前列沖劑大鼠灌胃給藥長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)

　　作者／張春和　林詠梅　陸　瑛　陳天波　秦國(guó)政　李焱風(fēng)
　　
　　摘要：目的：觀(guān)察前列沖劑重復(fù)給藥對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物所產(chǎn)生的不良反應(yīng)。方法：用雄性SPF級(jí)SD大鼠80只連續(xù)灌胃給予前列沖劑6周，停藥恢復(fù)2周的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，動(dòng)物隨機(jī)分為溶媒對(duì)照組和前列沖劑3.0、6．0、9.0g／kg體重3個(gè)劑量組，相當(dāng)于臨床成人擬用藥量的20、40、60倍。于末次給藥后24h處死約1／2動(dòng)物進(jìn)行血液學(xué)指標(biāo)檢查，血清生化指標(biāo)檢查，病理組織學(xué)檢查。余下動(dòng)物停藥觀(guān)察2周，檢查指標(biāo)同給藥末期。結(jié)果：溶媒對(duì)照組和3個(gè)劑量給藥組動(dòng)物，體重增長(zhǎng)，攝食量正常，未見(jiàn)明顯毒性反應(yīng)；血液學(xué)僅見(jiàn)停藥期MPV組間比較有顯著性差異(P＜0.05)，血清生化學(xué)所測(cè)指標(biāo)停藥期A(yíng)LP、TP、ALB組間比較有顯著性差異(P＜0.05／0.01)，但均在本研究歷史背景資料范圍；臟器、器官組織病理學(xué)檢查未觀(guān)察到與受試藥物相關(guān)的病理組織學(xué)改變。結(jié)論：前列沖劑在本試驗(yàn)劑量范圍條件下對(duì)SD大鼠未引起明顯毒性反應(yīng)，即3.0g／kg體重，相當(dāng)于臨床成人擬用藥量的20倍以下為安全劑量參考范圍。
　　關(guān)鍵詞：前列沖劑；長(zhǎng)期毒性；動(dòng)物試驗(yàn)
　　中圖分類(lèi)號(hào)：R285．5　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
　　文章編號(hào)：1007－2349(2007)03－0038－02基金項(xiàng)目：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)創(chuàng)新藥物與中藥現(xiàn)代化重大專(zhuān)項(xiàng)博士基金項(xiàng)目(編號(hào)：2003AA223505)
　　作者簡(jiǎn)介：張春和(1968～)，男，四川南江縣人，副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士，主要從事泌尿外科、男科研究。
　　
　　前列沖劑為臨床使用多年的經(jīng)驗(yàn)處方，經(jīng)現(xiàn)代中藥制備工藝提取精制而成，主要用于治療良性前列腺增生癥屬腎虛血瘀膀胱氣化功能失司者。為了對(duì)該藥作出客觀(guān)的安全性評(píng)價(jià)，筆者進(jìn)行了前列沖劑大鼠灌胃給藥長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)。
　　
　　1　材料與方法
　　
　　1．1藥物與動(dòng)物前列沖劑(由云南中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院制劑中心提供，科研用藥無(wú)批號(hào))臨用前用高壓滅菌水配成0.3g，0.6g，0.45g／ml的混懸液。5～6周齡健康未交配SPF級(jí)雄性SD大鼠80只，體重140～180g(由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。
　　
　　1．2主要儀器及配套試劑 ADVIA 60型全自動(dòng)血球分析儀及配套試劑(測(cè)Hb、RBC、WBC、PLT、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW、MPV)；TMS－1024全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑(測(cè)G1u、AST、ALT、ALP、Crea、BUN、TP、ALB、T－CHO、T－Bil)；OLYMPUS BH－2顯微鏡；普通光學(xué)顯微鏡。
　　
　　1．3方法
