• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    溫度對酸乳中乳酸菌胞外多糖作用機制的研究

    2012-11-15 02:07:56楊同香李全陽
    食品工業(yè)科技 2012年9期
    關鍵詞:胞外外源性酸乳

    楊同香,王 芳,李全陽

    (廣西大學輕工與食品工程學院,廣西南寧530004)

    溫度對酸乳中乳酸菌胞外多糖作用機制的研究

    楊同香,王 芳,李全陽*

    (廣西大學輕工與食品工程學院,廣西南寧530004)

    重點探討了不同發(fā)酵溫度下酸乳發(fā)酵產生的胞外多糖含量變化以及添加不同來源的胞外多糖對酸乳流變學特性的作用,結果表明:37℃條件下發(fā)酵所得酸乳多糖含量最高,達到461.4mg/mL,43℃條件下酸乳多糖含量最低,僅為247.6mg/mL。酸乳產生的內源性胞外多糖表現(xiàn)在產品特性上,其表觀黏度及剪切應力隨時間的變化都明顯(P<0.05)高于外源添加胞外多糖的酸乳。表觀黏度隨剪切時間的變化曲線符合對數(shù)函數(shù)y=kLn(x)+b(內、外源R2分別為0.9527、0.9015)的變化規(guī)律。此外,酸乳經過發(fā)酵產生內源性胞外多糖后,其持水力(WHC)較添加外源性胞外多糖的酸乳高出26%,膠體脫水收縮作用敏感性(STS)較添加外源性胞外多糖的酸乳低46%。這說明低溫有利于乳酸菌胞外多糖形成,且內源性胞外多糖酸乳的表觀黏度大、持水力高。

    酸乳,發(fā)酵溫度,胞外多糖,流變學特性

    酸乳制作過程中,有些乳酸菌菌株在發(fā)酵產酸的同時還產生粘性成分——胞外多糖。這些成分能夠對酸乳的黏度、粘彈性、凝聚性、結構和質地等產生顯著的影響[1],因此引起許多學者和企業(yè)的極大興趣。Milena Corredig[2]等對乳酸菌胞外多糖與蛋白質相互作用進行了綜述;Maude Girard[3]等采用滴定法和離心法研究了五種帶陰離子胞外多糖和牛奶蛋白質的相互作用;Ayala-Hernandez[4-5]等研究了乳酸乳球菌產胞外多糖與牛奶蛋白之間的相互作用,以及pH和中間產物對胞外多糖與牛乳蛋白相互作用和流變學特性的影響。這些研究者從不同的角度(如pH)揭示并闡釋了乳酸菌胞外多糖與蛋白質之間的相互作用,但未就溫度與乳酸菌胞外多糖的作用機理進行研究。孫健[6]研究了酸奶儲存溫度對其品質的影響;Lin[7]等研究了37℃發(fā)酵酸乳的發(fā)酵時間對乳酸菌胞外多糖含量的影響;馬艷[8]等研究了高產胞外多糖濕熱鏈球菌混菌的培養(yǎng)溫度對酸乳胞外多糖含量影響,由此看來,在各種影響因素中,溫度發(fā)揮著非常重要的作用。但是,目前均未發(fā)現(xiàn)針對發(fā)酵溫度對酸乳乳酸菌胞外多糖的作用機制的相關報道。因此,有必要對溫度與胞外多糖的影響作用機制進一步深入研究。作者前期研究發(fā)現(xiàn),酸乳在添加增稠劑后,其黏度反而下降,且有乳清析出現(xiàn)象[9],隨后通過一系列實驗,探索并表征了現(xiàn)象背后的作用機制[10-12],同時溫度對乳酸菌胞外多糖的產生具有非同尋常的影響作用,為此,本研究則著重探討溫度對乳酸菌胞外多糖產量的影響以及添加不同來源的胞外多糖對酸乳流變學特性的影響,以期豐富和深化乳酸菌胞外多糖的形成及其對酸乳特性的影響作用機制。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)、粘性嗜熱鏈球菌(Ropy streptococcus thermophilus) 由廣西大學輕工與食品工程學院保藏;牛奶 購自南寧市農大牛奶廠;脫脂奶粉 購自伊利實業(yè)集團股份有限公司;SephacrylS-300等 購自GE公司;無水乙醇、三氯乙酸、氫氧化鈉、乙醚、丙酮等 均為國產分析純。

    高速離心機 Bekman公司;UV-1601紫外分光光度計 日本SHIMADZU公司;DV-Ⅲ流變儀 美國BROOK FIELD。

    1.2 實驗方法

    1.2.1 酸乳制備工藝 農大牛奶→均質→殺菌→冷卻→接種→發(fā)酵→冷藏→后熟

    所用的菌種為嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌的混合菌種(1∶1),接種量為3%接種后分裝,分別在37、40、43℃條件下發(fā)酵,當酸度達到80°T時取出,放入4℃的冰箱中后熟24h。

