ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ法測(cè)定益母草流浸膏中鹽酸水蘇堿的含量

林冬杰　張會(huì)球

摘 要：目的：建立高效液相色譜-蒸發(fā)光散射（HPLC-ELSD）檢測(cè)法測(cè)定益母草流浸膏中鹽酸水蘇堿含量的方法。方法：采用高效液相色譜法，以蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，采用外標(biāo)二點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算含量。色譜柱為KromasilNH2(250mm×4.6mm，5μm，S/N:22N25110)，以甲醇-乙腈(50∶50)為流動(dòng)相，流速:1.0mL/min，柱溫：30℃，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器：霧化器溫度:60℃，漂移管溫度：90℃，氣體（氮?dú)猓┝魉伲?.0L/min。結(jié)果：鹽酸水蘇堿進(jìn)樣量在0.16~1.6μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.9990，平均回收率為98.73％，RSD=0.93％(n=6)。結(jié)論：本方法快速簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，可用于益母草流浸膏的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：益母草流浸膏；鹽酸水蘇堿；HPLC-ELSD

中圖分類號(hào)：R914文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-2197（2009）02-0045-02

益母草流浸膏是2005年版《中國(guó)藥典》一部收載的品種，其中以薄層掃描法測(cè)定益母草中鹽酸水蘇堿的含量，考慮到而薄層掃描法的影響因素較多，對(duì)益母草流浸膏中鹽酸水蘇堿的含量測(cè)定方法進(jìn)行了探索。用HPLC-ELSD法測(cè)定了益母草流浸膏中鹽酸水蘇堿的含量，該法操作更簡(jiǎn)便、靈敏度高、穩(wěn)定性及重現(xiàn)性好，可作為母草流浸膏中鹽酸水蘇堿含量測(cè)定的新方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

美國(guó)Agilent 1200高效液相色譜儀，英國(guó)PL-ELS2100型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，浙江大學(xué)N2010色譜數(shù)據(jù)工作站，日本GR-202電子分析天平(十萬分之一)。

1.2 試藥

益母草流浸膏（廣西醫(yī)科大學(xué)制藥廠，批號(hào)：20060701），鹽酸水蘇堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：11702-200508），流動(dòng)相甲醇、乙腈為色譜純（美國(guó)Scientific Fisher Technology），甲醇、乙醇均為分析純（廣東光華化學(xué)廠有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜及檢測(cè)的條件

色譜柱：KromasilNH2(250mm×4.6mm，5μm，S/N:22N25110)，柱溫：30℃，流動(dòng)相：甲醇-乙腈（50∶50），流速：1.0mL/min。ELSD檢測(cè)器：霧化器溫度：60℃，漂移管溫度：90℃，載氣N₂流速：1.0L/min。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取在105℃干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對(duì)照品14.50mg，置10mL容量瓶中，加乙醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1.45mg/mL的溶液，0.22μm濾膜濾過作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。精密稱取在105℃干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對(duì)照品8.10mg，置100mL容量瓶中，加乙醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為0.081mg/mL的溶液，0.22um濾膜濾過作為對(duì)照品溶液。進(jìn)樣量：10μL、20μL。

2.3 供試品溶液的制備

取益母草流浸膏約1g，精密稱定，置25mL容量瓶中，加入乙醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，0.22μm濾膜過濾后作為供試品溶液。進(jìn)樣量：10μL。

2.4 線性關(guān)系的考察

精密吸取對(duì)照品溶液（0.08mg/mL）2μL、5μL、15μL、20μL按2.1項(xiàng)下的色譜條件分別進(jìn)樣，測(cè)得峰面積，以進(jìn)樣量的常用對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，以峰面積的常用對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得回歸方程。Y=1.511X+5.073，r=0.9990。表明鹽酸水蘇堿在0.16~ 1.6ug范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 專屬性實(shí)驗(yàn)

