菌根真菌促白花白及種子萌發(fā)影響研究

摘""要：白花白及為白及的變種，具有較高的觀賞和藥用價值，目前尚無其種子萌發(fā)和繁育的研究報道。本研究以白花白及種子作為試驗材料，開展室內種子萌發(fā)和盆栽驗證試驗，研究不同來源菌根真菌（MB-15、MB-18、MH1-E和YDLXB）對白花白及種子萌發(fā)和幼苗生長的影響。結果表明：不同菌根真菌對白花白及種子的促萌發(fā)效果存在差異，其中以來源于白及菌根的蠟殼菌屬真菌MB-18的促進作用最為顯著，其室內共生萌發(fā)種子萌發(fā)率和幼苗率較對照分別提高10.76%和20.55%，盆栽試驗中則分別提高了36.95%和355.78%。此外，直播條件下白花白及種子能夠萌發(fā)，但其幼苗的形成過程受到限制，而供試的菌根真菌（MB-15、MB-18、MH1-E和YDLXB）則可有效地促進幼苗的形成。本研究結果對白花白及的種質資源保護、種苗規(guī)模化繁育和可持續(xù)利用具有重要意義。

關鍵詞：白花白及；菌根真菌；種子萌發(fā)；盆栽試驗中圖分類號：S567.239""""""文獻標志碼：A

Effects"of"Mycorrhizal"Fungi"on"Seed"Germination"of"Bletilla"striata"var."Alba

PU"Yulin1，2，"HUANG"Weichang2，"HUANG"Qingjun1，"LI"Shanmin2，"REN"Qiaoning1，2，"ZENG"Xinhua2*

1."School"of"Ecological"Technology"and"Engineering，"Shanghai"Institute"of"Technology，"Shanghai"201418，"China;"2."Shanghai"Chenshan"Botanical"Garden"/"Eastern"China"Conservation"Centre"for"Wild"Endangered"Plant"Resources，"Shanghai"201602，"China

Abstract："Bletilla"striata"var."Alba"is"a"variant"of"B."striata"which"possesses"high"ornamental"and"medicinal"value."However，"there"have"been"no"reports"on"its"seed"germination"and"propagation"to"date."In"this"study，"using"the"seeds"of"B."Striata"var."Alba"as"the"experimental"material，"indoor"seed"germination"tests"and"pot"tests"were"carried"out"to"investigate"the"effects"of"mycorrhizal"fungi"from"different"sources"（MB-15，"MB-18，"MH1-E"and"YDLXB）"on"seed"germination"and"seedling"growth."The"results"demonstrated"that"various"mycorrhizal"fungi"had"different"effects"on"promoting"the"germination"of"B."striata"var."Alba"seeds."Among"them，"the"Sebacina"fungus"MB-18，"derived"from"the"roots"of"B."striata，"exhibited"an"extremely"significant"promotional"effect."Compared"with"the"control"treatment，"the"germination"rate"and"seedling"formation"rate"in"the"petri"dish"experiment"increased"by"10.76%"and"20.55%"respectively，"while"in"the"pot"validation"test"was"36.95%"and"355.78%，"respectively."Moreover，"when"sown"directly，"the"seeds"of"B."striata"var."Alba"could"germinate，"but"the"seedling"formation"process"was"hindered."However，"compatible"mycorrhizal"fungi"（MB-15，"MB-18，"MH1-E"and"YDLXB）"effectively"promoted"the"formation"of"seedlings."The"results"are"of"great"significance"for"the"germplasm"conservation，"large-scale"seedling"breeding"and"sustainable"utilization"of"B."striata"var."Alba.

Keywords："Bletilla"striata"var."Alba;"mycorrhizal"fungi;"seed"germination;"pot"test

