離體替代試驗(yàn)方法在毒理學(xué)安全性評價(jià)中的應(yīng)用進(jìn)展

長期以來，化妝品毒理學(xué)安全性評價(jià)在很大程度上是依賴于動物實(shí)驗(yàn)獲取各項(xiàng)毒性數(shù)據(jù)，以此外推對人體健康的可能危害。 盡管已知人和動物對某些化學(xué)物質(zhì)的代謝存在差異，而且敏感動物的某些器官組織結(jié)構(gòu)（如兔眼角膜）與人的也不盡相同，因此，有人質(zhì)疑現(xiàn)有動物實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)是否能準(zhǔn)確地預(yù)示對人體的危害；從倫理角度看，同時(shí)也是來自公眾和動物保護(hù)組織的壓力，是否一定要用動物試驗(yàn)達(dá)到預(yù)示目的呢？隨著毒理學(xué)科的發(fā)展，從描述毒理進(jìn)入到機(jī)制研究，探究利用新的生物體系和生物工程技術(shù)成為可能。1959年Russel Burch提出“3R”原則， 第一個(gè)“R”是替代試驗(yàn)（Replacement），即利用簡單的生物系統(tǒng)如培養(yǎng)的細(xì)菌細(xì)胞、哺乳動物和人的組織、細(xì)胞以及特殊的動物器官或非生物構(gòu)建體系等方法取代動物試驗(yàn)；第二個(gè)“R”是減少動物的使用數(shù)量(Reduction)，在保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量的前提下，選擇合適動物和方法，改進(jìn)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，減少動物用量； 第三個(gè)“R”是精化和改良技術(shù)(Refinement)，盡量減輕實(shí)驗(yàn)過程對動物造成不必要的痛苦和傷害。1985年美國“倫理化國際基金會”補(bǔ)充 第四個(gè)“R”責(zé)任(Responsobility)，主要是增強(qiáng)人們的倫理觀念，不僅對動物負(fù)責(zé)，更要對人類負(fù)責(zé)，保證各類產(chǎn)品進(jìn)入市場后，在正常和可預(yù)見的使用條件下對消費(fèi)者無傷害。

長期以來，歐洲化妝品工業(yè)在評估化妝品原料和化妝品成品安全性過程中致力于發(fā)展有效的非動物的替代方法，不僅因?yàn)樵絹碓蕉嗟南M(fèi)者反對用動物進(jìn)行安全性試驗(yàn)，重要的是使用非動物的替代方法可以提高用于安全性評價(jià)數(shù)據(jù)的質(zhì)量。這一點(diǎn)特別明確地體現(xiàn)在歐盟化妝品指南（93/35/EEC，1994）第6次修定本中，該指南規(guī)定在1998年1月以后化妝品原料或原料的混合物使用了動物試驗(yàn)將不允許進(jìn)入歐盟國家市場銷售，除非沒有合適、有效的取代動物的替代方法；1992—1993年歐共體委員會(the Commission of the European Community， ECC) 和歐洲化妝品、個(gè)人護(hù)理用品和香水協(xié)會(the European Cosmetic， Toiletry and Perfumery Association， COLIPA)倡議建立歐洲替代試驗(yàn)有效性驗(yàn)證中心 (European Centre for the Validation of alternative Methods， ECVAM)，隨后美國也成立了機(jī)構(gòu)間替代方法有效性驗(yàn)證合作委員會 (the Interagency Coordinating Committee for the Validation of Alterative Methods， ICVAM)和機(jī)構(gòu)間替代方法管理小組（the Interagency Regulatory Alterative Group，IRAG），進(jìn)行離體替代方法有效性評價(jià)。自1985年以來，科學(xué)文獻(xiàn)報(bào)道的離體替代方法涉及皮膚刺激性試驗(yàn)、皮膚腐蝕性試驗(yàn)、經(jīng)皮吸收試驗(yàn)、 眼刺激性試驗(yàn)、皮膚光毒性試驗(yàn)和皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)等。1996年美國化妝品、個(gè)人護(hù)理用品和香水協(xié)會(Cosmetics， Toiletries and Fragrance Association， CTFA)的替代方法評價(jià)方案報(bào)道了取自23個(gè)類型的離體眼刺激性替代試驗(yàn)中41個(gè)終點(diǎn)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)與兔眼刺激性試驗(yàn)（Draize試驗(yàn)）的數(shù)據(jù)進(jìn)行了相關(guān)性比較，結(jié)果指出，無論是動物試驗(yàn)還是離體試驗(yàn)出現(xiàn)的預(yù)示差異，不僅反映模型選擇有誤，還反映特有物質(zhì)成分的差異，他們認(rèn)為目前離體替代方法還沒有單一終點(diǎn)超過Draize試驗(yàn)的最大平均積分（MAS）。根據(jù)OECD (the Organization for Economic Coorperation and Development， 經(jīng)濟(jì)合作和發(fā)展組織) 化學(xué)物質(zhì)試驗(yàn)方法指南的要求，一種試驗(yàn)方法無論是動物的還是離體的，應(yīng)該具備以下條件：（1）有合適的相關(guān)終點(diǎn)；（2）其科學(xué)性、靈敏性和重復(fù)性（包括可行性）需通過嚴(yán)格審定； （3）方法可標(biāo)準(zhǔn)化；（4）在正常情況下不需要特殊儀器和技能。

事實(shí)上，離體替代方法的有效性驗(yàn)證應(yīng)該有離體試驗(yàn)與整體試驗(yàn)的對比、單個(gè)實(shí)驗(yàn)室或不同實(shí)驗(yàn)室所得結(jié)果重復(fù)性的對比以及與標(biāo)準(zhǔn)和對照物的對比，才能確定該替代方法在預(yù)示對人體危害方面的準(zhǔn)確性。迄今為止，ECVAM的科學(xué)顧問委員會（the Scientific Advisory Committee， ESAC）報(bào)告了兩個(gè)離體皮膚腐蝕性試驗(yàn)的有效性驗(yàn)證過程， 歐洲化妝品和非食品科學(xué)委員會(the Scientific Committee on Cosmetic and Non-Food Products， SCCNFP)為了管理目的準(zhǔn)備驗(yàn)收并呈交OECD；對經(jīng)皮吸收試驗(yàn)的評價(jià)， 在基本規(guī)范上還需要完善（SCCNFP/0167/99）；有四種離體眼刺激性試驗(yàn)方法在歐洲進(jìn)行了一系列論證，用于鑒定有嚴(yán)重眼刺激性的化學(xué)物，一些歐盟國家已將雞胚絨毛膜尿囊膜眼刺激性替代試驗(yàn)用于化妝品的安全性評價(jià)；3T3成纖維細(xì)胞中性紅攝取光毒試驗(yàn)指南操作已呈交OECD。最近，歐共體法規(guī)重申使用過動物試驗(yàn)的化妝品原料或原料的混合物不允許進(jìn)入歐盟國家市場，實(shí)施日期將延至2004年9月后。我國加入WTO后，一些涉及毒理學(xué)安全性評價(jià)的試驗(yàn)方法也需要與國際接軌，離體眼刺激性替代試驗(yàn)和離體光毒替代試驗(yàn)已在我國衛(wèi)生部化妝品標(biāo)準(zhǔn)委員會立項(xiàng)，工作正在進(jìn)行之中。