    1.2.2 內源性胞外多糖(EPS)的制備 內源性胞外多糖由粘性保加利亞菌株發(fā)酵復原脫脂乳制成。

    1.2.3 外源性胞外多糖(EPS)的制備 普通保加利亞菌株發(fā)酵酸乳→鈍化→蒸發(fā)濃縮→乙醇沉淀→水溶解沉淀→加三氯乙酸去蛋白→透析→濃縮→乙醇沉淀→脫水→粗胞外多糖

    將從不同溫度下發(fā)酵酸乳得到的粗胞外多糖樣品溶于0.05mol/L,pH7.5的磷酸鹽緩沖溶液中,用SephacrylS-300凝膠柱層析,0.05mol/L pH7.5的磷酸鹽緩沖溶液洗脫,胞外多糖的含量測定采用苯酚-硫酸法。

    1.2.4 膠體脫水收縮作用敏感性(STS)的測定 在4℃下,將含內源性EPS、外源性EPS的發(fā)酵酸乳50g置入帶有120目不銹鋼絲網(wǎng)的漏斗中,用燒杯收集瀝出的乳清[13]。收集時間為2h,每個樣品取3個平行。

    STS(%)=(乳清析出量/樣品質量)×100%

    1.2.5 持水力(WHC)的測定 在10℃下,將含內源性EPS、外源性EPS的發(fā)酵酸乳15g放入離心管中,3000r/min離心30min[14]。每個樣品取3個平行。

    WHC(%)=(離心后沉淀的質量/樣品質量)×100%

    1.2.6 黏度的測定[15]采用DV-Ⅲ流變儀,測定條件:轉子轉速為0~224r/min,先升速后降速,時間間隔為8s。

    1.2.7 觸變環(huán)的測定 采用DV-Ⅲ流變儀,測定條件:轉子轉速為0~224r/min,先升速后降速,升速/降速的頻率為16r/min,時間間隔為8s。

    2 結果與討論

    2.1 不同發(fā)酵溫度下多糖含量變化

    酸乳胞外多糖經分離純化后得到的多糖含量曲線如圖1。

    圖1 不同溫度下多糖含量曲線Fig.1 Content of exopolysaccharides at different fermented temperature

    由圖1可知,在酸乳發(fā)酵溫度不同的條件下,37℃發(fā)酵酸乳多糖含量最高,達到461.4mg/L;40℃發(fā)酵酸乳多糖含量次之,為345mg/L;43℃發(fā)酵酸乳多糖含量最低,為247.6mg/L。Saija N[16]等指出胞外多糖產量與產糖菌株生長環(huán)境pH、溫度及蛋白含量組分有關。由于SephacrylS-300凝膠柱層析是根據(jù)分子篩效應對多糖進行等級分離純化的,所以,從圖1可以看出,不同溫度下的多糖,不僅含量不一樣(峰的高度),而且分子量分布也有很大不同(洗脫體積的差異),本實驗中大分子的多糖含量較高,小分子的多糖含量相對較低。而對多糖而言,分子量越大,其產生的粘度就越大。由此可以推測,在本實驗測定范圍內,低溫(37℃)發(fā)酵酸乳產的多糖分子量大,且其粘度高;而高溫(43℃)的多糖分子量相對較小,其粘度也相對較低。魏淑珍[17]等對一株嗜熱鏈球菌產胞外多糖的工藝進行了優(yōu)化,經過不同培養(yǎng)溫度的MRS培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)后得出,39℃為其最適發(fā)酵溫度,多糖產量為844mg/mL。不同菌種發(fā)酵培養(yǎng)產胞外多糖的含量也不盡相同[18],造成這一現(xiàn)象的原因可能主要是因為培養(yǎng)溫度的不同以及菌株產胞外多糖種類之間存在的差異,從而使其胞外多糖合成含量不同。

    2.2 添加不同來源EPS酸乳的黏度和剪切應力

    添加不同來源EPS酸乳的黏度和剪切應力隨時間變化的測定結果如圖2、圖3。

    利用流變儀分別測定含內源性EPS、外源性EPS酸乳的黏度,結果表明:酸乳黏度隨轉速的變化趨勢相同(圖2),酸乳黏度隨轉速的上升,先急速上升,有一個極大值,然后又下降,最終趨于平緩;在降速測定時,相同轉速條件下,測得結果要比升速測定的結果小,說明有剪切稀釋現(xiàn)象。但從實驗結果可以很明顯地看出,含內源性EPS酸乳的黏度要遠高于外加內源性EPS酸乳的粘度。在胞外多糖與酪蛋白存在相斥作用的情況下,隨著乳酸菌胞外多糖含量的增加,多糖所形成的網(wǎng)孔會越來越小,此時形成的酪蛋白膠凝顆粒也會變得越來越小,因而會使其表觀黏度降低[10]。