DOI："10.3969/j.issn.1000-2561.2025.05.018

蘭科植物種子細小，無胚乳，自然條件下種子的成功萌發(fā)和早期原球莖階段均需要菌根真菌的定殖，對菌根真菌有著不同程度的依賴性[1]。菌根真菌可為蘭科植物種子萌發(fā)及幼苗生長提供所需的碳氮源以及礦物質等營養(yǎng)物質[2-3]。高匹配度的共生真菌對蘭科植物的種子萌發(fā)、幼苗建成、種群恢復以及野外回歸實踐等均發(fā)揮著重要作用[4]。徐錦堂等[5]研究發(fā)現(xiàn)，自然條件下天麻種子需與紫萁小菇（Mycena"osmundicola"Lange）GSF-8104等真菌拌種才能萌發(fā)形成原球莖，而原球莖及營養(yǎng)繁殖莖則必須與蜜環(huán)菌（Armillaria"mellea"Fr.）共生才能正常生長形成粗壯的新生麻。此外，紫萁小菇等真菌對白及種子萌發(fā)、形成原球莖的葉片、假根等分化具有顯著促進作用，且菌根化的幼苗移栽到野外比無菌組培苗具有更高的存活率和生長速率[6]。ZI等[7]研究發(fā)現(xiàn)，從兜唇石斛（Dendrobium"aphyllum）原球莖中分離得到的膠膜菌屬（Tulasnella"spp.）真菌能極顯著促進其種子萌發(fā)和幼苗形成，成苗率達45.2%，而同樣從原球莖中分離得到的木霉屬（Trichoderma"spp.）真菌則抑制其種子萌發(fā)。AGGARWAL等[8]利用真菌共生萌發(fā)技術，有效地培育出健壯的掌裂蘭（Dactylorhiza"hatagirea）幼苗，并將其成功地引入原生棲息地。共生萌發(fā)法被認為是保護蘭科資源的一種有效方式，甚至被應用于蘭科植物的繁育生產[9]。

白及（Bletilla"striata）為蘭科（Orchidaceae）白及屬（Bletilla）的多年生草本植物，為我國傳統(tǒng)的中藥材，具有止血、抗菌、消腫生肌和抗腫瘤等功效，臨床應用廣泛[10-11]。近年來由于市場需求量增大，野生資源匱乏，已被《中國高等植物紅色名錄》列為瀕危物種[12]。白花白及（Bletilla"striata"var."alba）為白及的變種，花呈白色，具有較高的觀賞和藥用價值，此外其生物量較普通白及大，極具市場開發(fā)潛力。本團隊前期研究發(fā)現(xiàn)，白花白及相比普通白及具有更高的藥用價值，其多糖、葡萄糖和甘露糖含量分別是普通白及的2.59、3.14、2.25倍[13]。目前，白及的繁育多以組培為主，該方法能保持白及的穩(wěn)定性并實現(xiàn)種苗快速繁育，但存在煉苗存活率和塊莖有效成分低等問題[14]。也有學者嘗試采用種子直播的方法進行規(guī)?；庇?，種子萌發(fā)率可達69.7%[15]，但存在后期生長緩慢、溫濕度管理要求高等問題。而通過篩選有效菌株與種子共生萌發(fā)的方法，不僅能提高種子萌發(fā)率，快速成苗，而且能抵御外界不良環(huán)境的傷害，有效解決上述問題。此外，白及種子中含有蛋白質、脂肪和碳水化合物等營養(yǎng)物質，對真菌的要求不嚴格[16]。徐玲玲等[14]利用鬼傘屬（Coprinus）、膠膜菌屬（Tulasnella）、臘殼菌屬（Sebacina）和無孢臘殼菌屬（Serendipita）菌株與白及種子進行共生萌發(fā)，發(fā)現(xiàn)臘殼菌菌株SL15-7和無孢臘殼菌菌株JST-3不僅能促進種子萌發(fā)和幼苗形成，而且對幼苗生根也有顯著效果。陳曉芳等[17]利用Epulorhiza"sp.和Sebacina"sp.菌株對黃花白及種子進行共生萌發(fā)，發(fā)現(xiàn)這2種菌均顯著促進黃花白及種子萌發(fā)，萌發(fā)率分別比對照提高8.61%和18.43%。目前對于白及屬種子共生萌發(fā)研究主要集中在白及和黃花白及上，且以室內共生萌發(fā)為主，但缺乏相關的驗證試驗，而對于營養(yǎng)價值更高的白花白及則未見報道，這不利于白花白及的資源保護、規(guī)?；庇涂沙掷m(xù)開發(fā)利用。

本研究通過開展菌根真菌與白花白及種子的共生萌發(fā)試驗，分析不同來源菌根真菌對種子萌發(fā)和幼苗生長的影響，篩選出對白花白及種子萌發(fā)和幼苗生長具有促進作用的菌根真菌，并通過盆栽試驗來驗證其促生效應，旨在為白花白及種苗的規(guī)?；庇峁┛衫玫木N資源，為促進白及產業(yè)化發(fā)展和種質資源保護提供技術支持。

