缺血性腦血管病介入治療對炎性細(xì)胞因子影響的研究

陰東亮　丁巖平

【摘要】 目的 觀察缺血性腦血管病患者相關(guān)血管開通前后致炎細(xì)胞因子腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)和抗炎細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-10(IL-10)的動態(tài)變化。方法 采用酶聯(lián)免疫吸附法測定30例健康人(健康對照組)和30例缺血性腦血管病患者急診介入治療術(shù)前即刻、術(shù)后12、24h，血漿TNF-α、IL-6、IL-10的變化，比較致炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-6和抗炎細(xì)胞因子IL-10的動態(tài)變化。結(jié)果 再灌注前急診介入組患者TNF-α、IL-6顯著高于健康對照組(P<0．05)，血漿IL-10略高于健康對照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0．05)；再灌注后12、24 h急診介入組患者血漿TNF-α、IL-6、IL-10均較術(shù)前顯著增高(P<0．01，P<0．05)。急診介入組患者再灌注治療后12 h抗炎細(xì)胞因子IL-10的升高幅度顯著低于致炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-6的升幅(P<0．01)。結(jié)論 缺血性腦血管病再灌注后致炎細(xì)胞因子較抗炎細(xì)胞因子增高更顯著。

【關(guān)鍵詞】缺血性腦血管?。辉俟嘧p傷；腫瘤壞死因子-α；白細(xì)胞介素-6；白細(xì)胞介素-10

The influence of emergency percutaneous intervention on plasma cytokines in patients with ischemic cerebrovascular disease

YIN Dong-liang，DING Yan-ping.Department of Neurology，The Third Municipal Hospital of Jinan City，Shandong 250031，China

【Abstract】 Objective To observe the dynamic changes of tumor necrosis factor-alpha interleukin-6 and interleukin-10 in patients with ischemic cerebrovascular disease(ICVD)before and after recanalization of infarct-related artery.Methods In 30 IVCD patients and 30 normal people as a control group，plasma TNF-α，IL-6 and IL-10 were measured by ELISA before emergency percutaneous intervention，12 h and 24 h post-intervention.Amplitudes of changes in plasma TNF-α，IL-6 and IL-10were compared.Results Plasma IL-10 in ICVD was not significantly higher than that in control group(P>0．05)before emergency percutaneous intervention，but TNF-αand IL-6 significantly higher(P<0．05).Plasma TNF-α,IL-6 and IL-10 at 12 h and 24 h post-intervention were significantly higher than those before percutaneous intervention(P<0．O1，P<0．O1，P<0．05)，but the amplitude of IL-10 increase was significantly less than that of TNF-α，IL-6(P<0．01).Conclusion TNF-α,IL-6 and IL-10 may be involved in ischemia-reperfusion injury.The imbalance between inflammation-promoting and anti-inflammatory cytokines may be one of the mechanisms resulting in ischemia-reperfusion injury.

【Key words】Ischemic cerebrovascular disease； Ischemia-reperfusion injury；Tumor necrosis factor-alpha；Interleukin-6；Intedeukin-10

目前，隨著介入材料的不斷完善及神經(jīng)介入技術(shù)的成熟，經(jīng)皮腔內(nèi)血管成形和支架植入術(shù)(PTAS)介入治療是當(dāng)前治療缺血性腦血管病(ICVD)最有效的方法之一，它顯著改善ICVD患者的近期和遠(yuǎn)期預(yù)后，但缺血再灌注損傷的存在部分限制其有益作用。既往的研究已表明，缺血再灌注時，激活的炎癥反應(yīng)是介導(dǎo)再灌注損傷的重要機(jī)制之一^[1]。本研究旨在探討ICVD患者急診介入治療對致炎細(xì)胞因子腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)和抗炎細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-10(IL-10)的動態(tài)變化及其可能的臨床意義。

1 資料與方法

1．1 一般資料 所選病例為本院2005年12月至2007年12月住院的缺血性腦血管病(ICVD)患者30例，其中腦血栓形成(CI)急性期18例，男10例，女8例，年齡45~75歲，平均(63．5±9．9)歲；短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)12例，男7例，女5例，年齡46~75歲，平均(62．1±9．3)歲，30例ICVD患者診斷均符合全國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會議診斷標(biāo)準(zhǔn)。所有患者均在發(fā)病24 h內(nèi)急診查頭顱CT或MRI檢查證實(shí)，同時排除心房顫動、凝血功能異常的患者。對正常對照組3O例，來自健康體檢者，其中男17例，女13例，年齡45~72歲，平均(61．8±10．9)歲,均排除心、肝、腎等器質(zhì)性疾病。兩組性別組成及年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。

1．2 介入方法 在局麻或全麻下，經(jīng)股動脈采用Seldinger技術(shù)穿刺，放置6 F、8 F導(dǎo)管鞘，予全身肝素化，首次肝素用量(mg)為患者體質(zhì)量(kg)的2／3，1 h后靜脈注射首次劑量的1/2，以后每小時給予第2次劑量的1/2維持。行病變側(cè)的腦動脈造影，再次了解病變性質(zhì)、部位、范圍及側(cè)支循環(huán)代償情況，將導(dǎo)引導(dǎo)管置于病變動脈以下3~5 cm 處，選擇合適型號支架，視病情采用先球囊擴(kuò)張后植入支架或先植入支架后行球囊擴(kuò)張的方式行PTAS。整個手術(shù)過程均在心電監(jiān)護(hù)下進(jìn)行。

