荊門上清丸中兒茶素、表兒茶素的含量測(cè)定

劉荊金　田平林　陳科力

【摘要】目的：建立荊門上清丸的定量分析方法。方法：用高效液相色譜法測(cè)定荊門上清丸中兒茶素、表兒茶素的總含量。色譜柱為C18柱(250mm×4．6mm，5um)，流動(dòng)相為甲醇-5%乙酸，梯度洗脫，流速為1．0mL／min，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)278nm。結(jié)果兒茶素，表兒茶素的平均回收率分別為為99.04%，100.74%，RSD分別為1.63%，2.32%。結(jié)論：該方法可用于荊門上清丸的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】荊門上清丸；兒茶素；表兒茶素；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

【中圖分類號(hào)】R917【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1007-8517(2009)08-0025-01

荊門上清丸來(lái)源于荊門李氏“老積蔭堂”家傳的祖?zhèn)髅胤?由兒茶、冰片、麝香、桔梗、荊芥等10味藥組成，具有清熱解毒的功效，治療咽喉腫痛，口舌生瘡，風(fēng)火牙痛，傷風(fēng)中暑，風(fēng)熱咳嗽，小便短赤等癥。由于該方配伍精當(dāng)，療效卓著。該方中藥味特殊，劑量相差懸殊，生產(chǎn)工藝獨(dú)特，在早期生產(chǎn)時(shí)一直沿襲手工塑制成型。為使這一古方更好得到繼承和發(fā)揚(yáng)，在基本尊照古方制法的基礎(chǔ)上，現(xiàn)研究了荊門上清丸的生產(chǎn)工藝，并制定其質(zhì)量控制方法。兒茶為方中主藥，兒茶素、表兒茶素為主要有效成分，因此荊門上清丸采用兒茶素、表兒茶素作為化學(xué)對(duì)照品，用HPLC法控制質(zhì)量。報(bào)告如下。

1儀器與試藥

1.1儀器高效液相色譜儀DIONEXP680HPLC；梅特勒-托利多電子天平AE100（精密為0.0001g）；水為二次蒸餾水，其余試劑均為分析純。

1.2試藥兒茶素、表兒茶素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；荊門上清丸，荊門齊進(jìn)藥業(yè)提供。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件①色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.5%冰醋酸梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm。理論板數(shù)兒茶素、表兒茶素計(jì)應(yīng)不低于5000。②對(duì)照品溶液的制備：精密稱取經(jīng)60℃減壓干燥4小時(shí)的兒茶素、表兒茶素對(duì)照品適量，加甲醇，分別制成0.30mg/ml，0.13mg/ml溶液，即得。③供試品溶液的制備：取荊門上清丸適量，研細(xì)，取粉末約0.10g，精密稱定，置100ml容量瓶中，精密加入甲醇：水（1:1）的溶劑80ml，超聲處理20分鐘，放冷，加甲醇：水（1:1）至刻度，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液即得。④測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.1.1流動(dòng)相PH值的選擇對(duì)同一供試品溶液分別采用不同PH值的流動(dòng)相，比較了不同PH值的流動(dòng)相對(duì)兒茶素、表兒茶素的峰面積、峰形以及峰分離度的影響，分別采用了0.3%冰醋酸、0.5%冰醋酸、0.7%冰醋酸作為流動(dòng)相，對(duì)供試品進(jìn)行含量測(cè)定（批號(hào)：070702）試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。流動(dòng)相的PH值對(duì)峰形和樣品的含量影響不是特別明顯，綜合考慮到色譜柱的對(duì)酸、堿的耐受性以及使用壽命，選擇酸的濃度為0.5%冰醋酸。

2.1.2供試品提取時(shí)間的選擇取同一批樣品（批號(hào)：070702），分別超聲提取10分鐘，20分鐘，30分鐘測(cè)定的含量，結(jié)果分別為15.65%、2.57%；16.38%、2.67%；16.01%、2.59%。由此可知，不同提取時(shí)間對(duì)含量測(cè)定結(jié)果有一定影響，綜合考慮，選擇超聲提取20分鐘作為本品供試品溶液的制備方法。

2.2線性精密吸取不同濃度的對(duì)照品溶液10ul分別注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，得兒茶素、表兒茶素回歸方程分別為為：y=11.1910x－0.1337，r=0.99991；y=12.5282x-0.0072，r=0.99991。結(jié)果表明，兒茶素進(jìn)樣量在0.297μg～5.940μg，表兒茶素進(jìn)樣量在0.130μg～2.600μg的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3準(zhǔn)確度取本品（批號(hào)：070702）6分，每份約0.1g，研細(xì)，精密稱定，置具塞100ml容量瓶中，加入甲醇：水（1：1），超聲處理20分鐘，放冷，精密加入兒茶素、表兒茶素對(duì)照品分別約16.50mg、2.50mg，用甲醇：水（1：1）標(biāo)定至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；按供試品含量測(cè)定方法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果本方法的回收率分別為99.04%，100.74%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.63%，2.32%。

2.4重復(fù)性對(duì)同一批荊門上清丸（批號(hào)：070702）制備了六份供試品溶液，按供試品含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，本方法相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.59%、1.83%。

2.5專屬性按處方比例制備不含兒茶的缺兒茶陰性樣品并制備陰性供試品溶液。分別精密吸取兒茶素、表兒茶素對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，比較色譜圖可知本方法專屬性較好，陰性無(wú)干擾。見(jiàn)圖1～圖3。

2.6樣品測(cè)定按含量測(cè)定方法對(duì)荊門上清丸十批樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。據(jù)測(cè)定結(jié)果，暫定本品成品含兒茶素和表兒茶素的總量不得少于15%。

3討論

本文實(shí)驗(yàn)證明,在選定的色譜條件下，兒茶素、表兒茶素色譜峰理論塔板數(shù)都可達(dá)到10000以上，出峰時(shí)間分別在15、20分鐘左右，其精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性好，可作為荊門上清丸中兒茶素、表兒茶素含量測(cè)定有效方法；另外，通過(guò)不同批次的樣品含量測(cè)定，擬定了兒茶素和表兒茶素的總量，為荊門上清丸藥物的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]劉超,馬林，陳偌蕓,等.反相高效液相色譜法測(cè)定雞血藤中兒茶素類成分的含量[J].中國(guó)中藥雜志,2005,30(18):1433-1435.

(收稿日期：2009.02.21)