高效液相色譜法測定和胃散中芍藥苷含量

劉光斌　毛和平　劉效栓　隆旭紅　李懷彪　張　迅　張玉葉

【摘要】 目的 建立測定和胃散中芍藥苷含量的高效液相色譜法。方法 使用HYPERSIL-C_{18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙晴-0.1%磷酸溶液(14∶86)為流動(dòng)相，流速為0.8 ml/min，檢測波長為230 nm。 結(jié)果 該方法測定芍藥苷在75～125 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好( r = 0.999 0)。平均回收率為99.5%，100.2%，99.7%；RSD為0.44%，0.42%，0.45%(n=3)。結(jié)論 該測定方法簡單、精密度高、重現(xiàn)性好，是測定和胃散中芍藥苷含量的可行方法。}

【關(guān)鍵詞】 和胃散；芍藥苷；高效液相色譜法；含量測定

Determination of the content of paeoniflorin in Hewei powder by HPLC LIU Guang-bin，LIU Xiao-shuan，MAO He-ping，et al.Jiugang Hospital，Jiayuguan，Gansu 735100，China

【Abstract】 Objective To establish a method for determinating paeoniflorin in Hewei powder by HPLC.Methods HYPERSIL-C₁₈column (150 mm×4.6 mm，5 μm) was used，and the mobile phase consisted of acetonitrile-0.1%H₃PO₄ solution (14∶86).The flow rate was 0.8 ml/min and the determination wavelength was at 230 nm.Results A good linearity was obtained within the range of 75~125 μg/ml of paeoniflorin ( r=0.9990).The average recoveries ware 99.5%，100.2% and 99.7%；RSD ware 0.44%，0.42% and 0.45%(n=3).Conclusion This method is simple，rapid and accurate which can be used to determine paeoniflorin contents in Hewei powder.

【Key words】 Hewei Powder；Paeoniflorin；HPLC；Content determination

和胃散是本院研制的治療慢性胃腸炎、消化性潰瘍的中藥制劑，由肉桂、白芍、香附、當(dāng)歸、陳皮等10 味中藥組成，經(jīng)多年臨床觀察，療效顯著。芍藥苷是和胃散中白芍的主要成分。筆者采用高效液相色譜法測定和胃散中芍藥苷的含量，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-10AD高效液相色譜儀：LC-10AD溶劑泵、SPD-10A紫外檢測器、島津CR-6A數(shù)據(jù)處理機(jī)。

1.2 試藥 和胃散(酒鋼醫(yī)院制劑室自制，批號(hào)：20060728，20060812，20060925)；對照品芍藥苷，中國藥品生物制品檢定所提供。乙晴為色譜純；磷酸，正丁醇為分析醇。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：HYPERSIL-C₁₈(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為：乙晴-0.1%磷酸溶液(14∶86)，檢測波長：230 nm，靈敏度：0.0050AUFS，紙速：1 cm/min，流速：0.8 ml/min，柱溫為室溫。理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000，分離度(R)應(yīng)>1.5。

2.2 試驗(yàn)溶液的制備

2.2.1 樣品溶液的配制 精密稱取本品約3.0 g，置碘量瓶中，加正丁醇25 ml，超聲處理(功率240 W，頻率45 KHz)30 min，放冷，濾過，分別用5 ml正丁醇沖洗碘量瓶及濾器3~4次，沖洗液并入濾液中，水浴加熱濃縮至約15 ml，定量轉(zhuǎn)移到25 ml量瓶中，加正丁醇至刻度，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.2 對照品溶液的配制 照線形關(guān)系考察項(xiàng)下方法，配制100 μg/ml芍藥苷對照品溶液，用0.45 μm微孔濾膜濾過即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 檢測波長的選擇 精密量取對照品溶液0.5 ml，置于10 ml 容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻。在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，得到芍藥苷在230 nm處有最大吸收。在高效液相色譜儀上進(jìn)樣，在230 nm波長處出峰較好。

2.3.2 線形關(guān)系考察 精密稱取芍藥苷對照品約6.3 mg，置50 ml容量瓶中，加正丁醇40 ml，振搖使溶解，加正丁醇至刻度。精密量取上述溶液10、9、8、7、6 ml，分別移置10 ml容量瓶中，加正丁醇至刻度，再分別用0.45 μm微孔濾膜濾過，在上述色譜條件下，各進(jìn)樣20 μl，每個(gè)濃度重復(fù)進(jìn)樣3次，以芍藥苷峰面積平均值對其濃度C(μg/ml)計(jì)算回歸方程，結(jié)果為：

