中藥絞股藍(lán)提取液對抗小鼠皮膚衰老的實驗研究

[摘要]目的:研究中藥絞股藍(lán)提取液對老齡小鼠皮膚組織的影響，判斷絞股藍(lán)提取液在減輕小鼠皮膚自然老化方面的作用。方法：為健康昆明種老齡小鼠灌胃給藥絞股藍(lán)提取液，30天后觀察小鼠皮膚組織超微結(jié)構(gòu)改變，并以生化分析方法測定H2O2含量及SOD活性。結(jié)果:給藥絞股藍(lán)后，小鼠皮膚組織中SOD活性明顯增強(qiáng)，H2O2含量降低，同時病理切片示其皮膚衰老狀態(tài)有所改善。結(jié)論:絞股藍(lán)提取液有改善老齡小鼠皮膚衰老的作用。

[關(guān)鍵詞]絞股藍(lán)；皮膚；延緩衰老；超氧化物歧化酶；過氧化氫

[中圖分類號]R758.42[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A[文章編號]1008-6455（2008）06-0905-03

The Chinese native medicine G.Pentaphyllum extraction resistancemouse skin senile experimental study

YIN Ying，WU Jing-dong，GU Wei

(Department of Cosmetic，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang110032，Liaoning，china）

Abstract： ObjectiveChinese Gynostemma gavage study on aging mice extract skin tissue hydrogen peroxide (H2O2) content， superoxide dismutase (SOD) activity， and the ultrastructure of mouse skin，Judge Gynostemma extract of mouse skin in reducing the role of natural aging. Methods Kunming with healthy aging mice as subjects， administration Gynostemma extract， 30 days after the skin of mice ultrastructural changes， and biochemical analysis of H2O2 content and the activity of SOD. ResultsAdministration Gynostemma， mouse skin tissue SOD activity was significantly enhanced， H2O2 content decreased significantly， while pathological aging skin biopsy revealed that its state has improved. Conclusions Gynostemma extract to improve aging skin aging mice role.

Key words：G.Pentaphyllum；skin；delay growing old；superoxide dismutase；perhydrol

皮膚衰老是因增齡所出現(xiàn)的皮膚老化外貌，臨床上常表現(xiàn)為皮膚干燥、粗糙、脫屑增多，敏感性和脆性增加；皮膚松弛、皺紋增多，皮膚萎縮、血管突顯等[1]。隨著生活品質(zhì)的提高，人們越來越注重外表美，預(yù)防和延緩皮膚衰老已成為生命科學(xué)研究的熱點(diǎn)之一[2]。現(xiàn)代藥理研究證明中藥絞股藍(lán)具有抗衰老、提高機(jī)體清除自由基能力、降低機(jī)體自由基含量等作用，而絞股藍(lán)作為一種抗衰老的中藥至今沒有其抗皮膚自然衰老方面的報道，因此，我們采用中藥絞股藍(lán)提取液對抗小鼠皮膚衰老做了實驗研究，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1材料和方法

1.1實驗動物：健康3月齡小鼠10只，體重29～31g，作為青年對照組；12月齡小鼠30只，體重48～53g，隨機(jī)平均分為三組：老年空白對照組、老年陽性藥對照組、老年給藥組。所有實驗用鼠均為雌性昆明種小鼠，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。

1.2實驗藥物：8%硫化鈉溶液，醫(yī)用生理鹽水，維生素E，絞股藍(lán)提取液（自行配制）。

1.3實驗方法：青年對照組灌胃生理鹽水，老年空白對照組灌胃生理鹽水，老年陽性藥對照組灌胃維生素E，老年給藥組灌胃絞股藍(lán)提取液。以上操作每天2次，實驗共計30天。第31天將所有實驗用鼠用8%硫化鈉溶液進(jìn)行背部脫毛（面積為3cm×3cm）并取下背部脫毛處的全層皮膚（不含皮下脂肪）待行指標(biāo)測定。

