樹突狀細(xì)胞與慢性HBV感染免疫耐受研究進(jìn)展

張巧云，歐紅玲，白靜，王巖，李曉寧，王欣茹

火箭軍總醫(yī)院檢驗科，北京 100088

目前HBV感染已成為世界范圍內(nèi)的健康問題，人感染HBV易發(fā)生慢性化，主要機(jī)制為免疫系統(tǒng)對HBV抗原產(chǎn)生不同程度的特異性免疫無應(yīng)答。機(jī)體對獲得HBV病毒的清除同HBV特異性CD8+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞存在緊密的聯(lián)系?？墒菃拘褭C(jī)體中相應(yīng)細(xì)胞所需未致敏的T淋巴細(xì)胞在相同時間內(nèi)受兩個信號刺激，第一個即外源性抗原肽經(jīng)抗原遞呈細(xì)胞(APC)予以處理之后同MHC I類分子整合于APC表面,由T淋巴細(xì)胞的T細(xì)胞受體予以識別；第二個信號即APC表面呈現(xiàn)出的協(xié)同刺激分子 (像 CD80)，由T淋巴細(xì)胞的CD28分子予以識別。僅在T淋巴細(xì)胞于相同時間內(nèi)受到APC供以的兩個信號一起刺激時,特異性免疫應(yīng)答才可以激活[1]。然而，于慢性感染人員機(jī)體中，機(jī)體免疫反應(yīng)不足以有效地清除病毒，與機(jī)體免疫應(yīng)答狀態(tài)相關(guān)。DCs是功能最為突出的專職抗原遞呈細(xì)胞，它的功能不足屬于免疫耐受出現(xiàn)的關(guān)鍵原因。

1 樹突狀細(xì)胞

DCs屬于機(jī)體中最關(guān)鍵的專職APC，表達(dá)大量可以對外源性抗原予以識別的受體，進(jìn)而對黏膜上皮表面產(chǎn)生的危險信號予以檢測，接著予以捕獲和加工眾多抗原同時將其提送至初始型T淋巴細(xì)胞，進(jìn)而激發(fā)后者進(jìn)而增殖以及活化，被視作屬于喚醒機(jī)體特異性免疫應(yīng)答同時對其予以調(diào)控以及維持的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[2]。DCs在腫瘤免疫以及抗感染免疫等方面存在不可忽視的作用。DCs來自骨髓CD34+細(xì)胞，數(shù)量相對較低，人外周血細(xì)胞數(shù)量內(nèi)所占有的比例不足1%，小鼠脾細(xì)胞內(nèi)占有的比例在0.2%～0.5%之間。在人以及鼠當(dāng)中，大體存在兩種類型的DC，也就是傳統(tǒng)樹突狀細(xì)胞(cDC)以及類漿細(xì)胞樹突狀細(xì)胞(pDC)，前者來自骨髓，后者來自淋巴。相關(guān)研究顯示，骨髓前體細(xì)胞以及淋巴祖細(xì)胞都可以出現(xiàn)以上兩種細(xì)胞亞型，可是骨髓源屬于關(guān)鍵來源[3]。DCs屬于一類存在分支以及樹突狀形態(tài)的細(xì)胞,其彼此交錯,伸展至淋巴細(xì)胞內(nèi),可以把抗原遞送至相鄰的T細(xì)胞,具有啟動初始免疫應(yīng)答的獨特作用。DC具有3個分化時期，分別是前體階段，未成熟DC(imDC)以及成熟DC(mDC),未成熟或亞成熟DC來源于CD34＋的造血祖細(xì)胞,經(jīng)過抗原攝取、炎癥因子活化等一系列過程,進(jìn)而轉(zhuǎn)變?yōu)楦欣诳乖f呈的成熟DC。成熟DC將抗原呈遞給CD4＋的Th細(xì)胞,激活T細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL),進(jìn)行特異性的免疫應(yīng)答[4]。同imDC進(jìn)行比較，mDC存在很大的標(biāo)志性分子CD83，共刺激分子(像CD54以及CD86等)以及細(xì)胞表面MHCⅡ類分子表達(dá)，胞飲吞噬作用降低，其處理抗原的能力下降甚至丟失[5]，即mDC的抗原遞呈能力和體外激發(fā)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的能力均相對強(qiáng)大，可是其抗原攝取能力不足。資料表明，在慢性乙型肝炎病毒感染中，病毒的清除有賴于成熟DC所激發(fā)的特異性免疫應(yīng)答。此外，發(fā)現(xiàn)HBV可以感染單核細(xì)胞來源DC并導(dǎo)致共刺激分子表達(dá)降低，證明T、B細(xì)胞的低反應(yīng)性與DC功能損傷相關(guān)[6]。總之，DCs是目前已知的唯一能激活初始型T淋巴細(xì)胞的抗原提呈細(xì)胞，其關(guān)鍵的功能在于間接激活特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)，此過程是利用喚醒初始型T淋巴細(xì)胞活化增生得以達(dá)到的。最近幾年，DCs同HBV免疫耐受機(jī)制所存在的聯(lián)系的研究逐漸成為熱門。