1．3 細(xì)胞因子測定 健康對照組清晨空腹取血。ICVD患者分別于接受介入術(shù)前即刻、再灌注后12 h及24 h各取血5 ml。血標(biāo)本加入含10%EDTA(1 g／L)、抑肽酶500 kU／ml的抗凝試管，4℃離心3000轉(zhuǎn)/min，10 min，分離出血漿，-80℃保存待測。采用酶聯(lián)免疫吸附法測定TNF-α、IL-６和IL-10，試劑盒由美國Biosource公司提供，自動酶標(biāo)檢測儀為美國SIGMA公司產(chǎn)品，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)數(shù)資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，多組間比較應(yīng)用單因素方差分析，組間兩兩比較應(yīng)用q檢驗(yàn)，同一對象處理前后數(shù)據(jù)比較應(yīng)用配對t檢驗(yàn)。全部數(shù)據(jù)輸入計(jì)算機(jī)應(yīng)用SPSS 12．0軟件包進(jìn)行分析。P<0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 致炎因子TNF-α、IL-６水平介入前后的動態(tài)變化 健康對照組血漿TNF-α、IL-6水平分別為(8．7±1．3),(15．2±4．1)ng/L。急診介入組患者術(shù)前即刻TNF-α、IL-6血漿水平顯著高于健康對照組(P<0．01)，血管再通后TNF-α、IL-6血漿水平進(jìn)一步升高，12 h TNF-α、IL-6血漿水平達(dá)峰值(P<0．01)，再灌注24 h TNF-α、 IL-6水平仍顯著高于再灌注前水平(P<0．01)見表1。

2．2 抗炎因子IL-10水平介入前后的動態(tài)變化 健康對照組血漿IL-10水平為(12．5±4．5)ng/L。急診介入組患者治療前血漿IL-10水平與健康對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0．05)。再灌注后12 h IL-10水平較再灌注前明顯增高(P<0．05)，至再灌注后24 h仍顯著高于再灌注前水平(P<0．05)表1。

3 討論

隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，人口逐漸老齡化，缺血性腦血管病的發(fā)病率逐年升高，目前已成為威脅人類生命的最主要疾病之一，已成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)課題。腦是人體對缺氧最為敏感的器官，腦組織缺血將會導(dǎo)致局部腦組織及其功能的損害，其損害程度與缺血時間長短及殘存血流量多少有關(guān)，短期不完全性缺血只引起可逆性損害，而長時間的完全缺血或嚴(yán)重缺血會引起梗死。臨床上處理腦缺血性損傷的原則是盡早恢復(fù)血液再灌注(reperfusion)，使缺血腦組織重新得到氧的供應(yīng)，提供代謝所必需的營養(yǎng)物質(zhì)并清除代謝廢物。及時地恢復(fù)血液再灌注將有利于減輕腦缺血損傷，至少使某些可逆性損傷獲得功能上的恢復(fù)。然而近年來發(fā)現(xiàn)，缺血后的血流恢復(fù)在某些情況下能導(dǎo)致進(jìn)一步的組織損傷和功能障礙，這種恢復(fù)血流灌注后的有害情況稱為缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury)，炎癥反應(yīng)失控導(dǎo)致的微血管功能紊亂是繼發(fā)性再灌注損傷的重要原因之一。

筆者的研究發(fā)現(xiàn)，ICVD患者急診介入治療前血漿中致炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-6水平已較正常對照組明顯升高，再灌注后12、24 h血漿TNF-α、IL-6水平均較術(shù)前進(jìn)一步增高并且持續(xù)升高24 h。以往的研究表明，缺血再灌注時中性粒細(xì)胞被激活，具有強(qiáng)烈致炎作用的細(xì)胞因子TNF-α、IL-6釋放^[2-4]。這些細(xì)胞因子對毛細(xì)血管有直接毒性作用，導(dǎo)致微小動脈痙攣，增加毛細(xì)血管通透性，損傷血腦屏障，進(jìn)而發(fā)生組織水腫、壞死。另外還可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞與白細(xì)胞膜分子蛋白的改變，促使白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞大量黏附、聚集，形成微血栓，阻塞微血管，造成無復(fù)流現(xiàn)象，因而減少再灌注的凈效應(yīng)。

近年來，IL-10作為一種抗炎因子在腦缺血后的炎癥反應(yīng)中的重要作用已越來越受到人們的關(guān)注。已有研究證實(shí)，IL-10可以在體內(nèi)、體外抑制多種炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生。IL-10能夠抑制單核／巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞的激活及多種炎性因子如TNF-α、IL-6等的合成和釋放，減輕炎癥反應(yīng)。已發(fā)現(xiàn)ICVD患者IL-10水平升高，內(nèi)源性的IL-10可以減輕缺血再灌注心肌中性粒細(xì)胞的浸潤，下調(diào)細(xì)胞趨化因子的表達(dá)，抑制TNF-α等致炎因子的合成 。切除IL-10基因大鼠會發(fā)生更嚴(yán)重的缺血再灌注損傷，說明內(nèi)源性IL-10對腦缺血具有重要的保護(hù)作用^[5]。本組結(jié)果顯示，ICVD患者再灌注治療后，血漿IL-10水平較再灌注前顯著升高，并且也持續(xù)升高24 h，但其升高幅度顯著低于致炎細(xì)胞因子TNF-α和IL-6。提示在腦缺血再灌注時，致炎細(xì)胞因子明顯升高的同時，抗炎細(xì)胞因子也代償性增高，但其升高程度可能遠(yuǎn)不足以對抗致炎細(xì)胞因子介導(dǎo)的腦損傷。

由此可見，腦缺血后炎癥反應(yīng)在腦缺血再灌注損傷中扮演了相當(dāng)重要的角色，對其機(jī)制的深入研究，為防治腦缺血/再灌注損傷提供了新的思路。

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