1.4指標(biāo)測定：皮膚組織SOD活性的測定采用黃嘌呤氧化酶法，皮膚組織H2O2含量的測定采用化學(xué)比色法。病理標(biāo)本光鏡下觀察結(jié)構(gòu)變化，高級系統(tǒng)生物顯微鏡下攝片。所用儀器為系統(tǒng)生物顯微鏡OLYMPUS BX50F4北航病理圖像分析系統(tǒng)。 1.5統(tǒng)計學(xué)處理：所有數(shù)據(jù)均通過SPSS11.5 軟件進(jìn)行處理，各組實驗參數(shù)以x±s表示。組間差異按方差分析進(jìn)行顯著性檢驗，并用最小顯著差法（LSD法）作兩兩比較。

2結(jié)果

2.1皮膚組織中SOD活性及H2O2含量測定：老年陽性對照組、老年給藥絞股藍(lán)組的SOD活性均明顯高于老年空白對照組，且均有統(tǒng)計學(xué)意義（分別是P<0.01，P<0.01）；老年陽性對照組及老年內(nèi)服絞股藍(lán)組的H2O2含量明顯低于老年內(nèi)服空白組，且均有統(tǒng)計學(xué)意義（分別是P<0.01，P<0.01）；說明內(nèi)服維生素E及內(nèi)服絞股藍(lán)均可使小鼠皮膚組織中SOD活性升高而H2O2含量減少。結(jié)果見表1～2。

2.2皮膚組織形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果顯示：在光鏡（×100）下觀察小鼠皮膚的病理學(xué)改變，正常青年對照組（見圖1），小鼠表皮組織結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞分層清晰，皮膚厚度正常，具有明顯的表皮突及真皮乳頭；真皮層可見波浪狀纖維組織，排列有序、分布均勻，疏密有致，細(xì)胞成分及數(shù)量適中。老年空白對照組（見圖2），小鼠的表皮組織變薄，結(jié)構(gòu)不完整，分層不清，表皮與真皮交界呈直線狀，表皮突及真皮乳頭消失；纖維組織因發(fā)生變性、破壞可見真皮組織排列紊亂，分布不均，或稀疏，有較多的炎性細(xì)胞浸潤。老年陽性對照組（見圖3）、老年給藥組（見圖4）、小鼠皮膚組織形態(tài)比較相近，表皮組織結(jié)構(gòu)比較完整，細(xì)胞分層比較清晰，皮膚厚薄不甚均一，有表皮突及真皮乳頭；真皮層可見波浪狀纖維組織，排列有序，分布較為均勻，細(xì)胞及數(shù)量適中，有少量炎性細(xì)胞浸潤。說明維生素E、絞股藍(lán)提取液均能改善自然衰老小鼠皮膚組織的受損程度。

3討論

皮膚老化由內(nèi)源性和外源性多種因素引起，是一個相當(dāng)復(fù)雜的過程[3]。從現(xiàn)代研究來看，與皮膚衰老密切關(guān)聯(lián)的有衰老的自由基學(xué)說，測定皮膚衰老較常見的且可說明問題的指標(biāo)也多從這個方面選取[4]。自由基性質(zhì)活潑，極不穩(wěn)定，容易與其他物質(zhì)進(jìn)行氧化反應(yīng)，生物氧化過程的產(chǎn)物之一有H2O2。H2O2可以氧化某些具有重要生理作用含巰基的酶和蛋白質(zhì)，使之喪失活性，還可將細(xì)胞膜磷脂分子中高度不飽和脂肪酸氧化成過氧化物，產(chǎn)生過氧化脂質(zhì)，后者又通過自身催化作用連續(xù)生成大量過氧化物，結(jié)果使磷脂的功能障礙，對生物膜造成嚴(yán)重?fù)p傷。健康機(jī)體同時還存在著強(qiáng)大的防護(hù)機(jī)制對抗自由基的損傷：一方面是對已損傷大分子修復(fù)機(jī)制，如谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）可隨時使氧化變性的大分子還原恢復(fù)其功能；另一方面是清除機(jī)制，如體內(nèi)維生素E、過氧化氫酶（CAT）是過氧化物的清除劑，尤其是超氧化物歧化酶（SOD），是最有效的抗氧化劑和自由基清除劑。根據(jù)自由基學(xué)說，本項研究通過測定絞股藍(lán)對自然衰老小鼠皮膚中SOD活性及H2O2含量的影響，來推斷及探討絞股藍(lán)抗皮膚衰老的作用及其具體的生物學(xué)機(jī)理。

