ＨＰＬＣ法測定正糖膠囊中大黃素的含量

尹寧寧　林　林　林永強

【摘要】 目的 采用高效液相色譜法測定正糖膠囊中大黃素的含量，以控制該制劑的質(zhì)量。方法 采用大連依利特(C₁₈,250 mm×4．6 mm，5 μm)柱分離虎杖、何首烏中大黃素，以甲醇-0．1%磷酸溶液(85C∶C15)為流動相；流速為：1 ml/min，檢測波長為254 nm。結(jié)果 線性范圍為0．054~0．27 μg。2,3,5,4/-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的平均回收率為99．45%，RSD=1．20%。結(jié)論 試驗方法簡便易行，測定結(jié)果準確、可靠，重現(xiàn)性好。

【關(guān)鍵詞】正糖膠囊；大黃素； HPLC

お

Determination of Emodin in Zhengtang Capsules by HPLC

YIN Ning-ning,LIN Lin,LIN Yong-qiang.

【Abstract】 Objective To determine the content of emodin in Duqiang Tongluo Vinum by HPLC.Methods Amethod was established by HPLC on C₁₈column，with methanol-0．1 Phosphoric Acid(85C∶C15)as a mobile phase.The flow rate was 1 ml/min,and the detection wavelength was 254 nm.ResultsThe line range of emodin was 0．054-0．27 μg.The average recoveryrate was 99．45%，and the RSD was 1．20%.Conclusion The method was simple and rapid，the results are accurate and reproducible.

【Key words】Zhengtang Capsules;Emodin；HPLC

正糖膠囊是由地骨皮、地黃、熟地黃、天花粉、虎杖、麥冬、玉竹、女貞子、何首烏、黃芪等十七味藥組成，具有滋陰降糖的作用。處方中地骨皮、地黃、熟地黃、天花粉等目前沒有可測定成分；女貞子含齊墩果酸、山茱萸中含有熊果酸，皆不溶于水，故樣品中含量很少；黃芪中含有黃芪甲苷，但由于雜質(zhì)干擾嚴重未能檢出。處方中何首烏、虎杖都含有蒽醌類化合物，故以處方中主要藥味何首烏、虎杖為指標，對其所含的有效成分大黃素的含量進行測定。供試品色譜峰分離效果好，陰性對照無干擾，可用于有效控制制劑的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

儀器：Waters 515-717-2487高效液相色譜儀。

試藥：大黃素對照品(批號756-200211，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所)；甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件 色譜柱：大連依利特(C₁₈,250 mm×4．6 mm，5μm)；流動相：甲醇-0．1%磷酸溶液(85∶15)；流速：1 ml/min；檢測波長：254 nm。柱溫：35℃。理論板數(shù)按大黃素峰計算，應(yīng)不低于3000。

2．2 對照品溶液的制備 精密稱取大黃素對照品6．75 mg，置50 ml量瓶中，加無水乙醇-醋酸乙酯(2C∶C1)混合溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取5 ml，置25 ml量瓶中，加無水乙醇-醋酸乙酯(2C∶C1)混合溶液稀釋至刻度，搖勻(每1 ml含大黃素27 μg的溶液)，即得。

2．3 供試品溶液的制備^[1]取本品內(nèi)容物約8 g，精密稱定，精密加甲醇100 ml，稱定重量，置水浴上加熱回流2 h，冷卻，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液50 ml，蒸干，殘渣加鹽酸溶液(1 ml→10 ml)25 ml，超聲處理5 min使溶解，再加三氯甲烷25 ml，置水浴上加熱回流30 min，立即冷卻，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸水層加三氯甲烷振搖提取2次，每次25 ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加無水乙醇-醋酸乙酯(2C∶C1)混合溶液使溶解，轉(zhuǎn)移至50 ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2．4 專屬性試驗 按樣品制備方法，制備不含何首烏、虎杖的陰性樣品，照“2．3”項下操作，制得陰性樣品溶液。進樣10 μl，按以上色譜條件測定，結(jié)果陰性對照無干擾。

2．5 線性關(guān)系的考察 精密吸取2．2項下對照品溶液2、4、6、8、10 μl，分別注入高效液相色譜儀，測其峰面積積分值，計算回歸方程?；貧w方程：Y=106 288X-15 432，r=0．999 9。分別注入高效液相色譜儀，測得峰面積Y。以進樣量(μg)為橫坐標，以峰面積為縱坐標，計算回歸方程?；貧w方程為：Y=106 288X-15 432，r=0．999 9。結(jié)果表明大黃素進樣量在0．054~0．27 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2．6 精密度試驗 取精密度試驗 取濃度為27 μg/ml的對照品溶液10 μl，按以上色譜條件連續(xù)進樣5次，測定峰面積，結(jié)果RSD為0．24%。試驗結(jié)果顯示儀器精密度良好。

2．7 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液在10 h內(nèi)，按以上色譜條件進樣5次，(0、2、4、8、12 h)，測定峰面積，結(jié)果RSD為0．51%。試驗結(jié)果顯示供試品溶液12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2．8 重復(fù)性試驗 按樣品含量測定項下的方法對20040201的樣品進行測定，共測定5份，測定含量RSD為0．52%，試驗結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2．9 回收率試驗 精密量取樣品(批號為040201，含量0．098 mg/粒，平均裝量0．415 7 g/粒)內(nèi)容物，取約4 g，共測定5份，精密稱定，精密加入甲醇(含大黃素對照品0．208 mg/ml)5 ml，按“2．3”項下方法制備供試品溶液，測定含量，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。試驗結(jié)果表明該方法回收率良好。

2．10 樣品測定 取批號040201、040202、040303的樣品，照“2．3”項下方法，按以上色譜條件對三批樣品進行測定，結(jié)果為：0．10 mg/粒、0．10 mg/粒、0．10 mg/粒。

3 討論

3．1 加熱水解時間的確定 為了選定合理的加熱水解時間，在按照2．3項下方法制備供試品溶液，對加熱水解15、30、60 min進行考察，三種水解時間測定結(jié)果無明顯差異。綜合考慮，選定加熱水解時間為30 min。說明此水解方法對水解時間的要求較寬松，該方法可操作性強。

3．2 水解所用酸種類的選擇 蒽醌類化合物的水解常用2．5 mol／L硫酸溶液^[2-5]、鹽酸溶液(1 ml→10 ml)。經(jīng)對上述兩種溶液比較試驗，選用鹽酸溶液(1→10)效果優(yōu)于2．5 mol／L硫酸溶液。原因如下：水解后的溶液，加三氯甲烷振搖提取。由于酸溶液在三氯甲烷中具有一定的溶解性，硫酸沸點較高，難揮發(fā)，在蒸干過程中，硫酸的濃度增大，溶液中的部分大黃素就會與硫酸發(fā)生反應(yīng)，部分大黃素被炭化，實際測得的大黃素含量會降低，造成誤差。如果增加用無水硫酸鈉干燥步驟，則試驗步驟繁瑣，增加系統(tǒng)誤差。選用鹽酸溶液(1→10)，由于鹽酸易揮發(fā)，且鹽酸性質(zhì)較穩(wěn)定，不易與大黃素發(fā)生作用。故水解時選用鹽酸溶液(1→10)。

參考文獻

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