1""材料與方法

1.1""材料

1.1.1""植物材料""于2023年9月在上海辰山植物園苗圃采集成熟且尚未開裂的白花白及蒴果作為種子萌發(fā)材料。

1.1.2""供試基質""（1）菌株活化培養(yǎng)基。馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）：200"g/L馬鈴薯，20"g/L葡萄糖，15"g/L瓊脂。

（2）菌液制備培養(yǎng)基。馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基（PDB）：200"g/L馬鈴薯，20"g/L葡萄糖。

（3）種子萌發(fā)共生培養(yǎng)基。燕麥瓊脂培養(yǎng)基（OMA）：2.5"g/L燕麥，10"g/L瓊脂。

（4）室內盆栽基質。滅菌后的草炭和珍珠巖混合基質（體積比為3∶1）。

1.1.3""真菌材料""選用2株分離自白及根組織的蠟殼菌屬菌株（MB-15、MB-18）、1株分離自蒙自蘭原球莖的蠟殼菌屬菌株（MH1-E）和1株植物廣譜內生菌印度梨孢菌菌株（YDLXB）。以Tulasnella"calospora（GU166419）為外類群，利用分離菌株的ITS序列與NCBI中獲得的近緣種序列構建最大似然法（maximum"likelihood，"ML）系統(tǒng)發(fā)育樹，利用MEGA"11.0軟件進行序列比對，通過FigTree"v"1.4.4軟件進行系統(tǒng)發(fā)育樹的編輯，設置bootstrap值為1000，系統(tǒng)發(fā)育分析結果如圖1所示。在共生萌發(fā)前，將菌株置于（25±2）℃黑暗條件下培養(yǎng)7～10"d，菌落邊緣生長旺盛的菌絲用于真菌接種。菌株情況如表1所示。

1.2""方法

1.2.1""種子萌發(fā)試驗""共設5個處理：未接種（CK），以及分別接種菌根真菌MB-15、MB-18、MH1-E和YDLXB，每個處理重復10次。超凈工作臺上選擇飽滿的白花白及蒴果，先用75%酒精消毒30"s，再用3.5%次氯酸鈉消毒10"min，后用無菌水沖洗3次。用無菌濾紙吸干蒴果表面水分，用鑷子和解剖刀將蒴果切開，將種子制成種子懸浮液。吸取種子懸浮液，每個培養(yǎng)皿撒播1"mL（約含100粒種子），將直徑為5"mm的真菌菌塊置于培養(yǎng)皿中部。置于12"h光照、12"h黑暗，光照強度為2000"lx，溫度為（25±2）℃的環(huán)境中培養(yǎng)，分別于15、35、115"d觀察，統(tǒng)計種子萌發(fā)情況。

1.2.2""室內盆栽試驗""將真菌接種于PDB培養(yǎng)基中，在恒溫振蕩搖床中27"℃、160"r/min條件下培養(yǎng)7"d。盆栽試驗在塑料盆（口徑12"cm、底徑8"cm、高8"cm）中進行，共設5個處理：未接種（CK），以及分別接種菌根真菌MB-15、MB-18、MH1-E和YDLXB，每盆裝入80"g基質，基質含水量為100%，在基質上方鋪一層孔徑為250目的尼龍網(wǎng)布。每盆播100粒左右種子，每個處理重復3次。在處理組每盆中加入10"mL真菌菌液，在對照組中接入10"mL無菌培養(yǎng)基提取液。置于12"h光照、12"h黑暗，光照強度為2000"lx，溫度為（25±2）℃的環(huán)境中培養(yǎng)，定期澆水，分別于25、50、105nbsp;d觀察、統(tǒng)計種子萌發(fā)情況，105"d時測定白花白及的株高、葉長、葉寬、葉數(shù)、球莖粗、根長、根粗、根數(shù)和鮮質量等指標。

1.2.3""真菌侵染情況觀察""在共生105"d，種子萌發(fā)形成根系后，取出根段，用雙面刀片切成薄片（約100"μm），切片置于光學顯微鏡下觀察，通過徒手切片觀察不同處理根系的真菌侵染情況。

