ＨＩＦ－１α在肝癌組織中的表達(dá)及臨床意義

張　晨

[摘要]目的：探討HIF-1α在肝癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法：采用免疫化學(xué)SABC染色檢測HIF-1α表達(dá)情況。結(jié)果：HIF-1α在肝癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織及正常肝組織。結(jié)論：HIF-1α的表達(dá)與肝癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] HIF-1α；肝癌組織

[中圖分類號] R735 [文獻標(biāo)識碼]A [文章編號]1674-4721（2009）05（a）-０53－０2

在實體瘤的惡性增殖過程中普遍存在缺血缺氧現(xiàn)象，缺氧狀態(tài)下,細(xì)胞內(nèi)缺氧反應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)發(fā)生改變,從而對缺氧作出應(yīng)激反應(yīng),使細(xì)胞、組織和機體產(chǎn)生一系列適應(yīng)性反應(yīng)以維持供氧的平衡。腫瘤細(xì)胞的低氧適應(yīng)主要由HIF-1α(Hypoxia-inducible factor 1α)介導(dǎo)，腫瘤內(nèi)低氧可導(dǎo)致HIF-1α過表達(dá)，并涉及腫瘤細(xì)胞的代謝適應(yīng)、凋亡抵抗、血管生成和侵襲與轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因表達(dá)[1]。本文主要探討HIF-1α在肝癌、肝癌旁組織及正常肝組織中的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料

30例肝癌患者肝組織及癌旁組織、10例正常對照肝組織標(biāo)本。30例肝癌患者為2007年2月～2009年1月間住院患者，術(shù)后均經(jīng)病理證實為肝細(xì)胞癌。其中男性18例、女性12例，年齡34～72歲，平均年齡46歲，10例正常肝組織為肝血管瘤和肝囊腫周圍的正常肝組織。

1.2 試劑和方法

兔抗人HIF-1α抗體購自美國Santa Cruz公司（工作濃度1∶100），免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自北京中山生物技術(shù)有限公司。采用免疫化學(xué)SABC染色檢測HIF-1α表達(dá)情況。分別用PBS代替一抗作為陰性對照,用已知陽性組織切片作為陽性對照。

1.3 免疫組化結(jié)果判斷[2]

HIF-1α陽性染色定位于肝細(xì)胞漿，肝細(xì)胞核中亦有少量表達(dá)，呈棕黃色或棕褐色顆粒，表達(dá)水平采用染色強度評分與陽性細(xì)胞百分率評分的積分表示，每張切片選取5個高倍視野計數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)和計數(shù)細(xì)胞總數(shù)，陽性細(xì)胞數(shù)/計數(shù)細(xì)胞總數(shù)x100%為陽性細(xì)胞百分率。陽性細(xì)胞百分率分0～3級：陽性細(xì)胞百分率≤5％為0分；陽性細(xì)胞百分率達(dá)6％～25％為1分；陽性細(xì)胞百分率達(dá)26％～50％為2分；陽性細(xì)胞百分率>50％為3分。染色強度分0～2級：完全陰性，與背景一致=0；染色呈淡黃色，略高于背景=1；染色呈黃色或棕黃色，明顯高于背景=2。將每張片子的染色強度與陽性細(xì)胞百分率得分相乘為其最后得分。兩項相乘后分4級：0～1分為（－），2分為（＋），3～4分為（＋＋），5分以上為（＋＋＋）。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 14.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理。采用X²檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

肝癌組織和癌旁組織中均可見到HIF-1α的表達(dá)，而在正常肝組織中基本無表達(dá)。HIF-1α陽性染色主要位于肝細(xì)胞胞漿中,部分胞核中也有表達(dá)，呈棕黃色和棕褐色顆粒。HIF-1α在正常肝組織和癌旁肝組織中肝細(xì)胞胞漿中無著色或著色淺。其中30例肝細(xì)胞癌中HIF-1α的表達(dá)強于癌旁組織中HIF-1α的表達(dá)，肝癌組織、癌旁組織HIF-1α的表達(dá)明顯強于正常肝組織中HIF-1α的表達(dá)見表1。

3討論

缺氧是實質(zhì)性腫瘤微環(huán)境的基本特征之一。缺氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia-inducible factor1,HIF-1)是廣泛存在于動物及人體的多種腫瘤細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄因子，HIF-1通過刺激腫瘤血管新生、維持腫瘤細(xì)胞的能量代謝、促進腫瘤血管新生、維持腫瘤細(xì)胞的能量代謝、促進腫瘤增殖等作用引起腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移，HIF-1由HIF-1α和HIF-1β亞基組成。缺氧反應(yīng)基因的調(diào)控主要是由HIF-1α來實現(xiàn)。HIF-1α在正常氧分壓時極不穩(wěn)定，易被泛素依賴的蛋白水解酶降解[2]，常氧條件下半衰期小于10 min，但在低氧時半衰期顯著延長。在多數(shù)惡性腫瘤組織內(nèi)，HIF-1α都有一定程度表達(dá)，包括一些癌前病變和早期癌變，提示腫瘤細(xì)胞低氧發(fā)生在血管生成之前，并進而促進腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化[3]。HIF-1α是低氧狀態(tài)下血管生成的核心調(diào)控因子，HIF-1α在組織處于低氧狀態(tài)時發(fā)揮轉(zhuǎn)錄和基因調(diào)控作用，通過影響其他因子的表達(dá)，而直接參與血管生成的全過程。新生血管體系的形成是腫瘤解決低氧的重要途徑之一，而腫瘤新生血管形成與實體瘤的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān),并影響大部分腫瘤的預(yù)后。

筆者研究結(jié)果顯示，HIF-1α在肝癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織及正常肝組織，說明HIF-1α的表達(dá)與肝癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)?？紤]肝癌組織中HIF-1α的升高可能與下列因素有關(guān)[4]：①肝組織的缺血、缺氧使HIF-1α表達(dá)上調(diào)。②一些病理情況下組織結(jié)構(gòu)異常和血液動力學(xué)紊亂使細(xì)胞存在缺氧微環(huán)境。③多種抑癌基因的失活如P53、癌基因的激活如Src等亦能上調(diào)HIF-1α的表達(dá)[5-9]。

缺氧引起的基因表達(dá)改變可能是腫瘤生長、侵襲轉(zhuǎn)移的一個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。隨著對缺氧反應(yīng)基因HIF-1研究的深入,相信以HIF-1為靶點治療腫瘤將可能成為腫瘤治療的又一重要手段。

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(收稿日期：2009-03-18)