　　1．3．1劑量設(shè)計(jì)及分組根據(jù)臨床成人(以60kg體重計(jì))擬用藥量0.15g／kg／d；ICR小鼠急性毒性試驗(yàn)的最大耐受量大于53.2g／40ml／kg。按《中藥、天然藥物長(zhǎng)期毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，設(shè)一個(gè)溶媒對(duì)照組和3個(gè)劑量組。80只大鼠隨機(jī)分為4組，每組20只。溶媒對(duì)照組：高壓滅菌水。低劑量組：3g／kg為臨床成人擬用量的20倍。中劑量組：6g／kg為臨床成人擬用量的40倍。高劑量組：9g／kg為臨床成人擬用量的60倍。
　　1．3．2給藥方法對(duì)照組、低、中、高劑量組均為10ml／kg體重等容量灌胃，高劑量組因給藥容量大故每天灌胃2次。
　　1．3．3實(shí)驗(yàn)周期2005年11月11日～2006年1月11日，每周灌胃給藥7d，連續(xù)6周，停藥恢復(fù)2周。
　　
　　1．4觀(guān)察指標(biāo)^[1] 每天觀(guān)察試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)食、飲水、活動(dòng)等一般情況，異常反應(yīng)或中毒癥狀，動(dòng)物死亡數(shù)，中途死亡動(dòng)物及時(shí)解剖進(jìn)行肉眼觀(guān)察和病理組織學(xué)檢查，以便了解死亡原因。每周稱(chēng)量動(dòng)物體重及進(jìn)食量一次，根據(jù)體重變化調(diào)整給藥容量。于末次給藥后24h各組隨機(jī)抽取約1／2動(dòng)物采血進(jìn)行血液學(xué)、血清生化檢查，解剖，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，剩余動(dòng)物停藥2周恢復(fù)觀(guān)察，檢查指標(biāo)同給藥末期。
　　1．4．1血液學(xué)檢測(cè)指標(biāo)血紅蛋白(Hb)測(cè)定、紅細(xì)胞(RBC)計(jì)數(shù)、白細(xì)胞(WEC)計(jì)數(shù)及分類(lèi)(％)、血小板(PLT)計(jì)數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞(％)紅細(xì)胞比容(HCT)、平均紅細(xì)胞容積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW)、平均血小板體積(MPV)測(cè)定。白細(xì)胞分類(lèi)和網(wǎng)織紅細(xì)胞采用手工推血片，顯微鏡計(jì)數(shù)。
　　1．4．2血清生化學(xué)檢測(cè)指標(biāo)血糖(Glu)、血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、肌酐(Crea)采用酶法。尿素氮(BUN)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽固醇(T－CHO)、總膽紅素(T－Bil)采用終點(diǎn)比色法。白／球比值(A／G)直接計(jì)算法。
　　1．4．3病理組織學(xué)檢查指標(biāo)解剖動(dòng)物肉眼觀(guān)察各臟器有無(wú)病變，取腦、心、肝、脾、肺、腎、前列腺、胸腺、睪丸、附睪稱(chēng)重，計(jì)算臟器指數(shù)。并取胃、腸(十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸)、胰腺、膀胱及腸系膜淋巴結(jié)于10％福爾馬林液固定，進(jìn)行對(duì)照組和高劑量組動(dòng)物病理切片，光鏡檢查各個(gè)臟器，如發(fā)現(xiàn)異常再對(duì)低劑量組及中劑量組進(jìn)行組織切片觀(guān)察。
　　
　　1．5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)，病理組織學(xué)檢查用X²檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理。
　　
　　2　結(jié)果
　　
　　2．1一般狀況 給藥期和恢復(fù)期對(duì)照、低、中、高劑量組動(dòng)物，狀態(tài)良好，活動(dòng)自如，毛皮光澤，均未出現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)。
　　
　　2．2死亡情況給藥6周及恢復(fù)2周，各組試驗(yàn)動(dòng)物均未出現(xiàn)死亡。
　　
　　2．3體重及進(jìn)食量給藥期及恢復(fù)期，動(dòng)物體重均增長(zhǎng)，進(jìn)食正常，給藥組與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　