2 樹突狀細(xì)胞與HBV免疫耐受

DC功能不足屬于造成慢性HBV患者免疫耐受的關(guān)鍵因素，主要表現(xiàn)為DCs不成熟，也就是不可以有效的把HBV感染的抗原信息遞送至初始型T淋巴細(xì)胞，此外DC低表達(dá)CD80和CD86等共刺激分子，不切實的給初始型T淋巴細(xì)胞的活化供以共刺激信號，造成其不可以切實的進(jìn)行活化，出現(xiàn)針對于HBV的整體又或者較大部分免疫耐受狀態(tài)，結(jié)果出現(xiàn)HBV的長期攜帶狀態(tài)[7]。眾所周知，IL-12和IL-10為DC分泌的重要細(xì)胞因子，可以誘導(dǎo)Th1或Th2參與的多種抗細(xì)菌或病毒免疫應(yīng)答。IL-12誘導(dǎo)T細(xì)胞分泌IFN-γ，驅(qū)使Th1分化；IL-10促進(jìn)Th2分化。二者平衡調(diào)控機(jī)體抗HBV病毒反應(yīng)，抑制病毒復(fù)制，保護(hù)肝損傷[8-9]。來自慢性HBV攜帶者外周血DC的體外研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)低表達(dá)共刺激分子及細(xì)胞因子，表明其較低的共刺激能力[10]。

近來，眾多研究顯示，于慢性HBV感染患者體內(nèi)，機(jī)體T淋巴細(xì)胞自身沒有出現(xiàn)較大的損傷，它的功能不足以及失常的關(guān)鍵原因是因為其上游的DCs抗原遞呈功能以及免疫調(diào)節(jié)功能遭到破壞，造成T淋巴細(xì)胞等免疫功能有所降低[1]。故而，于慢性HBV患者體內(nèi)，保證DCs的成熟狀態(tài)，打破機(jī)體的抗HBV免疫耐受狀態(tài)，是有效清除病毒的先決條件。

