高效液相色譜法測定新止咳合劑中甘草酸的含量

　　摘要：目的：建立高效液相色譜法測定新止咳合劑中甘草酸的含量。方法：采用Dikma鉆石C18色譜柱(4.6mm×250mm，5gm)；流動相為甲醇—0.2mol/L醋酸銨溶液—冰醋酸(63：37：1)；檢測波長為250nm，流速為1.0mL/rain，柱溫為30℃。結(jié)果：甘草酸進樣量在0.221～6.630tμg(r＝0.99998)范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為99.15％，RSD＝0.71％(n＝9)。結(jié)論：本法簡便、快速、專屬性強、重現(xiàn)性好；可作為新止咳合劑的質(zhì)量控制方法。
　　關(guān)鍵詞：甘草酸；高效液相色譜法；新止咳合劑；含量測定
　　中圖分類號：R927.2
　　文獻標(biāo)識碼：A
　　文章編號：1007—2349(2008)05—0045—02
　　新止咳合劑由桔梗、陳皮、兒茶、甘草、法半夏等藥制成，具有止咳、祛痰的功效。為本院的醫(yī)療機構(gòu)制劑。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有規(guī)定含量測定方法。本文參考《中國藥典32005年版，采用HPLC法測定甘草的主要成分——甘草酸的含量，作為質(zhì)量控制指標(biāo)，獲得滿意的結(jié)果。
　　
　　1、儀器與藥品
　　
　　高效液相色譜儀(美國Agilent 1100系列儀)，包括自動進樣裝置、VWD可變紫外檢測器、柱溫箱等；METTI.ERAE240型電子分析天平。除高效液相色譜檢測所用試劑為色譜純外，其他試劑均為分析純。甘草酸銨對照品(批號為110731—200408，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所)；新止咳合劑由本院制劑室配制(批號20070206、20070403、20070428)。
　　
　　2、方法與結(jié)果
　　
　　2.1　色譜條件　色譜柱：Dikma鉆石C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：甲醇—0.2mol/L醋酸銨溶液—冰醋酸(63：37：1)；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：250nm；進樣量：10μl。理論板數(shù)按甘草酸峰計算為3000。
　　
　　2.2溶液的制備　精密稱取甘草酸銨對照品(置五氧化二磷為干燥劑的干燥器中，減壓干燥36h)44.2mg，置20mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1mL中含甘草酸2.21mg的溶液(貯備液)，分別精密吸取溶液(貯備液)①0.1mL、②0.2mL、③0.5mL、④1mL、⑤2mL、⑥2.5、⑦3mL；分別置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別得每1mL含①0.0221mg，②0.048mg，③0.1105mg，④0.22tmg，⑤0.442mg，⑥0.5525mg，⑦0.663mg的對照品溶液。
　　取新止咳合劑15mL，用正丁醇提取5次(15、15、10、10、10mL)，合并正丁醇層，用水洗3次，每次20mL，分取正丁醇層，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。
　　
　　2.3方法學(xué)考察
　　2.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍　精密吸取甘草酸銨對照品溶液①、②、③、④、⑤、⑥、⑦各10μ1，分別注入高效液相色譜儀測定。以甘草酸銨對照品含量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，直線幾乎通過原點，所以采用外標(biāo)一點法進行含量測定。線性回歸方程為Y＝545.71X＋6.174，r＝0.99998，線性范圍為0.221～6.63μg。
　　2.3.2精密度試驗　取同一甘草酸銨對照品溶液④10μl，注入液相色譜儀，連續(xù)測定6次，結(jié)果峰面積積分值分別為：1209.7186，1200.4753，1200.41641。1203.3199，1207.5747.1205.7230；積分值平均為：1204.54，RSD＝0.32％。結(jié)果表明儀器精密度較好。
　　2.3.3穩(wěn)定性試驗　取同一供試品溶液(批號為20070428)各10μl，分別于0，2，5，10，15，20，24h注入液相色譜儀測定，結(jié)果供試品溶液峰面積積分值的RSD＝1.2％，表明在24h內(nèi)對照品和供試品的峰面積積分值穩(wěn)定，說明測定溶液配制好后，放置24h內(nèi)測定均可。
　　2.3.4重現(xiàn)性試驗 取同一批號的新止咳合劑(批號：20070428)，按供試品溶液的制備方法重復(fù)操作測定6次，結(jié)果平均含量為0.16mg/mL，RSD=1.55％。
　　2.3.5回收率試驗　采用加樣回收法，取已知含量的同一批號(20070428)新止咳合劑(含量為：0.16mg/mL)適量，分別精密加入甘草酸銨對照品適量，按供試品溶液的制備及測定法操作。結(jié)果見表1。
　　
　　2.3.6干擾試驗　照上述條件測定新止咳合劑空白(不含甘草藥材制成的陰性合劑)制劑，結(jié)果在甘草酸色譜峰相對應(yīng)的保留時間處無吸收峰，說明處方中其它藥味對甘草中的甘草酸測定無干擾。見圖1。
　　
　　
　　2.4樣品含量測定　按供試品溶液的制備及測定法操作，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀測定，外標(biāo)一點法計算。結(jié)果見表2。
　　
　　
　　3、討論
　　
　　甘草酸是甘草中主要的活性成分之一，也是新止咳合劑治療疾病的重要成分，故選擇該物質(zhì)作為考察指標(biāo)。因沒有甘草酸的對照品，所以采用甘草酸銨對照品測定甘草酸的含量，按0.2mg的甘草酸單銨鹽對照品折合甘草酸為0.1959mg的系數(shù)計算。本法簡便、快速、專屬性強、重現(xiàn)性好，可作為新止咳合劑的質(zhì)量控制方