小議氯霉素的應(yīng)用及其在動(dòng)物體內(nèi)殘留的檢測(cè)方法

李海峰

摘要：近幾年來，經(jīng)國內(nèi)外研究機(jī)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，氯霉素類藥物不適當(dāng)?shù)倪m用于食用性動(dòng)物中，很容易引起氯霉素在動(dòng)物源性食品中殘留超標(biāo)，并對(duì)人體產(chǎn)生嚴(yán)重危害，隨著氯霉素的廣泛應(yīng)用和研究，發(fā)現(xiàn)其有毒、副作用，這就使其在動(dòng)物組織中的殘留引起極大重視。

關(guān)鍵詞：氯霉素殘留分析方法

0引言

氯霉素(chloramphenicol，CAP)是對(duì)革蘭氏陽性、陰性細(xì)菌均有抑制作用的廣譜抗生素，1947年首次從鏈絲菌的培養(yǎng)液中提取而得到的抗生素。氯霉素的化學(xué)名稱為D－蘇式－對(duì)硝基苯基－1二氯乙?；?－3丙二醇，分子式為C11H12CL2N205，分子量為323.13。氯霉素是白色的針狀或片狀晶體，味極苦，性質(zhì)極穩(wěn)定。水中微溶(0.25％)，但易溶于甲醇、丙醇、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑水溶劑呈中性反應(yīng)，在pH10以上可失去活性。本品耐熱，水溶液煮沸5h也不失效，由于其結(jié)構(gòu)中有發(fā)色基團(tuán)存在，在275－280nm處有最大吸收峰，故可直接用紫外檢測(cè)器檢測(cè)氯霉素的作用。

1氯霉素的作用機(jī)理

氯霉素的抗菌作用機(jī)理，在于抑制菌體蛋白的合成，它作用于核蛋白50s亞基上的肽基轉(zhuǎn)移酶，使肽鏈不能向新附著的氨基酸上轉(zhuǎn)移，因而使肽鏈延長受到抑制，同時(shí)能特異的阻止mRNA和敏感的核蛋白結(jié)合。由于哺乳動(dòng)物的核蛋白體與細(xì)菌不同，系由40s亞基和60S亞基組成的80S核蛋白體，氯霉素對(duì)此核蛋白體無作用，故氯霉素對(duì)哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì)的合成無作用。

2氯霉素殘留危害及影響

近幾年來，經(jīng)國內(nèi)外研究機(jī)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，氯霉素類藥物不適當(dāng)?shù)倪m用于食用性動(dòng)物中，很容易引起氯霉素在動(dòng)物源性食品中殘留超標(biāo)，并對(duì)人體產(chǎn)生嚴(yán)重危害，主要表現(xiàn)在：

2.1骨髓造血機(jī)能紊亂氯霉素對(duì)骨髓販造血機(jī)能有抑制作用，可引起血小板減少性紫殿、粒細(xì)胞缺乏癥、再生障礙性貧血、溶血性等，多數(shù)在長期或多次用藥的過程中發(fā)生。發(fā)生率約為1／100000－1／5000。骨髓的毒性分為兩類：一是可逆性抑制。主要影響紅細(xì)胞、血小板和白細(xì)胞的形成。二是再生障礙性貧血。前者與劑量有關(guān)，藥物的血濃度走過5μg／ml即可出現(xiàn)；后者少見，發(fā)生較晚而極為嚴(yán)重，與氯霉素的每日用量和總量均無直接關(guān)系。

2.2對(duì)早產(chǎn)兒和新生兒的毒性在早產(chǎn)兒和新生兒肝內(nèi)有些酶系統(tǒng)發(fā)育尚不完全，葡萄糖醛酸結(jié)合的能力較差，因此影響氯霉素在肝中的解毒過程；此外，腎臟排泄能力亦較弱，能招致藥物蓄積中毒。

2.3胃腸道癥狀、口部癥狀胃腸道反應(yīng)主要有腹脹、腹瀉、食欲減退惡心、嘔吐則少見?？诓堪Y狀如口腔粘膜充血、疼痛、糜爛、口角炎和舌炎等。

2.4其它不良反應(yīng)可引起視神經(jīng)炎、視力障礙、多發(fā)性神經(jīng)炎、神經(jīng)性耳聾以及嚴(yán)重失眠。有時(shí)發(fā)生中毒性精神病，主要表現(xiàn)為幻視、幻聽、定向力喪失、精神失常等。

3氯霉素殘留檢測(cè)方法

對(duì)于氯霉素殘留，由于存在多種檢測(cè)方法，因此各種方法的檢出限問題已成為關(guān)注的焦點(diǎn)。發(fā)達(dá)國家對(duì)檢出限的要求越來越嚴(yán)格。歐盟由原來的10μg／kg改為1μg／kg，繼而又降至0.1μg／kg，比原標(biāo)準(zhǔn)要求提高了100倍：美國FDA規(guī)定的檢出限也由原來的5μg／kg降為0.3μg／kg，且目前正在研究應(yīng)用更為靈敏的方法，可使檢出限值達(dá)0.1μg／kg。近年來各種關(guān)于氯霉素殘留的檢測(cè)方法不斷涌現(xiàn)，大致可分為三大類：第一類是生物測(cè)定法，第二類是理化分析法，第三類是兼有生物和化學(xué)的酶聯(lián)免疫檢測(cè)法。

