三種機(jī)制最終都會(huì)引起脂肪沉積量增加，瘦素水平上升。因此筆者認(rèn)為，血清瘦素水平的升高是肥胖的結(jié)果而不是引起肥胖的原因，此觀點(diǎn)與國外學(xué)者一致。與瘦素一樣，國外對VPA引起胰島素水平變化的具體機(jī)制并未完全明了，非肥胖病人服用VPA后，其胰島素水平亦高于對照組中的非肥胖病人，說明服用VPA后，肥胖病人的胰島素水平的增高不僅僅是體重增加引起的結(jié)果。因此，本研究推測VPA引起體重增加的發(fā)病機(jī)制可能與胰島素有關(guān)，胰島素是引起體重增加的原因，而不是體重增加后的結(jié)果。

3.2 GST分布

GST是一項(xiàng)對肝損害特異性及敏感性均較強(qiáng)的酶，且肝組織含量豐富，GST和ALT的共同測定對慢性肝損害的診斷價(jià)值優(yōu)于ALT。本研究結(jié)果與霍曉筠等[3]的臨床報(bào)道相似，由于AST主要分布在心肌，其次在肝臟、骨骼肌、腎臟等組織中，推測藥物反應(yīng)可能涉及到心肌、骨骼肌、腎臟等組織。本研究用藥組血清ALT和GST均未見升高，提示VPA尚未對肝細(xì)胞膜造成嚴(yán)重的損害。

3.3 GSH與VPA的關(guān)系

同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)也觀察到，VPA的作用尚未出現(xiàn)MDA含量的改變，但這不能否認(rèn)過氧化反應(yīng)在藥物致肝損傷中的作用。Isojarvi等[4]研究VPA肝毒性機(jī)制時(shí)提出VPA先致肝細(xì)胞GSH耗竭到一定程度后才出現(xiàn)脂質(zhì)過氧化，最后引起細(xì)胞毒作用。而GST是一類與肝臟解毒有關(guān)的酶[5]，催化GSH與化學(xué)物質(zhì)的親電子基團(tuán)結(jié)合，最終形成硫醚氨酸排出體外。本實(shí)驗(yàn)中VPA對GST活性的誘導(dǎo)作用，推測可能通過催化GSH與VPA代謝產(chǎn)物4-烯-VPA結(jié)合起作用。

4 結(jié)論

長期服用抗癲癇藥VPA對幼年期瘦素水平影響大，對幼年期容易引起脂代謝紊亂，影響幼年期的生長發(fā)育;VPA對幼年期胰島素水平影響大，容易出現(xiàn)肥胖。胰島素水平的升高亦增加了糖尿病、心血管疾病的發(fā)病概率，同時(shí)可引起機(jī)體抗氧化能力降低，提示臨床應(yīng)用時(shí)應(yīng)對該兩個(gè)系統(tǒng)加強(qiáng)觀察，合理調(diào)整藥量及時(shí)間。

[參考文獻(xiàn)]

[1]李玉華,豐連功.102例癲癇患者丙戊酸鈉血藥濃度監(jiān)測分析[J].中外健康文摘(醫(yī)藥月刊),2008,(2):14-15.

[2]Demir E,Aysun S.Weight gain associated with valproate in childhood[J].Pediatr Neurol,2000,22:361-364.

[3]霍曉筠,王富偉.丙戊酸鈉對兒童肝臟酶活性的影響[J].遼寧藥物與臨床,2001,(3):35.

[4]Isojarvi JI,Rattya J,Mylla VV,et al.Valproate,lamotrigine and insulin-mediated risk in women with epilepsy[J].Ann Neurol,1998,43:446-451.

[5]陳智清,倪龍娟.有效血濃度丙戊酸鈉對兒童肝功能的影響[J].浙江醫(yī)學(xué),2006,(10):869-870.

(收稿日期：2009-03-09)