A=-4.11×104C+6.98×106 r=0.999 0

結(jié)果表明，芍藥苷濃度在75~125 μg/ml的范圍內(nèi)與其峰面積呈量好的線形關(guān)系(圖譜見圖1)。

圖1 HPLC色譜圖

A.空白 B.樣品 C.對照品

2.3.3 精密度考察 精密量取100 mg/ml對照品溶液連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次，其峰面積RSD=0.30%。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(批號(hào)：20060925)的樣品溶液，配制后立即測定1次(0 h)，再于室溫中放置2、4、6、8 h后再進(jìn)樣，測得芍藥苷峰面積的RSD=0.50%(n=5)；再于室溫中放置0.5、1、2、3、4 d后再進(jìn)樣，測得芍藥苷峰面積的RSD=0.97%(n=5)。表明該方法的穩(wěn)定性好，符合高效液相色譜法測定的需要。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(批號(hào)：20060925)的樣品5份，按樣品溶液的配制項(xiàng)方法配制樣品溶液，按上述方法測定，結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD=0.45%(n=5)。表明該方法的重復(fù)性好。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品細(xì)粉9份，每份約3.0 g，均分為3組。每組分別精密加入對照品芍藥苷約2.70、2.25、2.0 mg。同樣品測定項(xiàng)法制備溶液并測定芍藥苷的含量，芍藥苷的平均回收率分別為99.5%、100.2%、99.7%，RSD分別為0.44%、0.42%、0.45%。結(jié)果表明，該方法回收率良好。

2.4 樣品含量的測定 對照品溶液和樣品溶液各進(jìn)樣20 μl，按上法測定，用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。本品每1 g含白芍以芍藥苷(C₂₃H₂₈O₁₁)計(jì)不得少于0.60 mg，見表1。

3 討論

芍藥苷的含量測定方法有分光光度法、薄層掃描法、高效毛細(xì)管電泳法和高效液相色譜法等^[1-3]。根據(jù)適用性原則，采用高效液相色譜法完全能滿足芍藥苷測定的準(zhǔn)確度、靈敏度及重現(xiàn)性的要求，設(shè)備要求條件適合廣泛應(yīng)用。筆者在本實(shí)驗(yàn)中獲得了較佳的效果。

目前，對于用高效液相色譜法測定制劑中芍藥苷含量研究主要采用不同比例的乙腈-水(磷酸、乙酸或者甲醇)、甲醇-異丙醇-冰乙酸-水和甲醇-水等3大類系統(tǒng)作流動(dòng)相^[1]。筆者曾對流動(dòng)相的選擇進(jìn)行摸索，調(diào)整原流動(dòng)相乙腈-水的比例，但分離度幾無改進(jìn)，甲醇-水雖有改進(jìn)，但仍達(dá)不到基線分離，甲醇-乙腈-磷酸分離度很好，但保留時(shí)間過長，故最終選擇能達(dá)到基線分離且保留時(shí)間適中的乙晴-0.1%磷酸溶液(14∶86)作流動(dòng)相，取得了滿意的分離效果。實(shí)驗(yàn)過程中采取回流提取和超聲波提取，經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)超聲波提取法時(shí)間短、提取物中雜質(zhì)少，直接測定可以達(dá)到完全分離。筆者也對超聲時(shí)間進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)超聲15 min不能提取完全，而30 min則提取較完全。

通過方法學(xué)的考察，確定筆者在本實(shí)驗(yàn)中采用的測定方法具有精密、準(zhǔn)確和穩(wěn)定的特性，回收率也符合有關(guān)要求。因此，此法可以用于和胃散中芍藥苷的含量測定。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] 方世平，劉萍，楊瑜，等.芍藥苷的含量測定方法概述.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2004，23 (增刊)：1-4.

[2] 賈金萍，秦雪梅，王光麗，等.高效液相色譜法測定鞭芍膠囊中芍藥苷的含量.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2005，25 (2) ：136-137.

[3] 楊麗.HPLC法測定千金止帶丸中芍藥苷的含量.中國藥事，2007，21(6)：422-423.