熱帶亞熱帶水果膠孢炭疽菌對多菌靈的抗藥性測定

張新怡 李雪 高兆銀

摘 要 采用生長速率法對來自海南18種熱帶亞熱帶水果的893株膠孢炭疽菌（C. gloeosporioides）進行多菌靈抗藥性測定。結(jié)果表明：在供試菌株中，11.87%的菌株對多菌靈產(chǎn)生了不同程度的抗性，且高抗菌株達9.63%，具有抗多菌靈的C. gloeosporioides菌株主要來自芒果、荔枝和龍眼等14種水果。多菌靈對供試菌株的毒力存在差異，EC50值的最高值與最低值相差4.17×105倍，EC90值的最高值與最低值相差7.49×106倍。建議在熱帶亞熱帶水果病害防治中，慎用多菌靈等苯并咪唑類殺菌劑，選擇作用機制不同的殺菌劑交替使用，延緩抗藥性的產(chǎn)生，提高殺菌劑的防效。

關(guān)鍵詞 熱帶亞熱帶水果 ；膠孢炭疽菌 ；多菌靈 ；抗藥性

分類號 S436.67

炭疽菌（Colletotrichum spp.）可以侵染大多數(shù)熱帶亞熱帶水果，引起的炭疽病是熱帶亞熱帶水果上最重要的病害之一，不僅侵染葉片、枝梢、花和果實，引起田間病害，潛伏的病菌在果實貯運期繼續(xù)危害，造成果實大量腐爛[1]。引起熱帶亞熱帶水果炭疽病的病菌包括膠孢炭疽菌（C. gloeosporioides）、芭蕉炭疽菌（C. musae）、尖孢炭疽菌（C. acutatum）和辣椒炭疽菌（C. capsici）等，其中，C. gloeosporioides可侵染多種熱帶亞熱帶水果，引起的炭疽病發(fā)生最普遍、為害最嚴重[2]。使用殺菌劑防治熱帶亞熱帶水果膠孢炭疽病是最常用、最有效的方法，而多菌靈等苯并咪唑類殺菌劑因高效低毒、價格便宜在生產(chǎn)上廣泛使用，但該類殺菌劑存在作用位點單一、易導(dǎo)致抗藥性和交互抗性等特點[3]。目前，已報道柑橘、葡萄、草莓、芒果、香蕉等水果膠孢炭疽病對苯并咪唑類殺菌劑產(chǎn)生了抗藥性[4-10]。

鑒于中國熱帶亞熱帶水果膠孢炭疽病發(fā)生普遍，為害嚴重，多菌靈等苯并咪唑類殺菌劑防治熱帶亞熱帶水果膠孢炭疽病防效降低等，本研究開展熱帶亞熱帶水果膠孢炭疽菌（C. gloeosporioides）對多菌靈的抗藥性測定，明確熱帶亞熱帶水果膠孢炭疽?。–. gloeosporioides）對多菌靈等苯并咪唑類殺菌劑的抗藥性現(xiàn)狀，為指導(dǎo)熱帶亞熱帶水果膠孢炭疽病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

2013～2014年從海南的果園及水果市場采集芒果、荔枝、龍眼、番木瓜、火龍果、紅毛丹等18種熱帶亞熱帶水果的發(fā)病葉片、花穗和果實等炭疽病典型癥狀的樣品。

98%多菌靈：江蘇蘇化集團新沂農(nóng)化有限公司。

1.2 方法

1.2.1 C. gloeosporioides分離

采用科赫法則對樣品進行病原菌的分離與鑒定，通過真菌形態(tài)學(xué)和ITS序列鑒定獲得C. gloeosporioides。

1.2.2 C. gloeosporioides對多菌靈的抗藥性測定

采用系列稀釋法測定多菌靈對C. gloeosporioides的抑菌作用，其供試濃度為0.0、1.0和100.0 μg/mL。參照徐大高等[11]研究的抗藥性分級標準，用最低抑菌濃度值1.0 μg/mL作為抗藥性檢測標準區(qū)分敏感菌株和抗性菌株，即在含多菌靈1.0 μg/mL的平板上不能生長的菌株為敏感菌株，在含多菌靈1.0 μg/mL的平板上能生長的菌株為抗性菌株，其中在1.0 μg/mL的平板上能生長、100.0 μg/mL的平板上不能生長的為中低抗性菌株，在100.0 μg/mL的平板上能生長的為高抗菌株。

1.2.3 多菌靈對部分菌株的毒力測定

隨機選擇10株敏感菌株和10株抗性菌株，測定多菌靈對供試20菌株的毒力。根據(jù)不同菌株在0.0、1.0和100.0 μg/mL含藥平板上的生長情況和抑菌率大小，設(shè)置不同菌株的毒力測定濃度梯度，每菌株設(shè)5個濃度梯度，每濃度3 皿，恒溫（28±0.5）℃培養(yǎng)96 h 后測量菌落大小，計算抑菌率。試驗重復(fù)3次。求各濃度的平均抑菌率，并以濃度的對數(shù)值（x）和平均抑菌率的機率值（y）求毒力回歸方程，計算相關(guān)系數(shù)、EC50值和EC90值[12]。

