雞大腸桿菌的簡易藥敏試驗(yàn)

王運(yùn)成

（遼寧省凌源市東城動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，遼寧 凌源 122500）

在雞群患大腸桿菌病時(shí)，為及時(shí)有效控制病情，避免盲目濫用抗生素，應(yīng)通過藥敏試驗(yàn)選擇敏感藥物進(jìn)行治療。

1 試驗(yàn)原理

將不同的復(fù)方藥品按治療劑量放大相同倍數(shù)配制藥液，制作藥敏片。藥敏片上含有的抗菌藥物向瓊脂培養(yǎng)基擴(kuò)散，通過對(duì)細(xì)菌的抑殺作用而影響細(xì)菌生長繁殖，在藥敏片周圍形成抑菌圈，根據(jù)抑菌圈的大小確定藥物抗菌能力強(qiáng)弱。

2 試驗(yàn)設(shè)備、藥品

高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、干燥滅菌箱、普通天平、酒精燈、手術(shù)剪、鑷子、普通營養(yǎng)瓊脂、玻璃棒、定性濾紙、打孔器、蒸餾水、藥匙、尺子、滅菌棉拭子、小玻璃瓶（如青霉素瓶，10個(gè)）、玻璃平皿（直徑90mm，10個(gè)）、燒杯等。

3 試驗(yàn)步驟

3.1 消毒準(zhǔn)備

將燒杯、玻璃平皿、玻璃棒、小玻璃瓶用干燥滅菌箱160℃滅菌2h，冷卻備用。用打孔器將定性濾紙打成圓形藥敏紙片若干份（直徑約6mm，100片/份），干燥滅菌箱滅菌備用。

3.2 平皿培養(yǎng)基制備

先向燒杯中加入100mL蒸餾水，再加入4.5g普通營養(yǎng)瓊脂，邊混合邊攪拌，使瓊脂全部溶化。然后將燒杯放入高壓蒸汽滅菌鍋，加熱至121℃20min。稍作冷卻后，緩慢解壓。然后，趁熱將瓊脂倒入平皿中，每個(gè)平皿約需20～25mL瓊脂液，瓊脂厚度約3～5mm，倒完蓋上平皿。冷卻后放入冰箱（2～8℃）備用，可保存 5～7d。

3.3 藥液濃度配比對(duì)照試驗(yàn)

將不同的復(fù)方制劑分別按治療劑量的不同倍量加入蒸餾水，制作藥敏片，經(jīng)過多次試驗(yàn)和臨床實(shí)踐，大多數(shù)藥品的藥敏片在50倍治療量濃度下抑菌圈較大，便于觀察和測量，抑菌效果明顯。我們將50倍量作為快速簡易藥敏試驗(yàn)的藥液濃度標(biāo)準(zhǔn)。

3.4 藥敏片制備

將常用大腸桿菌治療藥物分別取1g于燒杯中，加蒸餾水50倍量溶解，分別放入100片藥敏紙片，充分浸泡4h。然后用鑷子把藥敏紙片夾入玻璃平皿中，用牙簽將藥敏紙片擺平分開，不重疊。放入恒溫箱（37℃）24～48h烘干。烘干后，用鑷子將制好的藥敏片放入小玻璃瓶中，加蓋密封，粘上口缺紙，標(biāo)注藥品名稱，放入冰箱（2～8℃）保存?zhèn)溆?，有效期?個(gè)月。

3.5 采集病料

對(duì)病死雞進(jìn)行剖檢，發(fā)現(xiàn)有大腸桿菌病典型病變特征的病例，即可無菌采取肝、心、氣囊等處病料置于滅菌容器內(nèi)備用。

3.6 貼藥敏片

準(zhǔn)備好待試驗(yàn)的藥敏片，按順序排列，做好記錄。用滅菌棉拭子蘸取病料新鮮截面，均勻涂布于瓊脂平板表面。在平皿外壁做好起始標(biāo)記。用鑷子在酒精燈火焰上消毒后，夾取1號(hào)藥敏片貼在瓊脂平板的起始標(biāo)記處，按平按實(shí)。然后，鑷子消毒，依次夾取2號(hào)藥敏片，按逆時(shí)針順序貼在瓊脂平板上，直至全部。最后將平皿倒置，放入恒溫箱37℃培養(yǎng)12～24h。

3.7 結(jié)果判定

表1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

4 藥物選擇

4.1不光要考慮藥敏試驗(yàn)抑菌圈的大小，但還要考慮到藥物的吸收性、穩(wěn)定性等影響因素。

4.2 藥物的溶解性對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響不易溶解的藥物不能充分?jǐn)U散到培養(yǎng)基中，抑菌圈就可能比真實(shí)效果要小。如氟苯尼考、粘桿菌素等。

4.3 藥物的穩(wěn)定性對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響青霉素類、部分頭孢類等藥物不穩(wěn)定，在藥敏片制作、貯存、試驗(yàn)過程中，會(huì)受到各種因素影響，藥物效價(jià)降低，試驗(yàn)結(jié)果也會(huì)比真實(shí)值偏低。

4.4 培養(yǎng)基對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響瓊脂厚度和濃度越大，藥物的抑菌圈越小。

4.5 影響試驗(yàn)結(jié)果的因素還有藥敏紙片、pH值、涂菌數(shù)量等。

在做藥物選擇時(shí)，只有綜合分析到這些影響因素，才能找到最敏感的藥物。

5 總結(jié)

在實(shí)驗(yàn)中，是將藥敏紙片放入藥液中浸泡吸收，不做定量分析；藥敏試驗(yàn)液是用復(fù)方藥品的治療量濃度的增大濃度配制，抑菌圈相對(duì)較大。本快速簡易藥敏試驗(yàn)主要用于雞大腸桿菌病時(shí)敏感藥物的選擇，限于粗略檢測，適于技術(shù)設(shè)備薄弱的基層診療機(jī)構(gòu)。

[1]朱維正.消毒滅菌法[M].新編獸醫(yī)手冊，2000.

[2]張美喜，等[C].紙片法藥敏試驗(yàn)影響因素的正交試驗(yàn)研究.河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1990（25）：374.