Survivin基因在胃癌中的表達(dá)及臨床意義

劉燕文， 姚壯凱， 魯 凱， 趙 成， 劉永萍

幾個(gè)世紀(jì)以來(lái)惡性腫瘤的發(fā)病率和死亡率均呈明顯升高趨勢(shì)，已成為嚴(yán)重威脅人類(lèi)生命健康的最主要疾病之一。而胃癌又是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。為了研究survivin基因在胃癌組織中的表達(dá)及其與胃癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，本課題組采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)了50例胃癌組織、正常胃黏膜中survivin的表達(dá)情況。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇我院2000年2月至2006年2月間手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)、資料完整的胃癌患者50例，所有患者術(shù)前未經(jīng)放療和化療。其中男29例，女21例。年齡38～79歲，平均61歲。按國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)1997年新版的胃癌TNM分期法進(jìn)行分類(lèi)，其中Ⅰ期5例，Ⅱ期9例，Ⅲ期32例，Ⅳ期4例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移8例。高分化腺癌5例，中分化腺癌20例，低分化腺癌25例。腫瘤侵及黏膜和黏膜下層5例，肌層11例，漿膜層30例，漿膜外4例。癌旁組織離腫瘤邊緣大于3 cm。

1.2 方法 石蠟切片常規(guī)脫蠟梯度水化后，加入內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑，室溫孵育以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，PBS液(pH 7.2)振洗后置檸檬酸中(pH 6.0)，微波抗原修復(fù),滴加正常動(dòng)物非免疫血清封閉非特異性抗原,傾去血清,依次滴加一抗4℃過(guò)夜,生物素標(biāo)記的二抗37℃ 15 min，滴加鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶37℃ 15 min，PBS液振洗后顯色,流水沖洗終止反應(yīng),以蘇木素復(fù)染，脫水透明封固，0.3%甲醇過(guò)氧化氫液去除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。

免疫組化染色：采用鏈酶菌素-生物素(SP)免疫組化技術(shù)，一抗survivin羊抗人多克隆抗體(sc-8806)和SP免疫組化試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。survivin試劑為即用型，實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，將已知的胃癌陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，用PBS液代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 陽(yáng)性為細(xì)胞漿呈棕黃色顆粒，survivin 蛋白表達(dá)陽(yáng)性部位胞漿。結(jié)果以陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比表示。光鏡下(40倍)隨機(jī)抽取10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，取其均值，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)小于25%為陰性，25%～50%為+，51%～75%為++，大于75%為+++。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。組間分析采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

正常胃組織中未見(jiàn)survivin基因表達(dá)，腫瘤組織中survivin基因表達(dá)陽(yáng)性主要定位于腫瘤細(xì)胞胞漿內(nèi)，為粗細(xì)不一的棕黃色顆粒，50例胃癌組織中有40例survivin基因表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率80%。

survivin陽(yáng)性表達(dá)與年齡、性別及浸潤(rùn)程度無(wú)相關(guān)性(P>0.05)，Ⅰ+Ⅱ期14例，陽(yáng)性表達(dá)9例，占64.28%，Ⅲ+Ⅳ期36例，陽(yáng)性表達(dá)31例，占86.11%。兩組陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例，陽(yáng)性表達(dá)36例，占85.71%；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移8例，陽(yáng)性表達(dá)4例，占50%。兩組陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。高分化腺癌5例，陽(yáng)性表達(dá)3例，占60%，中分化腺癌20例，陽(yáng)性表達(dá)15例，占75%，低分化腺癌25例，陽(yáng)性表達(dá)22例，占88%。結(jié)果顯示腺癌分化程度越低，survivin陽(yáng)性表達(dá)率越高。