3.1微生物測(cè)定法微生物測(cè)定法簡(jiǎn)單、費(fèi)用少、速度快，常用于動(dòng)物性食品獸藥殘留的初篩。其中包括棉簽法(STOP)，杯碟法、紙片法、瓊脂擴(kuò)散法、TTC法、BBRT法等，這些方法都存在靈敏度低的缺點(diǎn)，微生物法易受組織中其它抗生素的影響，特異性低，靈敏度也不高，但操作簡(jiǎn)便，樣品用量少，預(yù)處理簡(jiǎn)單，在基層大規(guī)模篩選工作中有很大的應(yīng)用價(jià)值。

3.2理化分析方法理化分析方法中，高效液相色譜法檢測(cè)氯霉素是一種靈敏度較高、可靠性較強(qiáng)的一種方法，此法重復(fù)性好、假陽性少，可以進(jìn)行定量鑒定，但檢出限較高，為5～10μg／kg，回收率偏低。氣相色譜法的特點(diǎn)是高分離效能、高選擇性、高靈敏度、快速、應(yīng)用廣，還可用于制備高純物質(zhì)。其他的如氫焰離子化檢測(cè)器(FID)、電子捕獲檢測(cè)器(ECD)、氮磷檢測(cè)器(NPD)等，檢出限一般為μg／kg級(jí)，常用于抗生素藥物殘留的檢測(cè)。

3.3酶聯(lián)免疫檢測(cè)法免疫分析是以抗原與抗體的特異性、可逆性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的新型分析技術(shù)。免疫反應(yīng)具有很高的選擇性和靈敏性，因此，免疫分析技術(shù)無論作為獸藥殘留分析的檢測(cè)手段還是樣本凈化方法都能使分析過程特別是前處理步驟大大簡(jiǎn)化。目前使用最普遍的酶聯(lián)免疫法(ELISA)，具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、樣品容量大、儀器化程度和分析成本低的優(yōu)點(diǎn)，是目前最理想的殘留篩選性分析方法之一。ELISA是基于抗原和抗體反應(yīng)而建立的。由于氯霉素是半抗原，不能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體。要使半抗原性物質(zhì)具有免疫原性，就需使其與大分子載體物質(zhì)(蛋白質(zhì))相結(jié)合制備人工抗原，而后將其作為抗原進(jìn)行使用，動(dòng)物體內(nèi)即可產(chǎn)生相應(yīng)特異性的抗氯霉素的抗體。在此基礎(chǔ)上建立酶聯(lián)免疫競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定氯霉素含量。以北京望爾生物技術(shù)有限公司制造的酶聯(lián)免疫分析定量檢測(cè)氯霉素殘留試劑盒為例，試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物氯霉素和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗氯霉素抗體，加入酶標(biāo)二抗后，用TMB底物顯色，在450nm處測(cè)量，樣本吸光值與樣品所含殘留物氯霉素的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較可得出相應(yīng)殘留物氯霉素的含量。這種發(fā)放靈敏度高，對(duì)動(dòng)物組織(雞肉／雞肝，豬肉／豬肝，蝦，魚)，蜂蜜、牛奶中檢測(cè)下限可達(dá)0.05μg／kg，重現(xiàn)性好，回收率高，在1μg／kg的添加水平下，回收率可達(dá)85％～105％，完全能夠滿足目前檢測(cè)工作的需要。國際上公認(rèn)的定量確認(rèn)方法仍是理化分析法，主要是氣相色譜法和液相色譜法，這兩種方法靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好。假陽性少，缺點(diǎn)是樣品前處理過程復(fù)雜、儀器化程度高且價(jià)格昂貴，分析速度慢，已逐漸不能滿足發(fā)達(dá)國家及食品加工企業(yè)對(duì)檢測(cè)方法檢出限的要求。酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)出現(xiàn)后，以其靈敏度高、可大批量同時(shí)篩查，儀器化程度低和檢測(cè)快速、低成本等優(yōu)點(diǎn)，成為氯霉素殘留檢測(cè)的主流和發(fā)展趨勢(shì)。例如國家水產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心目前在氯霉素殘留檢測(cè)工作中，就采用酶聯(lián)免疫法對(duì)樣品進(jìn)行初期篩選，用氣相色譜儀及GC－MS聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行確認(rèn)及定量分析。

隨著人們生活水平的提高，動(dòng)物性食品(肉、蛋、奶)的需求不斷增大。而藥物在動(dòng)物疾病防治中起著極大的作用，給養(yǎng)殖業(yè)帶來經(jīng)濟(jì)效益的同時(shí)也引起人們的憂患。目前，消費(fèi)者對(duì)食品的安全性越來越關(guān)注，一個(gè)重要的關(guān)注點(diǎn)就是藥物在畜產(chǎn)品中的殘留。因此，藥物在動(dòng)物體內(nèi)和動(dòng)物性產(chǎn)品中的殘留問題已引起世界各國廣泛重視，并投入大量資金對(duì)某些藥物特別是化學(xué)治療藥進(jìn)行研究。近年來，我國動(dòng)物源性食品的出口受到了國外藥殘檢驗(yàn)的拒收、扣留、退貨、索賠、和終止合同等，這種事件時(shí)有發(fā)生，給我國的對(duì)外貿(mào)易造成很大的損失。因此，我們必須采取相應(yīng)的措施來克服這種殘留，我們必須研究藥物在動(dòng)物體內(nèi)的代謝和變化規(guī)律，直到臨床合理用藥。研究組織中藥物的殘留檢測(cè)方法，以便快速準(zhǔn)確的對(duì)藥物進(jìn)行監(jiān)測(cè)，防止藥物殘留的發(fā)生。還需要養(yǎng)殖業(yè)者改變傳統(tǒng)的養(yǎng)殖觀念，加強(qiáng)學(xué)習(xí)和培養(yǎng)新技術(shù)，走防病養(yǎng)殖的健康養(yǎng)殖之路。