　　2．4血液學(xué)檢查給藥末期MPV中劑量組略高于其余各組，有顯著性差異(P＜0.05)，但所測(cè)數(shù)值在文獻(xiàn)參考值和本實(shí)驗(yàn)室歷史背景資料范圍，且無(wú)明顯劑量一反應(yīng)關(guān)系，故認(rèn)為此差異無(wú)明顯的生物學(xué)和毒理學(xué)意義；恢復(fù)期給藥組及對(duì)照組，血液學(xué)各項(xiàng)檢查指標(biāo)各組間比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　
　　2．5血清生化檢查給藥末期僅見(jiàn)ALP、TP、ALB低劑量組均低于其余各組，有顯著性差異(P＜0.05)，但無(wú)明顯劑量一反應(yīng)關(guān)系，所測(cè)數(shù)值均在文獻(xiàn)參考值和本實(shí)驗(yàn)室歷史背景資料范圍，無(wú)生物學(xué)意義；恢復(fù)期各項(xiàng)檢查指標(biāo)未見(jiàn)明顯異常，各組間比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　
　　2．6臟器重量及指數(shù)給藥末期胸腺重量中、高劑量組之間有顯著性差異(P＜0.01)，但胸腺指數(shù)無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，病理組織學(xué)檢查結(jié)果未見(jiàn)異常，故不能認(rèn)為有毒理學(xué)意義，肝腎指數(shù)中、高劑量組與對(duì)照組比較均有顯著性差異(P＜0.05)，但絕對(duì)重量并無(wú)顯著性差異(P＞0.05)；恢復(fù)期肝指數(shù)低劑量組高于其余各組，有顯著性差異(P＜0.05)，結(jié)合分析血清生化肝功能指標(biāo)檢查及病理組織學(xué)檢查，結(jié)果均未見(jiàn)異常，且所測(cè)數(shù)值均在文獻(xiàn)參考值和本實(shí)驗(yàn)室歷史背景資料范圍，故認(rèn)為無(wú)毒理學(xué)意義。
　　
　　2．7病理組織學(xué)檢查結(jié)果給藥末期和恢復(fù)期解剖動(dòng)物，對(duì)照、低、中、高劑量組動(dòng)物主要臟器、器官色澤正常，光滑，未見(jiàn)充血、粘連等異常改變。鏡下可見(jiàn)對(duì)照和高劑量組均有少量動(dòng)物出現(xiàn)局灶性肺出血；心肌間質(zhì)瘀血；肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死，肝肉芽腫；腎間質(zhì)瘀血；前列腺間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，對(duì)照組與給藥組病變程度無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，觀(guān)察到的組織學(xué)異常改變?yōu)榇笫蟪Ｒ?jiàn)自發(fā)性病變，非受試藥物所致，其余臟器、器官未見(jiàn)異常。
　　
　　3　討論
　　
　　前列沖劑臨床成人擬用藥量為每日9g，小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)未測(cè)出LD，最大耐受量為臨床擬用量的355倍以上^[2]。灌胃給予SD大鼠前列沖劑3.0、6．0、9.0g／kg體重(相當(dāng)于臨床成人擬用量的20、40、60倍)，連續(xù)6周，停藥恢復(fù)2周長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，在本試驗(yàn)劑量范圍，未觀(guān)察到試驗(yàn)動(dòng)物明顯的毒性反應(yīng)，試驗(yàn)動(dòng)物血液學(xué)及血清生化學(xué)檢查指標(biāo)均在文獻(xiàn)參考值和本室歷史背景資料范圍，試驗(yàn)動(dòng)物臟器、器官病理組織學(xué)檢查未見(jiàn)與藥物相關(guān)的病理組織學(xué)改變。前列沖劑灌胃給藥3.0g／kg體重(相當(dāng)于臨床成人擬用藥量的20倍)以下可為安全劑量參考范圍。
　　
　　
　　參考文獻(xiàn)：
　　[1]謝秀瓊．中藥新制劑開(kāi)發(fā)與應(yīng)用[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2000．527～542．
　　[2]張春和，林詠梅，陳天波，等．前列沖劑小鼠灌胃給藥急性毒性實(shí)驗(yàn)研究[1]．中華實(shí)用醫(yī)學(xué)，2006，8(6)：1～2．
　　
　　(收稿日期：2007－01－27