    由圖3可以看出,添加不同來源EPS酸乳的剪切應力都形成了觸變環(huán),說明它們都是觸變體系。觸變環(huán)的面積反映了觸變性的大小。同時,從圖3可以明顯看出內源性EPS發(fā)酵酸乳的觸變環(huán)面積較外源性EPS酸乳的大,說明含有內源性EPS的酸乳經外力作用后,其應力變化較外源性EPS酸乳的大,外力撤出后,此體系回復到未經外力作用的體系狀態(tài)所需的時間也更長。這與趙正濤[10]、Janaina[19]等的報道結果趨勢類似,但較本實驗中剪切應力值小,這可能主要是因為增稠劑的種類不同及其添加量影響酸乳的黏度及剪切應力。

    圖2 添加不同來源EPS酸乳的黏度Fig.2 Viscosity of yogurt with different addition of exopolysaccharides

    圖3 不同來源EPS的酸乳樣品在變速剪切下的剪切應力的變化Fig.3 Variable speed controlled shearing against shearing stress of yogurt with exopolysaccharides from different sources

    2.3 EPS不同添加方式下酸乳表觀黏度隨時間變化

    圖4 不同添加方式下酸乳樣品表觀黏度隨時間變化Fig.4 The apparent viscosity of yogurt with exopolysaccharides from different sources changes with time

    添加不同來源EPS酸乳的表觀粘度隨時間變化如圖4。

    由圖4可以看出,在相同發(fā)酵溫度、相同菌種接種量、相同終點發(fā)酵酸度的酸乳樣品,添加不同來源EPS,經在恒溫、恒速的剪切作用下,其表觀黏度都逐漸減小,并且較好地遵循對數(shù)曲線方程。內源性EPS對其線性回歸得方程為y內=-69.7ln(x)+350.8,其相關系數(shù)為0.9527;外源性EPS對其線性回歸得方程為y外=-128.9ln(x)+633.75,其相關系數(shù)為0.9015。其中,內源性EPS酸乳的表觀黏度要明顯高于外源性EPS酸乳的表觀黏度,但隨著剪切時間的推移,二者基本持平。這可能主要是因為在內源的乳酸菌EPS漸進產生和逐步形成“網(wǎng)絡”的干擾下,酪蛋白絮凝形成的立體網(wǎng)狀結構才能連續(xù)而且細密。

    我們認為外源的EPS會導致形成的酸乳凝膠連續(xù)性較差,酪蛋白在具有強大的空間位壘和排斥作用的EPS網(wǎng)絡提前形成的條件下,其絮凝在構建立體網(wǎng)狀結構時,只能形成細碎、不連續(xù)的結構,嚴重干擾了酸乳立體網(wǎng)狀結構的形成[20],從而使其黏度下降。Girard M[3]等在研究五種胞外多糖與牛奶蛋白的相互作用時,指出在pH5.4和6.1時,胞外多糖含量的增加,酪蛋白受到的影響較小,而對乳清蛋白影響較大,乳清蛋白跟乳酸菌胞外多糖黏附于一起。因而可以推斷,隨著酸乳凝膠的形成,pH的降低,酪蛋白逐漸達到其等電點,發(fā)生變性,使其黏度逐漸變小,而pH的變化對乳清蛋白的影響較小。

    2.4 EPS不同添加方式酸乳的STS和WHC

    不同來源EPS制作的酸乳的STS值與WHC值如圖5。

    圖5 EPS不同添加方式酸乳的STS和WHCFig.5 STS and WHC of yogurt addition with different exopolysaccharides

    酸乳STS是酸乳凝膠對各種乳成分,尤其是水分的結合能力,這種結合力包括結合水凝膠立體網(wǎng)絡中自由的結合能力;酸乳WHC是指一定量的酸乳在一定的溫度、離心力、時間的作用下,酸乳凝膠對水分的結合能力。

    圖5顯示,內源性EPS酸乳的WHC較外源性EPS酸乳的高出26%,STS較外源性EPS酸乳低46%。這說明內源性EPS的酸乳在規(guī)定的時間內失去的乳清最少,體系的大分子結合水的含量最高,穩(wěn)定性最好,而外源性EPS酸乳的STS值大,WHC值相對較小,說明其乳清析出最多,穩(wěn)定性也差。即直接添加粘性保加利亞菌株發(fā)酵復原脫脂乳制成的EPS,酸乳的穩(wěn)定性更好。