1.2.4""真菌對種子萌發(fā)的有效性檢測""參照STEWART等[18]對種子萌發(fā)階段的分級標準，將種子萌發(fā)分為4個階段：種子未萌發(fā)階段、種子萌發(fā)（種胚膨大并產生根狀物）階段、原球莖形成和發(fā)育（種胚膨大突破種皮至出現(xiàn)原分生組織）階段及幼苗分化和發(fā)育階段（長出第1片葉及后續(xù)生長）階段（表2），分別計算各階段種子萌發(fā)于培養(yǎng)皿和盆栽試驗每個處理中分別選取5皿/3盆，觀察，統(tǒng)計皿/盆中的種子萌發(fā)數(shù)或幼苗數(shù)，計算萌發(fā)率、原球莖率、幼苗率。計算公式如下：種子萌發(fā)率=萌發(fā)種子數(shù)/播種種子總數(shù)×"100%；原球莖率=（原球莖數(shù)+幼苗數(shù)）/播種種子總數(shù)×100%；幼苗率=幼苗數(shù)/播種的種子總數(shù)×100%。

1.3""數(shù)據(jù)處理

采用Excel"2019軟件對試驗數(shù)據(jù)進行整理、統(tǒng)計，采用SPSS"26.0軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，利用鄧肯式新復極差法（Duncan’s"new"multiple-range"test）進行多重比較（Plt;0.05），采用Origin"2021軟件繪圖。

2""結果與分析

2.1""不同發(fā)育階段種子萌發(fā)形態(tài)

未萌發(fā)的白花白及種子細小，長144.14"μm，寬21.46"μm，呈兩頭稍尖中間鼓的棗核形，胚位于種皮中央，種皮半透明，此時處于0級萌發(fā)（圖2A）；將種子播種在OMA培養(yǎng)基上后，種胚及種皮開始吸水膨脹，3～7"d種胚膨大變綠，視為進入萌發(fā)的第1階段（圖2B、圖2C）；7～15"d時，種胚繼續(xù)膨脹并突破種皮，形成原球莖，到達萌發(fā)的第2階段（圖2D）；15"d后原球莖體積逐漸增大并發(fā)育形成第1片葉，長出細長絨毛狀的假根（圖2E），30"d后原球莖長出1～2片葉進入幼苗階段，此時處于萌發(fā)的第3階段（圖2F、圖2G）。

2.2""蘭科菌根真菌對白花白及種子萌發(fā)和幼苗生長的影響

2.2.1""種子萌發(fā)試驗""結果表明，不同處理的種子萌發(fā)情況存在顯著差異（圖3）。共生萌發(fā)第15天，5組處理的白花白及種子均萌發(fā)進入原球莖階段，各處理的萌發(fā)率與原球莖率存在一定差異。MB-18處理的萌發(fā)率和原球莖率分別為93.51%和90.57%，顯著高于CK，MB-15和YDLXB處理與CK之間無顯著差異，而MH1-E處理的萌發(fā)率顯著低于CK（圖3A）。第35天，各處理的白花白及種子萌發(fā)率存在較大差異。其中，MB-18

處理的種子萌發(fā)率（93.55%）顯著高于CK、MB-15和MH1-E處理；MB-18和YDLXB處理的原球莖率分別為93.17%和90.54%，顯著高于CK和MH1-E處理；此外，MB-18、MH1-E、YDLXB處理的種子已萌發(fā)形成幼苗，幼苗率分別為84.88%、75.87%和84.80%，而CK和MB-15處理的種子尚未形成幼苗（圖3B）。第115天，MB-18處理的萌發(fā)率、原球莖率和幼苗率分別為96.42%、95.51%和94.64%，均顯著高于CK，而MB-15、MH1-E和YDLXB處理的幼苗率與CK無顯著差異（圖3C）。第115天各處理的種子萌發(fā)生長情況見圖3D。