2 結(jié)果與分析

2.1 C. gloeosporioides的來源

所有炭疽病菌來源見表1。經(jīng)鑒定，均為C. gloeosporioides。

2.2 對多菌靈的抗藥性測定

由表1可知，在供試的893株C. gloeosporioides中，787株在1.0 μg/mL的含藥平板上不能生長，20株在1.0 μg/mL的含藥平板上生長，在100.0 μg/mL的含藥平板上不能生長，86株在100.0 μg/mL的含藥平板上能生長，分別占88.13%、2.24%和9.63%。說明在熱帶亞熱帶水果C. gloeosporioides菌中，已存在對多菌靈產(chǎn)生抗藥性的群體，且在抗藥性群體中，以高抗菌株為主。

在18種供試熱帶亞熱帶水果中，有14種水果的C. gloeosporioides菌出現(xiàn)了不同程度的抗藥性，其中，芒果的C. gloeosporioides抗藥性出現(xiàn)比例最高，達到26.87%，且高抗菌株比例達23.88%；其次為荔枝，抗藥性比例達到21.93%，且高抗菌株比例達16.28%；龍眼的抗性菌株比例達到14.29%，而番石榴、人心果、番荔枝和油梨等水果上未見抗性菌株出現(xiàn)。

2.3 多菌靈對部分菌株的毒力分析

由表2可知，多菌靈對供試菌株的毒力存在很大差異。對供試菌株的EC50值0.03～12 511.80 μg/mL，最高值與最低值相差4.17×105倍，EC90值0.15～1 123 446.50 μg/mL，最高值與最低值相差7.49×106倍。

3 討論與結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)，在熱帶亞熱帶水果C. gloeosporioides菌中，已產(chǎn)生對多菌靈具有抗藥性的群體，且抗藥性群體出現(xiàn)最多的寄主是芒果、荔枝和龍眼等大宗熱帶水果，可能與這些水果種植面積大、長期使用多菌靈等苯并咪唑類殺菌劑等有關(guān)，油梨、番荔枝、人心果、番石榴等水果C. gloeosporioides菌中尚未發(fā)現(xiàn)抗藥性菌株，可能采集樣品數(shù)量過少或水果種植面積、施藥種類有關(guān)。在蛋黃果等優(yōu)稀水果上出現(xiàn)抗藥性菌株，可能與C. gloeosporioides菌存在交互侵染等有關(guān)[13]，供試菌株是否存在同樣的交互侵染還需進一步研究。因此，在今后的熱帶亞熱帶水果病害防治中，要慎用多菌靈等苯并咪唑類殺菌劑，需選擇作用機制不同的殺菌劑交替使用，延緩抗藥性的產(chǎn)生，提高殺菌劑的防效。

參考文獻

[1] 林春花，胡美姣. 炭疽菌潛伏侵染研究進展[J]. 熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2004，24（3）：57-63

[2] 胡美姣，李 敏，高兆銀，等. 熱帶亞熱帶水果采后病害及防治[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2010

[3] 周明國，葉鐘音. 植物病原菌對苯并咪唑類及相關(guān)殺菌劑的抗藥性[J]. 植物保護，1987，13（2）：31-33

[4] Peres N A R， Souza N L， Peever T L，et al. Benomyl sensitivity of isolates of Colletotrichum acutatum and C. gloeosporioides from citrus[J]. Plant diseases，2004，88：125-130

[5] 楊 媚，馮淑杰，何銀銀，等. 柑橘炭疽病高效殺菌劑的篩選及抗藥性菌株的發(fā)現(xiàn)[J]. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2013，34（1）：28-32

[6] 李 洋. 遼寧葡萄炭疽病菌對多菌靈抗藥性研究[D]. 蘭州：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

[7] 葉 佳，張傳清. 葡萄炭疽病菌對甲基硫菌靈、戊唑醇和嘧菌酯的敏感性檢測[J]. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2012，14（1）：111-114

[8] 韓國興，禮 茜，孫飛洲，等. 杭州地區(qū)草莓炭疽病病原鑒定及其對多菌靈和乙霉威的抗藥性[J]. 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009（6）：1 169-1 172

[9] 黃圣明，楊 葉，劉秀娟. 香蕉果實潛伏炭疽菌對苯并咪唑類殺菌劑的抗藥性研究[J]. 熱帶作物學(xué)報，1996，17（2）：47-51

[10] Zhang L H， Li M， Gao Z Y， et al. Screening and cross-resistance analysis of alternative fungicid Y X es against carbendazim-resistant Colletotrichum gloeosporioides Penz. From mango （Mangifera indica L.） [J]. Acta Horticulturae，2013，992：415-422

[11] 徐大高， 潘汝謙， 鄭 仲，等. 芒果炭疽病菌對多菌靈的抗藥性監(jiān)測[J]. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2004，25（2）：34-36.

[12] 李 敏，高兆銀，胡美姣，等. 番木瓜炭疽病菌拮抗細菌的篩選及防治試驗[J]. 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009（3）：553-554，618

[13] Alahakoon P W， Brown A E. Host range of Colletotrichum gloeosporioides on tropical fruit crops in Sri Lanka[J]. International Journal of Pest Mangemant， 1994， 40（1）： 23-26.