    綜上所述,在溫度對酸乳中乳酸菌胞外多糖影響作用的機制研究方面,本研究發(fā)現(xiàn):不同發(fā)酵溫度酸乳產胞外多糖含量不同,低溫更利于乳酸菌胞外多糖的形成。由于多糖分子通過靜電作用和自身形成的空間位壘作用影響酸乳網(wǎng)狀結構的形成,從而降低酪蛋白立體網(wǎng)狀結構的牢固程度。當高溫發(fā)酵酸乳時,其乳酸菌胞外多糖含量較低時,形成的網(wǎng)眼較大,酪蛋白凝集體過大,導致酸乳乳清析出嚴重。隨著酸乳發(fā)酵溫度的降低,其乳酸菌胞外多糖含量增加,多糖分子不僅本身吸收自由水分子的數(shù)量增加,而且本身產生的空間位壘效應不斷增強,導致酪蛋白凝集體變得細小,進一步減少了乳清析出,從而表現(xiàn)為酸乳的表觀黏度和剪切應力下降。酸乳產生的內源性胞外多糖隨發(fā)酵時間的延長而增多,其體系中的分子相互作用是逐步緩慢進行的。但外源性胞外多糖酸乳體系的多糖含量一定,在發(fā)酵過程中多糖含量慢慢降低。由于一開始多糖含量較高,使其與原料乳中蛋白等充分作用。但隨著發(fā)酵時間的延長,酸乳體系中多糖含量減少,使多糖分子與蛋白之間的相互作用減弱。這表現(xiàn)在產品特性上,內源性EPS酸乳的乳清析出較少,穩(wěn)定性高。

    3 結論

    3.1 酸乳乳酸菌胞外多糖產量隨溫度的變化而不同,37℃發(fā)酵酸乳多糖含量遠高于40、43℃發(fā)酵酸乳,達到最高值,多糖含量為461.4mg/mL,43℃發(fā)酵酸乳多糖含量最低,為247.6mg/mL。說明在本實驗溫度測定范圍內,低溫有利于乳酸菌胞外多糖的形成。

    3.2 酸乳產生的內源性胞外多糖表現(xiàn)在產品特性上,其表觀黏度及剪切應力隨時間的變化都明顯高于添加外源性胞外多糖的酸乳,且都較好地遵循對數(shù)曲線方程,表明內源性EPS制成的酸乳其粘彈性更好。

    3.3 內源性EPS酸乳的WHC要高于外源性EPS酸乳的,即表明直接添加粘性保加利亞菌株發(fā)酵復原脫脂乳制成的EPS,酸乳的乳清析出較少,穩(wěn)定性更好。

    [1]Haque A,Richardson RK,Morris ER.Effect of fermentation temperature on the rheology of set and stirred yogurt[J].Food Hydrocolloids,2001,15:593-602.

    [2]Corredig M,Sharafbafi N,Kristo E.Polysaccharide-protein interactions in dairy matrices,control and design of structures[J]. Food Hydrocolloids,2011,25(8):1833-1841.

    [3]Girard M,Schafferlequart C.Attractive interactions between selected anionic exopolysaccharides and milk proteins[J].Food Hydrocolloids,2008,22(8):1425-1434.

    [4]Ayala-Hernández I,Hassan AN,Goff HD,et al.Effect of protein supplementation on the rheological characteristics of milk permeates fermented with exopolysaccharide-producing Lactococcus lactis subsp.cremoris[J].Food Hydrocolloids,2009, 23(5):1299-1304.

    [5]Ayala-Hernández I,Hassan A,Goff HD,et al.Production,isolation and characterization of exopolysaccharides produced by Lactococcus lactis subsp.cremoris JFR1 and their interaction with milk proteins:Effect of pH and media composition[J]. International Dairy Journal,2008,18(12):1109-1118.

    [6]孫健,陳靜,翁心剛.酸奶的儲存溫度對產品品質的影響[J].食品工業(yè)科技,2010,31(12):140-141.

    [7]Lin TY,Chien MFC.Exopolysaccharides production as affected by lactic acid bacteria and fermentation time[J].Food Chemistry,2007,100(4):1419-1423.

    [8]馬艷,陳歷俊,王昌祿,等.高產胞外多糖嗜熱鏈球菌混菌培養(yǎng)特性研究[J].中國乳品工業(yè),2011,39(1):15-18.

    [9]李全陽.酸乳質量及其胞外多糖的研究[D].無錫:江南大學,2004.

    [10]趙正濤,李全陽,衛(wèi)曉英,等.黃原膠對酸乳凝膠特性的影響及其作用機理探討[J].食品工業(yè)科技,2009,30(5):154-157.

    [11]衛(wèi)曉英,李全陽,趙紅玲,等.海藻酸丙二醇酯-PGA-對凝固型酸乳結構的影響[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2009,35(2):180-183.

    [12]趙正濤,王秀菊,安鑫,等.酪蛋白和胞外多糖作用機理研究進展[J].乳業(yè)科學與技術,2009(5):246-248.

    [13]李全陽,夏文水.酸乳中乳酸菌所產胞外多糖特性的初步研究[J].食品科學,2004,25(2):80-84.

    [14]Hassan AN,F(xiàn) FJ,A SK.Textural properties of yogurt made with encapsulated no ropy lactic cultures[J].Journal of Dairy Science,1996,79:2098-2103.

    [15]衛(wèi)曉英,李全陽,趙正濤,等.低溫刺激對凝固型酸乳質構的影響[J].中國乳品工業(yè),2009,37(7):16-19.