2.2.2""盆栽試驗""（1）蘭科菌根真菌對白花白及種子萌發(fā)率和成苗率的影響。室內盆栽試驗結果表明，菌液MB-15、MB-18、MH1-E、YDLXB對白花白及種子均表現(xiàn)出較好的促萌發(fā)效果，與CK均差異顯著（圖4）。其中，MB-18菌液在室內盆栽試驗中的促萌發(fā)效果最好，生長狀態(tài)明顯優(yōu)于CK（圖5）。共生萌發(fā)第25天，4組菌液處理的種子促萌發(fā)及成苗效果顯著，均萌發(fā)進入第3階段，此時CK的種子仍處于第2階段，未形成幼苗（圖4A）。第50天，MB-18的促萌發(fā)效果最為顯著，萌發(fā)率、原球莖率和幼苗率分別為89.50%、87.39%、77.97%，顯著高于CK（圖4B）。第105天，與CK相比，4組菌液處理的種子萌發(fā)率、原球莖率及幼苗率均有顯著提高，且種子以第3階段為主，而CK的大部分種子仍停留在第2階段（圖4C）。

（2）蘭科菌根真菌對白花白及幼苗生長指標的影響。4組菌液處理對白花白及幼苗地上和地下部分的生長均有促進作用，顯著提高了幼苗株高、葉長、葉寬、葉數(shù)、根長、根粗、根數(shù)及鮮質量（表3），除MB-15和MH1-E處理外，其余菌液處理均顯著增加白花白及的球莖粗和鮮質量，其中，MB-18處理的所有指標均顯著高于CK和其他接菌處理，促生效果最好。

2.3""不同處理白花白及根內真菌侵染定殖情況

選取盆栽試驗中不同處理的白花白及幼苗根段進行侵染觀測，CK的根段未見真菌菌絲的侵染（圖6A），而MB-15、MB-18、MH1-E、YDLXB菌液處理的根段能觀測到真菌菌絲的定殖（圖6B～圖6E），菌絲主要分布在根段的皮層薄壁細胞上，表明白花白及與處理的4種真菌建立了共生關系。

3""討論

自然條件下蘭科植物種子萌發(fā)率極低，種子萌發(fā)障礙給蘭科植物繁育和資源保護帶來巨大挑戰(zhàn)[19]。自然條件下幾乎所有蘭科植物種子均與真菌形成共生關系，依靠真菌侵染提供營養(yǎng)而萌發(fā)，但不同類型的菌根真菌對蘭科植物種子促萌發(fā)效應存在較大的差異[20-21]。不匹配的真菌可能會促進種子萌發(fā)，但不會支持其幼苗的后續(xù)生長發(fā)育[22]，而匹配度高的真菌則可迅速將無營養(yǎng)儲備的微小種子發(fā)育成幼苗[23]。本研究中的3株蠟殼菌屬菌株和1株梨形孢屬菌株對白花白及種子的促萌發(fā)效果存在較大差異，其中分離自白及菌根的蠟殼菌屬真菌MB-18和植物廣譜內生菌的梨形孢屬真菌YDLXB能極顯著促進種子萌發(fā)和幼苗形成，且以MB-18的促進作用最為顯著。其他學者的研究表明，蠟殼菌屬（SL15-7、QZPS-"G018）以及梨形孢屬（R6）真菌能夠有效地促進白及[14，"24]和黃花白及[17]的種子萌發(fā)和幼苗形成，且對幼苗生根、幼苗鮮質量和干質量增加均有顯著促進作用。蠟殼菌屬和梨形孢屬真菌同屬于蠟殼菌目真菌，可推斷蠟殼菌目真菌為促進白及屬種子萌發(fā)的有效真菌，且蠟殼菌屬真菌的促萌發(fā)效果要優(yōu)于梨形孢屬真菌。

蘭科植物與菌根真菌的共生關系受多種因素的影響，不同條件下菌根真菌的促萌發(fā)作用也存在較大差異。本研究的培養(yǎng)皿萌發(fā)試驗中，蠟殼菌屬真菌MB-15對白花白及種子萌發(fā)和幼苗生長無顯著促進作用，且真菌MH1-E抑制其種子萌發(fā)，而盆栽試驗中這2株真菌卻不同程度地促進種子萌發(fā)和幼苗建成。其他蘭科植物也有類似的情況，如鐵皮石斛（D."officinale）[25]、鳥巢蘭（Neottia"nidus-avis）[26]和綬草（Spiranthes"sinensis）[27]等蘭科植物種子的萌發(fā)受環(huán)境因素的影響，在自然條件下和實驗室條件下表現(xiàn)出不同的專一性。這是因為蘭科植物與菌根真菌的專一性關系受多種因素影響，如蘭科植物分類地位、營養(yǎng)和生態(tài)類型、地理分布、土壤養(yǎng)分有效性等[28-29]。厘清不同培養(yǎng)條件菌根真菌對蘭科植物種子萌發(fā)的影響，對蘭科植物的保育和栽培、瀕危蘭科植物種群資源的保護和恢復具有重要意義。

