乙肝兩對(duì)半酶聯(lián)免疫法與金標(biāo)法的應(yīng)用及注意事項(xiàng)

牛平英

[摘要]目的：探討酶聯(lián)免疫法和金標(biāo)免疫法在檢測(cè)乙肝五項(xiàng)中的應(yīng)用。方法：用金標(biāo)快速板法與EUSA法的結(jié)果比較。結(jié)果：200例大三陽結(jié)果兩法比較完全一致；150例小三陽中，金標(biāo)法HBsAg有10例未檢出，50例攜帶者有6例未檢出，符合率96％。結(jié)論：酶聯(lián)免疫法時(shí)間長(zhǎng)，步驟多，特異性強(qiáng)、靈敏度高，重復(fù)性好，適合批量檢測(cè)。金標(biāo)法快速簡(jiǎn)便，單份測(cè)定，可立等結(jié)果等優(yōu)點(diǎn)，無需任何儀器設(shè)備，試劑穩(wěn)定因此適合于急診檢測(cè)。

[關(guān)鍵詞]乙肝兩對(duì)半；金標(biāo)快速檢測(cè)板：酶聯(lián)免疫法

[中圖分類號(hào)]R450

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B

[文章編號(hào)]1674-1721(2009)03(a)-049-01

隨著人們生活水平日益提高，健康意識(shí)不斷增強(qiáng)，兩對(duì)半檢測(cè)已成為人們的日常體檢、獻(xiàn)血員體檢、手術(shù)及急診輸血前后的常規(guī)檢查項(xiàng)目，以達(dá)到對(duì)乙肝早診斷、早預(yù)防、早治療。現(xiàn)在把金標(biāo)法與酶聯(lián)免疫法做一比較：

1材料與方法

1.1樣本來源

標(biāo)本來自2007～2008年8月我院門診、住院患者及健康體檢者。收集ELISA法檢測(cè)結(jié)果全部陰性者200例；HBsAg、HBeAg、HBeAb(大三陽)陽性者200例；HBsAg、HBeAb、HB—cab(小三陽)陽性者150例；HBsAg、抗-HBc陽性者50例攜帶者。大三陽與小三陽與攜帶者患者中，男220例，女180-例，年齡6—69歲，靜脈采血，肝素抗凝或干燥管分離血漿／血清，放于-20℃冰箱內(nèi)備用。

1.2試劑

金標(biāo)快速檢測(cè)板采用艾康生物技術(shù)(杭州)有限公司產(chǎn)品.批號(hào)為：00706024。

ELISA試劑購(gòu)于上海科華生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：200705117，按說明書保存試劑盒，操作時(shí)從冷藏箱取出，放置于37℃恒溫30min，使試劑溫度恢復(fù)至37℃后方可使用，試劑從冰箱取出恢復(fù)到反應(yīng)溫度需要時(shí)間。在平衡試劑的同時(shí)。待測(cè)標(biāo)本需置室溫平衡30min后再進(jìn)行測(cè)試，如果取出后測(cè)定，試劑溫度、時(shí)間達(dá)不到要求，抗原抗體反應(yīng)不完全而可能出現(xiàn)假陰性。

1.3儀器

DG5033A型酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。

1.4方法

金標(biāo)快速檢測(cè)板采用快速免疫層析法，其中HBsAg、HBeAg采用雙抗體夾心法，HBsAb采用雙抗原夾心法，HBeAb、HBeab采用競(jìng)爭(zhēng)抑制法，按說明書要求操作并判斷結(jié)果。

ELISA法采用DG5033A型酶聯(lián)免疫檢測(cè)，以S／CO值判定結(jié)果：①標(biāo)本要分離好否則纖維蛋白吸附于孔壁，難以洗脫，加入底物顯色出現(xiàn)假陽性；標(biāo)本不要溶血，溶血是由于各種原因引起紅細(xì)胞破壞，細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白進(jìn)入血液，血紅蛋白具有類似于過氧化物酶的活性，其作用與辣根過氧化物酶相似。如果反應(yīng)孔非特異性吸附血紅蛋白而殘留，可催化底物顯色，造成假陽性；相鄰標(biāo)本出現(xiàn)陽性污染出現(xiàn)假陽性。②加樣：加樣器要垂直不可傾斜，否則人為加大量，加樣時(shí)間不可過長(zhǎng)，以免造成加樣后放入恒溫箱等待時(shí)間過長(zhǎng)；使用試劑前應(yīng)搖勻，并棄去1-2滴后垂直加入；不同批號(hào)的試劑不可混用；防止加酶時(shí)酶試劑濺出孔外，導(dǎo)致非特異結(jié)合物吸附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗。③溫育：要加封片或加盞，封片不能重復(fù)使用，溫育時(shí)間準(zhǔn)確，人為延長(zhǎng)時(shí)間，導(dǎo)致非特異性結(jié)合吸附于反應(yīng)空孔周圍。④洗板，洗板機(jī)洗板選擇洗滌5次程序洗板后拍干，注意，洗板針不要堵塞，抽吸要完全，洗液量足。⑤結(jié)果：用酶標(biāo)儀讀數(shù)，取波長(zhǎng)450nm，先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。結(jié)果判斷須在反應(yīng)終止后10min內(nèi)完成。

2結(jié)果

2.1兩種檢測(cè)法全陰性者比較

ELISA法檢測(cè)結(jié)果全陰者200例與金標(biāo)法檢測(cè)結(jié)果一致。

2.2 400例大三陽、小三陽與攜帶者患者兩種方法檢測(cè)結(jié)果

200例大三陽結(jié)果相同，150例小三陽中，金標(biāo)快速檢測(cè)板有10例未能檢出HBsAb，50例攜帶者6例未檢出.符合率96％，金標(biāo)快速板FIBsAb的靈敏度和特異性稍差，酶聯(lián)免疫法測(cè)定具有特一性強(qiáng)。靈敏度高，重復(fù)性好，但金標(biāo)法時(shí)間短，快速簡(jiǎn)單，適合急診手術(shù)病人的檢測(cè)。

3討論

本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：金標(biāo)快速檢測(cè)板有敏感性和特異性較高，但從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，金標(biāo)快速檢測(cè)板的靈敏度稍低于ELISA法，血清中FibsAg含量大于5ng/ml時(shí).才能檢出。特別對(duì)小三陽和乙肝攜帶者有漏診的可能。而且金標(biāo)快速檢測(cè)板成本高于ELISA法。但時(shí)間短，快速簡(jiǎn)便。可以單份測(cè)定可立等結(jié)果等特點(diǎn)，無需任何儀器設(shè)備，試劑穩(wěn)定，適合急診檢測(cè)。多用于急診手術(shù)，獻(xiàn)血員體檢篩選。而酶聯(lián)免疫ELISA法具有特異性強(qiáng)，靈敏度高，檢測(cè)靈敏度0.5ng／ml，重復(fù)性好，可以批量檢測(cè)，但操作步驟繁瑣，對(duì)標(biāo)本、試劑要求比較嚴(yán)格，有許多影響因素，因此，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)需要并結(jié)合工作情況選用。