3 討論

survivin基因是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的凋亡蛋白抑制因子(inhibitor of apoptosis protein, IAP)家族中的新成員，因?yàn)槠湟种频蛲鲇欣谀[瘤細(xì)胞存活而得名為“存活素”。研究表明，survivin有單個(gè)的BIR(桿狀病毒IAP重復(fù)區(qū))序列，該結(jié)構(gòu)為IAP抑制細(xì)胞凋亡所必需，羧基末端是由42個(gè)氨基酸形成的密集卷曲結(jié)構(gòu)，此卷曲是survivin與紡錘體微管結(jié)合的位點(diǎn)。survivin與其他凋亡調(diào)控因子不同，除了參與凋亡的控制外，還特異地在細(xì)胞周期 G2～M期表達(dá)，通過(guò)與細(xì)胞有絲分裂紡錘體的微管結(jié)合，參與對(duì)細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，重組survivin與微管結(jié)合受微管聚合與解聚合的動(dòng)力學(xué)調(diào)控，具有特異性、飽和性、濃度依賴(lài)性和構(gòu)象依賴(lài)性等特點(diǎn)。survivin若去掉羧基末端帶電荷的卷曲結(jié)構(gòu)，不僅使其失去在體外與聚合微管結(jié)合和在體內(nèi)與轉(zhuǎn)化細(xì)胞有絲分裂紡錘體結(jié)合的能力，而且也失去了抑制紫杉醇在N1H3T3纖維母細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡的能力。因此可以認(rèn)為，survivin末端帶電荷的卷曲結(jié)構(gòu)是其抗凋亡功能所必需的[1]。survivin不僅通過(guò)與下游凋亡效用因子Caspase-3和Caspase-7結(jié)合對(duì)其活性產(chǎn)生直接抑制效應(yīng)，還通過(guò)與紡錘體纖維的結(jié)合間接抑制Caspase對(duì)紡錘體的水解作用，有利于保護(hù)有絲分裂細(xì)胞器的完整性，抑制細(xì)胞凋亡[2]。 survivin 是凋亡抑制蛋白家族中結(jié)構(gòu)獨(dú)特的新成員，于1997年由耶魯大學(xué)Ambrosini等[3]用效應(yīng)細(xì)胞蛋白酶受體1 cDNA在人類(lèi)基因組庫(kù)的雜交篩選中首先分離出來(lái)。與其他IAP相比，survivin只在胚胎和腫瘤組織中有表達(dá)，在正常成人分化組織中(胸腺、生殖器除外)檢測(cè)不到[4]。

目前，許多學(xué)者對(duì)survivin與腫瘤的關(guān)系進(jìn)行了大量的研究，提示survivin在癌組織中的表達(dá)與惡性腫瘤的侵襲性及預(yù)后有關(guān)。癌細(xì)胞自原發(fā)部位脫落后，移動(dòng)到其他部位經(jīng)定居、分裂增殖的過(guò)程，最終形成癌轉(zhuǎn)移。正常細(xì)胞脫離原來(lái)組織時(shí)即啟動(dòng)凋亡過(guò)程，因而不會(huì)形成遠(yuǎn)隔部位的增殖。癌細(xì)胞由于survivin對(duì)凋亡的抑制，細(xì)胞得以繼續(xù)分裂，造成腫瘤鄰近和遠(yuǎn)隔部位轉(zhuǎn)移灶的形成。所以survivin 的表達(dá)不僅與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，而且與腫瘤的惡性程度、預(yù)后不良呈正向關(guān)系。姜武忠等[5]通過(guò)對(duì)收治的經(jīng)病理明確診斷、完成全程根治性放療、隨訪(fǎng)5年以上的115例鼻咽癌放射治療前活檢腫瘤標(biāo)本，應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)survivin在鼻咽癌組織中的表達(dá)情況，并分析survivin的表達(dá)與NPC分期、放療敏感性、生存率、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)之間的關(guān)系，結(jié)果表明survivin的表達(dá)活性與鼻咽癌的頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、放療敏感性、3年和5年生存率及復(fù)發(fā)傾向均有密切關(guān)系。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，正常胃組織中survivin不表達(dá)，但胃癌組織中survivin基因表達(dá)陽(yáng)性率為80%，其中分化程度越差，臨床分期越晚則survivin基因表達(dá)率愈高，這與Okada等[6]報(bào)道的基本一致，胃癌組織中survivin基因的高表達(dá)可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞擺脫生長(zhǎng)控制，通過(guò)減慢癌細(xì)胞損失速度而取得生長(zhǎng)加速的優(yōu)勢(shì)，由survivin等凋亡抑制基因過(guò)度表達(dá)引起的凋亡調(diào)控機(jī)制失常而發(fā)生凋亡受阻，對(duì)于癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移無(wú)疑是十分重要的。Sarela等[7]的研究中就發(fā)現(xiàn)在Ⅱ期結(jié)直腸癌患者survivin表達(dá)陰性，其5年生存率為94.4%，而表達(dá)陽(yáng)性者的5年生存率僅為44.8%，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

總之，survivin在胃癌組織中特異性高表達(dá)，且在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中其表達(dá)顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織，說(shuō)明survivin基因表達(dá)可以抑制胃癌細(xì)胞的自身凋亡過(guò)程，在癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖過(guò)程中起促進(jìn)作用。檢測(cè)胃癌組織中survivin基因的表達(dá)情況對(duì)于早期診斷和預(yù)后分析有指導(dǎo)意義，開(kāi)展有選擇性地針對(duì)survivin基因的治療理應(yīng)成為腫瘤治療的一種可行方法。

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