    [16]Saija N,Welman AD,Bennett RJ.Development of a dairybased exopolysaccharide bioingredient[J].International Dairy Journal,2010,20(9):603-608.

    [17]魏淑珍,孫金旭,朱會霞,等.分離hs-3乳酸菌胞外多糖工藝優(yōu)化研究[J].食品工業(yè)科技,2006(2):56-58.

    [18]羅玲泉,劉成國,黃永鋒.乳酸菌胞外多糖及其對酸乳品質的影響[J].食品工業(yè)科技,2007,28(6):233-236.

    [19]Janaina D,Schwinden PE,Carlos CPJ.Rheological and physico-chemical characterization of prebiotic microfiltered fermented milk[J].Journal of Food Engineering,2010,99(2):128-135.

    [20]李全陽,夏文水,祝麗香,等.一種乳酸菌多糖對酸乳凝膠的影響機理[J].高等學?;瘜W學報,2007,28(5):868-871.

    Effect mechanism of fermentation temperature on the characteristics of bacteria exopolysaccharides in yogurt

    YANG Tong-xiang,WANG Fang,LI Quan-yang*
    (College of Light Industry and Food Engineering,Guangxi University,Nanning 530004,China)

    The changes of extracellular polysaccharides content at the different fermentation temperature of yoghurt and the effects of different sources of extracellular polysaccharides on the rheology properties of yogurt were studied.The result showed:the content of exopolysaccharides was highest(247.6mg/mL)in yogurt fermented at 37℃,whereas,it was the lowest,only 247.6mg/mL,at 43℃.The apparent viscosity and shear stress of samples changing against time were obviously(P<0.05)higher than that of adding exogenous exopolysaccharide.The regression curves of apparent viscosity against shear time were found to conform to a logarithmic function,y=kLn(x)+b.In addition,water holding capacity(WHC)of yogurt with endogenous exopolysaccharide was 26%higher than that of adding exogenous exopolysaccharide.Susceptibility to syneresis(STS)of yogurt with endogenous exopolysaccharide was 46%lower than adding exogenous exopolysaccharide. It showed temperature was favorable for lactic acid bacteria exopolysaccharides formation,and the yoghurt with endogenous extracellular polysaccharide showed a higher viscosity and water holding capacity.