自然老化皮膚組織學(xué)上也出現(xiàn)了一些改變：①表皮厚度變薄，表皮突變淺，表皮與真皮連接變平坦、松弛；②真皮中膠原纖維、彈性纖維數(shù)量減少、排列不規(guī)則，且常斷裂成碎片；③皮膚附屬器：汗腺數(shù)目減少且分泌功能減退，汗腺內(nèi)脂褐質(zhì)沉積增多。皮脂腺數(shù)量有所增加但分泌量減少。甲板變薄變脆，無光澤。顏面和頭發(fā)的毛囊分布密度下降，毛發(fā)脫落和脫色，一般來說毛干的直徑變細(xì)（終毛轉(zhuǎn)化為毳毛），但是在某些部位如男性的耳朵、鼻子和眉毛以及女性的上唇和下頜的毳毛轉(zhuǎn)變?yōu)橛绊懨廊莸慕K毛；④皮膚血管變細(xì)，神經(jīng)末梢異常；⑤皮下脂肪層變薄。同時，配合光鏡下觀察實驗小鼠皮膚組織超微結(jié)構(gòu)更直觀的證實實驗結(jié)論[5]。

中藥絞股藍(lán)（Fiveleaf Gynostemma Herb）為葫蘆科植物絞股藍(lán)的全草，為葫蘆科絞股藍(lán)屬多年生草質(zhì)藤本植物。其藥性屬于平性偏溫，歸肺、脾、腎經(jīng)。功用主要包括：益氣健脾、補(bǔ)腎溫陽、延緩衰老、抗疲勞、養(yǎng)心安神、滋補(bǔ)強(qiáng)壯、解毒等[6]?，F(xiàn)代大量藥理實驗及臨床研究表明，絞股藍(lán)具有延緩衰老、抗疲勞、抗?jié)?、抗腫瘤、抗突變、抗誘變、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、保護(hù)并提高機(jī)體抗氧化及自由基清除能力、降低自由基含量、降血脂、改善血流動力學(xué)、抗血栓形成、并具有雄性和雌性激素樣作用。它富含人體所需的多種氨基酸、維生素和微量元素，有與人參相同和高于人參的高級營養(yǎng)成分，但目前尚沒有關(guān)于絞股藍(lán)延緩自然衰老的具體研究，本實驗就是檢測絞股藍(lán)在延緩皮膚自然老化方面的作用。

本實驗使皮膚衰老的自由基損傷學(xué)說進(jìn)一步得到驗證：皮膚呈現(xiàn)老化以及皮膚的生物學(xué)功能的減退，與增齡引起的自由基產(chǎn)生過多，抗氧化酶活性降低密切相關(guān)。從而證實了通過減少自由基的產(chǎn)生和清除皮膚老化代謝產(chǎn)物，提高抗氧化酶活性確實是目前預(yù)防和治療皮膚老化的方法之一。其次，從本次實驗的結(jié)果來看，絞股藍(lán)對提高老齡小鼠皮膚中SOD的活性、降低皮膚中H2O2含量具有明顯的影響，這說明絞股藍(lán)可能通過兩種途徑（一是通過提高SOD活性來起作用，一是其自身具有一定的抗氧化能力）達(dá)到清除自由基并減少自由基產(chǎn)生的目的，從而減少自由基對皮膚中各種大分子的影響。

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[收稿日期]2008-03-26 [修回日期]2008-06-06

編輯/李陽利