3 HBV感染樹突狀細(xì)胞

慢性乙型肝炎病毒中，DCs功能障礙除了與其成熟狀態(tài)相關(guān)外，還與細(xì)胞自身受HBV感染相關(guān)。HBV最初感染肝細(xì)胞，但體內(nèi)外研究表明，HBV同樣可以與DCs相互作用。在慢性乙型肝炎患者外周血來源的mDC中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有HBV存在。體外實驗證明外周血DC中存在的HBsAg可導(dǎo)致mDC功能受損，且導(dǎo)致病毒載量降低。此外已經(jīng)證明mDC和pDC內(nèi)均可以檢測到HBV DNA，這可能與病毒黏附到細(xì)胞表面或DC的攝取相關(guān)，但是，在DCs細(xì)胞內(nèi)并沒有檢測到HBV RNA復(fù)制的中間產(chǎn)物，表明HBV并沒有在DC細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制。同樣，病毒感染DCs可以下調(diào)細(xì)胞表面共刺激分子的表達(dá)、降低細(xì)胞因子的分泌、破壞抗原遞呈功能，不能有效地激發(fā)抗HBV細(xì)胞免疫應(yīng)答，導(dǎo)致病毒持續(xù)感染[11-12]。目前HBV感染DCs的具體分子機(jī)制以及感染HBV的DC是否能被CTLs所清除還未明確，但已證明由此可導(dǎo)致DC功能紊亂并誘導(dǎo)T細(xì)胞對HBV的免疫耐受并導(dǎo)致DC功能紊亂[13]。

4 DC疫苗

DC屬于當(dāng)下已知的功能最突出的抗原遞呈細(xì)胞，慢性乙型病毒性肝炎病人特異性T細(xì)胞免疫功能失常同DC成熟和功能紊亂存在密切的聯(lián)系，所以，研發(fā)能夠提高DC功能同時還可以促使特異性免疫應(yīng)答的疫苗存在很大的記錄可以進(jìn)一步提高其抗病毒效用。HBV S蛋白 (HBsAg)屬于乙肝病毒包膜蛋白的關(guān)鍵組分，利用對抗包膜蛋白特異性CTL應(yīng)答予以誘導(dǎo)的免疫治療方法存在很大的可能可以控制慢性HBV感染，其被大量的用在乙肝疫苗的研究方面。

通過生物免疫技術(shù)，在體外細(xì)胞培養(yǎng)條件下可得到眾多攜帶HBV信息同時功能穩(wěn)定的DC，把此部DC回輸至慢性HBV攜帶人員，能夠毫無阻礙的突破機(jī)體免疫系統(tǒng)于HBV的免疫耐受的局面，使得機(jī)體免疫功能得以恢復(fù)，再次喚醒抗HBV的免疫反應(yīng)，切實的阻礙病毒增值又或者清除病毒[7]。目前已有臨床研究顯示，體外誘導(dǎo)的DC，通過HBsAg致敏之后的抗HBV-DC靜脈回輸，能夠顯著降低體內(nèi)HBsAg含量。體外研究也已證明轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)HBsAg融合DC可打破CTL抗HBV免疫耐受，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答[14-15]。HBsAg致敏的抗HBV-DC靜脈回輸治療通過擴(kuò)增自身來源的PBMC,不會產(chǎn)生不良排斥反應(yīng)，為這類患者的治愈提供一種有效的治療手段。

5 總結(jié)

DCs功能的調(diào)節(jié)對自身特異性抗病毒免疫至關(guān)重要。B淋巴細(xì)胞出現(xiàn)的免疫球蛋白的類別由DC予以調(diào)控，它在免疫球蛋白的分泌方面具有非常重要的作用。此外，DC針對B淋巴細(xì)胞的發(fā)育同樣具有不可忽視的作用。所以DC屬于免疫反應(yīng)的效應(yīng)子以及調(diào)節(jié)子，能夠介導(dǎo)體液免疫以及細(xì)胞免疫的應(yīng)答。但有關(guān)DCs與HBV之間相互作用的機(jī)制還存在很多問題，比如HBV感染DCs是其細(xì)胞本身功能缺陷的結(jié)果，還是宿主本身為保護(hù)肝細(xì)胞大量受損而激發(fā)的免疫反應(yīng)，或者二者兼具還不得而知。雖然DC疫苗研究為慢性HBV患者免疫功能的恢復(fù)取得一定進(jìn)展，體外研究也已經(jīng)證實可以通過促成熟因子使DC功能得以糾正，但仍需要深入研究打破DCs免疫耐受機(jī)制，完善DCs免疫治療方法，更好地為臨床提供抗病毒及抗腫瘤治療服務(wù)。

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