    yogurt;fermentation temperature;exopolysaccharide;rheological characteristics

    TS252.1

    A

    1002-0306(2012)09-0058-04

    2011-08-02 *通訊聯(lián)系人

    楊同香(1983-),女,博士研究生,研究方向:生物大分子與功能性食品。

    國家自然科學基金項目(31071576);廣西大學人才資助項目(XZL090325)。

    猜你喜歡
    胞外外源性酸乳
    硝化顆粒污泥胞外聚合物及信號分子功能分析
    生物膜胞外聚合物研究進展
    外源性防御肽(佰潤)對胸腔鏡術后氣道黏膜修復的影響
    麥冬中外源性有害物質的分析
    中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:56
    水華期間藻類分層胞外聚合物與重金屬的相互作用機制研究
    酪蛋白磷酸肽-鈣絡合物對酸乳貯藏特性的影響
    中國釀造(2016年12期)2016-03-01 03:08:23
    外源性表達VEGF165b對人膀胱癌T24細胞侵襲力的影響
    嗜酸乳桿菌NX2-6凍干發(fā)酵劑的研究
    嗜酸乳桿菌細菌素Lactobacillin XH2分離純化研究
    嗜酸乳桿菌同化吸附降膽固醇作用機理研究
    九九热线精品视视频播放| 麻豆国产av国片精品| 精品不卡国产一区二区三区| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 99久久精品国产国产毛片| 午夜a级毛片| 成人特级黄色片久久久久久久| 99热这里只有是精品在线观看| 嫩草影院新地址| eeuss影院久久| 日韩在线高清观看一区二区三区| 欧美极品一区二区三区四区| 91久久精品国产一区二区成人| 在线观看av片永久免费下载| 晚上一个人看的免费电影| 天堂√8在线中文| 国产黄片美女视频| av黄色大香蕉| 少妇人妻精品综合一区二区 | 内地一区二区视频在线| 午夜老司机福利剧场| 成人漫画全彩无遮挡| 一进一出好大好爽视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 久久久久久久午夜电影| av国产免费在线观看| 看十八女毛片水多多多| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲av不卡在线观看| 夜夜爽天天搞| 久久久久久久久大av| 亚洲专区国产一区二区| 久久久精品大字幕| 一本一本综合久久| 综合色av麻豆| 五月伊人婷婷丁香| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲精品456在线播放app| av视频在线观看入口| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| av在线蜜桃| 中文字幕av在线有码专区| 69av精品久久久久久| 神马国产精品三级电影在线观看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 成人午夜高清在线视频| 亚洲精品色激情综合| 丰满的人妻完整版| 婷婷色综合大香蕉| 一进一出抽搐gif免费好疼| 免费av不卡在线播放| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 在线国产一区二区在线| 国产精品久久久久久久久免| 国产人妻一区二区三区在| 狠狠狠狠99中文字幕| 日韩精品有码人妻一区| av在线蜜桃| 国产精品乱码一区二三区的特点| 欧美国产日韩亚洲一区| 又爽又黄a免费视频| 欧美精品国产亚洲| 国产成人精品久久久久久| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 国产一区二区在线av高清观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 欧美一级a爱片免费观看看| 老司机午夜福利在线观看视频| 久久久国产成人精品二区| 久99久视频精品免费| 99在线视频只有这里精品首页| 99久久精品国产国产毛片| 久久久色成人| 搡老妇女老女人老熟妇| 久久人人爽人人爽人人片va| eeuss影院久久| www日本黄色视频网| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产熟女欧美一区二区| 一个人看视频在线观看www免费| 人人妻人人看人人澡| 亚洲国产精品成人久久小说 | 日日摸夜夜添夜夜添小说| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 欧美不卡视频在线免费观看| 在线国产一区二区在线| 亚洲性久久影院| 国产在线男女| 麻豆一二三区av精品| 亚洲av成人精品一区久久| 看片在线看免费视频| 国产精品永久免费网站| 夜夜夜夜夜久久久久| 麻豆国产av国片精品| 高清毛片免费观看视频网站| 俄罗斯特黄特色一大片| 99九九线精品视频在线观看视频| 中国国产av一级| 日韩欧美精品v在线| 欧美三级亚洲精品| 网址你懂的国产日韩在线| 真人做人爱边吃奶动态| 中出人妻视频一区二区| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 三级国产精品欧美在线观看| 久久久久久久久久成人| 热99re8久久精品国产| 中国国产av一级| 久久久成人免费电影| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 最新在线观看一区二区三区| 丰满乱子伦码专区| 亚洲成人av在线免费| 亚洲不卡免费看| 日本爱情动作片www.在线观看 | 我要看日韩黄色一级片| 久久久午夜欧美精品| 国产精品野战在线观看| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲国产欧美人成| 国产精品一区二区性色av| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 免费在线观看成人毛片| 国产私拍福利视频在线观看| 婷婷亚洲欧美| av专区在线播放| 午夜激情福利司机影院| 日韩成人av中文字幕在线观看 | 99热全是精品| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 久久久色成人| 亚洲av熟女| 日韩欧美免费精品| 色播亚洲综合网| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲成人久久爱视频| 一进一出抽搐动态| 成年女人毛片免费观看观看9| 日本在线视频免费播放| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲精品456在线播放app| 91精品国产九色| 亚洲国产色片| 国产精品嫩草影院av在线观看| 嫩草影院入口| 欧美一区二区国产精品久久精品| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 精品一区二区三区av网在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲第一电影网av| 国产在线精品亚洲第一网站| 欧美潮喷喷水| 国产探花极品一区二区| 白带黄色成豆腐渣| 日韩av不卡免费在线播放| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 日日啪夜夜撸| av国产免费在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9| а√天堂www在线а√下载| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 少妇熟女欧美另类| 秋霞在线观看毛片| 午夜福利在线观看吧| 性插视频无遮挡在线免费观看| 久久久久久久久大av| 国产 一区精品| 3wmmmm亚洲av在线观看| 成人av一区二区三区在线看| 极品教师在线视频| 国产精品野战在线观看| 国模一区二区三区四区视频| 久久精品综合一区二区三区| 国产精品爽爽va在线观看网站| 深夜精品福利| 亚洲熟妇熟女久久| 