精密取缺益母草的陰性樣品1.0529gmL，按供試品制備陰性對(duì)照品溶液。按上述方法測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照樣品在鹽酸水蘇堿峰位置無干擾。見圖1。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn)

取同一份鹽酸水蘇堿對(duì)照品溶液（0.080mg/mL），在2.1項(xiàng)的色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量10μL，測(cè)定其峰面積，求得鹽酸水蘇堿峰面積對(duì)數(shù)平均值為：4.95，求得RSD為0.12％，表明儀器的精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一供試品溶液（批號(hào)：20060701），分別于2，4，6，8，12h在2.1項(xiàng)的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，進(jìn)樣量10μL，測(cè)定其峰面積，求得鹽酸水蘇堿峰面積對(duì)數(shù)平均值為：5.20，RSD為0.38％，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一供試品溶液(批號(hào)：20060701)，平行取樣6份，按2.2法操作并檢測(cè)。結(jié)果鹽酸水蘇堿平均含量為2.98mg/g，RSD為0.85%，表明方法重復(fù)性良好。

2.9 回收率試驗(yàn)

取已知含量的益母草流浸膏樣品，精密平行稱取6份樣品，分別精密加入0.36mg/mL的鹽酸水蘇堿對(duì)照品溶液4.0mL、4.1mL、4.2mL、4.3mL，按2.2.2項(xiàng)下供試品溶液制備的方法處理，按2.1項(xiàng)的色譜條件測(cè)定含量，并計(jì)算回收率。，結(jié)果平均回收率為98.73％，RSD=0.93％(n=6)，結(jié)果見表1。表明方穩(wěn)定可控。

2.10 樣品測(cè)定

取三批益母草流浸膏樣品，2.1、2.2、2.3項(xiàng)色譜條件及對(duì)照品和供試品溶液的制備方法檢測(cè)，并計(jì)算鹽酸水蘇堿的含量，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 檢測(cè)方法的選擇

取鹽酸水蘇堿對(duì)照品于紫外分光光度計(jì)上掃描，結(jié)果在波長(zhǎng)201nm處有最大吸收，已低于甲醇等常用流動(dòng)相的截止波長(zhǎng)，不宜用紫外檢測(cè)器對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，而可以用通用型檢測(cè)器蒸發(fā)光散射檢測(cè)(ELSD)器進(jìn)行檢測(cè)。

3.2 HPLC-ELSD法和TLCS的比較

《中國(guó)藥典》2005年版一部益母草流浸膏的含量測(cè)定為檗層掃描法（TLCS法），對(duì)同一批益母草流浸膏(批號(hào)：20060701)平行取樣6份進(jìn)行含量測(cè)定，得到其鹽酸水蘇堿含量為0.298mg/g，RSD=2.95%，可見TLCS法和HPLC-ELSD法測(cè)得含量的結(jié)果是相同的，而且用HPLC-ELSD法的RSD更小，操作更簡(jiǎn)便，耗時(shí)更少。

3.3 色譜柱和流動(dòng)相的選擇

色譜柱的選擇:經(jīng)實(shí)驗(yàn)，當(dāng)采用C18反相柱時(shí)，鹽酸水蘇堿的峰有嚴(yán)重的脫尾的現(xiàn)象，而當(dāng)采用氨基正相柱時(shí)，峰形較好，故采用氨基柱。

流動(dòng)相的選擇:經(jīng)實(shí)驗(yàn)用甲醇-水(95∶5)或乙腈-水(95∶5)作為流動(dòng)相時(shí)供試品圖譜的分離度均大于1.5，但鹽酸水蘇堿峰的峰形拖尾，且基線不平，而用甲醇-乙腈(50∶50)作為流動(dòng)相時(shí)，樣品中鹽酸水蘇堿峰分離效果及峰形均良好，故選擇甲醇-乙腈(50∶50)作為流動(dòng)相。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:280.

（責(zé)任編輯：姜付平）