ＨＰＬＣ法測(cè)定安樂片中２，３，５，４′－四羥基二苯乙烯２－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷的含量

李秋云　張　利　周建平

摘 要：目的：建立安樂片中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量測(cè)定方法。方法：采用高效液相色譜法，色譜條件：PhenomenxC18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5μm)；乙腈-水（20∶80）為流動(dòng)相；流速1.0mL?min-1；檢測(cè)波長320nm；進(jìn)樣量10μL；柱溫25℃。結(jié)果：2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷進(jìn)樣量在0.05475～0.438μg范圍內(nèi)，其峰面積值與進(jìn)樣量（μg）有良好的線性關(guān)系，r=0.9996，平均加樣回收率為97.1%，RSD為1.3%（n=6）。結(jié)論：該測(cè)定方法快速簡便，可用于安樂片的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：安樂片；2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷；HPLC

中圖分類號(hào)：R914文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-2197（2009）02-0039-02

安樂片由柴胡、當(dāng)歸、川芎、首烏藤等八味藥材經(jīng)提取加工成的中藥制劑，具有舒肝解郁、定驚安神的功效，用于精神抑郁、驚恐失眠、胸悶不適、納少神疲，對(duì)神經(jīng)官能癥、更年期綜合癥及小兒夜啼、磨牙等癥狀者亦可使用［1］。為了有效控制該制劑的質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜法測(cè)定其中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，結(jié)果顯示該方法簡便，精密度好，重復(fù)性好，可用于本制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

KQ-2500超聲清洗儀（昆山檢測(cè)儀器廠），BP210D電子分析天平（德國塞多利斯），SSI高效液相色譜儀（美國SSI公司），SSI P4000泵，SSI 500 UV/Vis檢測(cè)器，10μL定量環(huán)，色譜柱：Phenomenx C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，HW-2000色譜工作站（千譜軟件有限公司）。

1.2 試藥

2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品（批號(hào)：0844-200003，供含量測(cè)定用），購自中國藥品生物制品檢定所；乙腈為色譜純，水為二次蒸餾水，其余試劑均為分析純（西安化學(xué)試劑廠）；安樂片樣品為自制劑。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（21∶79）；流速1.0mL?min-1；檢測(cè)波長320nm；柱溫25℃；進(jìn)樣量10μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成25μg?mL-1的溶液，備用。

2.3 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物10g，研細(xì)，取約0.7g，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40KHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備

按處方比例及生產(chǎn)制備方法，自制不含首烏藤藥材的陰性樣品，然后按供試品溶液的制備方法制備，即得。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷色譜峰與其它雜質(zhì)峰得到較好的分離，分離度均大于1.5，陰性對(duì)照無干擾，色譜圖見圖1。

2.6 線性關(guān)系考察

取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品，按對(duì)照品溶液制備方法，分別配制成不同濃度的對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜圖。以峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程為：y=3958186.2x-38114.7，r=0.9996。結(jié)果表明，2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷進(jìn)樣量在0.05475～0.438μg范圍內(nèi)，其峰面積值與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，在上述色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面積，結(jié)果RSD為0.46％。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，在上述色譜條件下，分別在0，1，2，3，6和8h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積值，結(jié)果表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品，按2.3項(xiàng)供試品溶液的制備方法，制備5份供試品溶液，分別測(cè)定其中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，結(jié)果RSD為0.87%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.10 回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品適量，研細(xì)，取6份，每份約0.35g，分別精密稱定，分別在其中精密加入一定量的2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品溶液，按供試品溶液制備方法處理，即得加樣回收供試品溶液。在上述色譜條件下，測(cè)定加樣回收供試品溶液中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量。計(jì)算2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷加樣回收率，結(jié)果見表1。結(jié)果表明，本品加樣回收率良好。

2.11 樣品含量測(cè)定

取三批樣品，按上述方法測(cè)定其中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，測(cè)定結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 含量測(cè)定指標(biāo)的選擇

安樂片收載于中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)《中藥成方制劑》第二冊(cè)，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無含量測(cè)定，為了有效控制本品質(zhì)量，筆者選擇處方中首烏藤中的主要成分2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷進(jìn)行了研究，參考有關(guān)文獻(xiàn)資料［2］，建立高效液相色譜法測(cè)定本品中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量的方法，具有分離效果好、靈敏高等優(yōu)點(diǎn)，故將首烏藤中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷作為控制本品質(zhì)量的指標(biāo)成分。

3.2 提取方法的考察

曾用甲醇、乙醇和稀乙醇提取樣品，結(jié)果用甲醇所提取的供試品溶液，雜質(zhì)較少，峰形較好，分離度高，故采用甲醇為樣品的提取溶劑。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 中華人民共和國衛(wèi)生部.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)［S］.中藥成方制劑（第二冊(cè)）.北京：人民衛(wèi)生出版社，1990：104.

［2］ 廖海民，胡正海，賀定翔.制首烏中二苯乙烯苷含量的HPLC測(cè)定［J］.西北藥學(xué)雜志，2006，21(1)：3-4.

（責(zé)任編輯：姜付平）