国产精品精品国产色婷婷| 一夜夜www| 亚洲av免费高清在线观看| 国产视频内射| 国产乱人偷精品视频| 国产伦精品一区二区三区四那| 搞女人的毛片| 久久热精品热| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 一a级毛片在线观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产亚洲91精品色在线| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 岛国在线免费视频观看| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产麻豆成人av免费视频| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲欧美成人精品一区二区| 22中文网久久字幕| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲国产色片| 99热这里只有是精品50| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产av在哪里看| 精品久久久久久久久av| 日韩高清综合在线| 国产av一区在线观看免费| 国产黄片美女视频| 久久精品91蜜桃| 亚洲真实伦在线观看| 我的老师免费观看完整版| 日韩欧美精品v在线| 99国产极品粉嫩在线观看| 天堂动漫精品| 天美传媒精品一区二区| 在线免费十八禁| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 成年av动漫网址| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲精品国产成人久久av| 日本免费a在线| 69av精品久久久久久| 好男人在线观看高清免费视频| 久久精品国产亚洲网站| 国产伦精品一区二区三区四那| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 久久韩国三级中文字幕| 国产片特级美女逼逼视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 日韩精品青青久久久久久| 欧美精品国产亚洲| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产麻豆成人av免费视频| 中文字幕av在线有码专区| 国产高清视频在线播放一区| 久久精品国产自在天天线| 国产高清有码在线观看视频| 桃色一区二区三区在线观看| 特级一级黄色大片| 最好的美女福利视频网| 国产精品精品国产色婷婷| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产精品一区二区免费欧美| 国产探花极品一区二区| av国产免费在线观看| 九色成人免费人妻av| 欧美成人一区二区免费高清观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 国内精品一区二区在线观看| 国产 一区精品| 国产精品三级大全| 中国美女看黄片| 国产69精品久久久久777片| 男女那种视频在线观看| 99久久九九国产精品国产免费| 日日啪夜夜撸| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 日本精品一区二区三区蜜桃| 天美传媒精品一区二区| 亚洲av免费高清在线观看| 成年av动漫网址| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 嫩草影视91久久| 亚洲av免费在线观看| 免费搜索国产男女视频| 午夜爱爱视频在线播放| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 亚洲欧美日韩东京热| 不卡一级毛片| 少妇丰满av| 久久精品综合一区二区三区| 一边摸一边抽搐一进一小说| 韩国av在线不卡| 免费av观看视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 深夜a级毛片| 免费观看人在逋| 熟女人妻精品中文字幕| 青春草视频在线免费观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 91久久精品国产一区二区三区| 麻豆国产av国片精品| 日韩大尺度精品在线看网址| av.在线天堂| 亚洲综合色惰| 国产精品久久视频播放| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产探花极品一区二区| 男人舔奶头视频| 哪里可以看免费的av片| 久久午夜亚洲精品久久| 精品一区二区三区av网在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 一区福利在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 在线看三级毛片| a级一级毛片免费在线观看| 精品不卡国产一区二区三区| 一进一出好大好爽视频| 日本a在线网址| 亚洲国产精品成人久久小说 | 人妻久久中文字幕网| 天天一区二区日本电影三级| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 日本爱情动作片www.在线观看 | 国产午夜福利久久久久久| АⅤ资源中文在线天堂| 国产成人影院久久av| 欧美中文日本在线观看视频| 不卡视频在线观看欧美| 午夜福利18| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 亚洲自拍偷在线| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲在线观看片| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 男女做爰动态图高潮gif福利片| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 亚洲欧美日韩高清专用| 午夜久久久久精精品| 国语自产精品视频在线第100页| av国产免费在线观看| 色综合站精品国产| 一本久久中文字幕| 欧美国产日韩亚洲一区| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 精品国产三级普通话版| 久久午夜福利片| 天堂影院成人在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 色综合站精品国产| 欧美成人精品欧美一级黄| 日韩精品中文字幕看吧| 午夜a级毛片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 极品教师在线视频| 亚洲国产精品合色在线| 美女大奶头视频| 久久6这里有精品| 久久草成人影院| 亚洲欧美日韩东京热| 国产不卡一卡二| 卡戴珊不雅视频在线播放| 又爽又黄a免费视频| 一个人看的www免费观看视频| 丰满的人妻完整版| videossex国产| 日韩一区二区视频免费看| 国产精品福利在线免费观看| 嫩草影院入口| 高清毛片免费看| 看十八女毛片水多多多| 91麻豆精品激情在线观看国产| 久久久久九九精品影院| 真实男女啪啪啪动态图| 全区人妻精品视频| 国产精品三级大全| 国产综合懂色| 国产av在哪里看| 一区二区三区免费毛片| 免费av观看视频| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲av一区综合| 中出人妻视频一区二区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产 一区精品| 亚洲av熟女| 国产 一区 欧美 日韩| 日韩精品青青久久久久久| 嫩草影院精品99| 国产单亲对白刺激| 免费看光身美女| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产精品久久电影中文字幕| 在线观看66精品国产| 99热只有精品国产| 亚洲国产色片| a级一级毛片免费在线观看| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 成人漫画全彩无遮挡| 国产v大片淫在线免费观看| 日韩精品中文字幕看吧| 国产成年人精品一区二区| 三级毛片av免费| 欧美不卡视频在线免费观看| 美女黄网站色视频| 在线看三级毛片| 免费av不卡在线播放| 精品久久久久久久久av| 免费看日本二区| 女同久久另类99精品国产91| 免费电影在线观看免费观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 一个人看的www免费观看视频| 深夜精品福利| 午夜激情福利司机影院| 亚洲国产精品合色在线| 99在线人妻在线中文字幕| 国产成人aa在线观看| 一个人看的www免费观看视频| 欧美精品国产亚洲| 色视频www国产| 在线a可以看的网站| 色综合站精品国产| 人妻久久中文字幕网| 永久网站在线| 中国国产av一级| 亚洲美女搞黄在线观看 | 久久中文看片网| 午夜激情福利司机影院| 亚洲电影在线观看av| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 乱码一卡2卡4卡精品| 无遮挡黄片免费观看| 99久久精品国产国产毛片| 97超碰精品成人国产| 深夜精品福利| 亚洲久久久久久中文字幕| 日韩一本色道免费dvd| 九九热线精品视视频播放| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲一区二区三区色噜噜| 日韩强制内射视频| 美女高潮的动态| 国产精品亚洲一级av第二区| 日韩强制内射视频| 亚洲不卡免费看| 日产精品乱码卡一卡2卡三| av在线播放精品| 精品久久久久久久久久免费视频| 2021天堂中文幕一二区在线观| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 成人漫画全彩无遮挡| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 99热这里只有是精品在线观看| 女同久久另类99精品国产91| or卡值多少钱| 亚洲第一电影网av| 亚洲自拍偷在线| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国内精品宾馆在线| 午夜福利在线观看吧| 欧美一级a爱片免费观看看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 精品久久久久久久末码| 国产伦精品一区二区三区四那| avwww免费| 久99久视频精品免费| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 变态另类丝袜制服| 色尼玛亚洲综合影院| 搡老岳熟女国产| 久久精品夜色国产| 三级国产精品欧美在线观看| 六月丁香七月| av在线亚洲专区| 国产精品人妻久久久影院| 国产单亲对白刺激| 欧美一区二区精品小视频在线| 日韩成人av中文字幕在线观看 | 成人av一区二区三区在线看| 亚洲av熟女| 日韩一区二区视频免费看| 99热网站在线观看| 色av中文字幕| 神马国产精品三级电影在线观看| 亚洲五月天丁香| 日本熟妇午夜| 国产黄a三级三级三级人| 久久久a久久爽久久v久久| ponron亚洲| 欧美成人一区二区免费高清观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 天堂√8在线中文| 亚洲久久久久久中文字幕| 最好的美女福利视频网| 国产亚洲av嫩草精品影院| 欧美日本视频| 国产亚洲91精品色在线| 国产91av在线免费观看| 又粗又爽又猛毛片免费看| 毛片一级片免费看久久久久| 18+在线观看网站| 国产男人的电影天堂91| 亚洲第一电影网av| 一区福利在线观看| 国产69精品久久久久777片| 男人舔奶头视频| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲性久久影院| 久久久精品欧美日韩精品| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产精品无大码| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲成人av在线免费| 午夜亚洲福利在线播放| 99热精品在线国产| 美女黄网站色视频| 级片在线观看| 一进一出好大好爽视频| 国产在视频线在精品| 91麻豆精品激情在线观看国产| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲精品成人久久久久久| 99热这里只有是精品在线观看| 精品人妻偷拍中文字幕| 欧美色视频一区免费| 三级国产精品欧美在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 精品不卡国产一区二区三区| 国产成人a∨麻豆精品| 日韩国内少妇激情av| 久久精品影院6| 日韩欧美国产在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 一级黄片播放器| 亚洲国产高清在线一区二区三| 一区二区三区四区激情视频 | 国产亚洲欧美98| 成人毛片a级毛片在线播放| 午夜福利在线观看吧| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 综合色av麻豆| 黄色欧美视频在线观看| 99热只有精品国产| 国产久久久一区二区三区| 亚洲国产精品sss在线观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 12—13女人毛片做爰片一| 久久久久国内视频| 成年版毛片免费区| 在线观看美女被高潮喷水网站| 免费观看精品视频网站| 国产精品一及| 亚洲不卡免费看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 特大巨黑吊av在线直播| 色在线成人网| 51国产日韩欧美| 国产精品一区二区性色av| 亚洲欧美清纯卡通| 欧美最新免费一区二区三区| 日日干狠狠操夜夜爽| 伦精品一区二区三区| 久久久精品欧美日韩精品| 国产欧美日韩精品一区二区| 十八禁网站免费在线| 亚洲在线观看片| 在线免费观看的www视频| 直男gayav资源| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 干丝袜人妻中文字幕| 日日啪夜夜撸| 精品无人区乱码1区二区| 精品人妻偷拍中文字幕| 日韩 亚洲 欧美在线| 人妻夜夜爽99麻豆av| 午夜老司机福利剧场| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 丝袜美腿在线中文| 国内精品一区二区在线观看| 一个人免费在线观看电影| 欧美+日韩+精品| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲无线观看免费| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 午夜视频国产福利| 久久久久久久午夜电影| 中文字幕av在线有码专区| 97在线视频观看| 99久久精品一区二区三区| 97在线视频观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产精品电影一区二区三区| 麻豆国产97在线/欧美| 99久久精品一区二区三区| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产一区二区在线av高清观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 五月玫瑰六月丁香| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产欧美日韩精品亚洲av| 99热精品在线国产| 精品久久久久久久久av| 麻豆一二三区av精品| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲人成网站在线观看播放| 日韩强制内射视频| 国产精品不卡视频一区二区| 免费搜索国产男女视频| 国产免费一级a男人的天堂| 成年免费大片在线观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产精品久久久久久久久免| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲图色成人|