相比其他蘭科植物，白及屬植物與菌根真菌的專一性較弱。如珍稀陸生蘭（Caladenia"huegelli）專一地與Serendipita"vermifera共生[30]，金釵石斛（D."nobile）高度專一地與膠膜菌科（Tulas nellaceae）真菌共生[31]，Pterostylis"nutans和Sarcochilus"weinthalii僅與角擔菌屬（Cerato basidium）真菌共生[32-33]，而珊瑚蘭（Corallorhiza"triffda）專一地與革菌科（Telephoraceae）真菌共生[34]。本研究中，盆栽試驗的3株蠟殼菌屬菌株和1株梨形孢屬菌株均顯著地促進白花白及種子萌發(fā)和幼苗生長。此外，也有學者研究發(fā)現(xiàn)，鐮刀菌屬（Fusarium"oxysporum）菌株KB-3、絲衣霉屬（Byssochlamys"spectabilis）菌株1-N2和毛栓菌（Trametes"hirsuta）均能顯著縮短白及種子的萌發(fā)時間，并且提高其幼苗的芽長、假鱗莖干質量、假鱗莖直徑、鮮質量和株高等生長指標[35-37]。表明白及屬植物與菌根真菌專一性較弱，能與多種菌根真菌形成共生關系，這有利于白及對土壤中營養(yǎng)元素的吸收和對環(huán)境的適應，在一定程度上解釋了白及分布范圍較廣和適應性較強的原因。此外，白及種胚的薄壁細胞中儲存有蛋白質、脂肪和碳水化合物等營養(yǎng)成分，即使在無外源營養(yǎng)供給的情況下，其營養(yǎng)儲備也足以支持其種子實現(xiàn)初始萌發(fā)，這使得個別菌株與CK相比無顯著促進萌發(fā)效果。

基于蘭科植物天然的真菌共生特性，利用真菌共生技術對蘭科植物進行保育以及規(guī)?；庇翘m科植物研究的重要方向[38]。因此，尋找促進蘭科植物種子萌發(fā)的共生真菌，對瀕危蘭科植物的保護和繁育具有重要意義。據(jù)報道，分離自天麻（Gastrodia"elata）原球莖中的紫萁小菇真菌GSF-8104有效地推動了天麻人工栽培和保育工作，分離自鼓槌石斛（D."chrysotoxum）原球莖中的菌株GC-14和GC-15，以及來源于白旗兜蘭（Paphiopedilum"spicerianum）原球莖中的GYBQ01和GYBQ02菌株，成功實現(xiàn)了鼓槌石斛與白旗兜蘭的野外回歸[39-41]。本研究中的4株菌株均能與白花白及建立共生關系，在萌發(fā)幼苗根系中形成菌絲團，其中以白及菌根中分離的蠟殼菌屬真菌MB-18的促進作用最為顯著，在培養(yǎng)皿內培養(yǎng)115"d后種子萌發(fā)率、原球莖率、幼苗率比CK處理分別提高了10.76%、10.37%和20.55%；盆栽試驗中則分別提高了36.95%、157.18%和355.78%，均顯著促進種子萌發(fā)和幼苗建成。因此，蠟殼菌屬菌株MB-18可能是白花白及從種子萌發(fā)、幼苗生長到成年植株整個發(fā)育過程中均具有促進作用的“萬能”菌株，這對白花白及的規(guī)模化繁育和資源保護具有重要意義。蠟殼耳目（Sebacinales）真菌已被證實能夠支持多種瀕危蘭科植物的種子萌發(fā)和幼苗發(fā)育，如馬達加斯加中部高地特有地生蘭（Cynorkis"purpurea）、鐵皮石斛（D."officinale）和金釵石斛（D."nobile）等[42-43]。當這些親和真菌與種子或幼苗建立起共生關系后，它們能夠通過菌絲在細胞內的侵染、消解及再侵染的循環(huán)過程，將營養(yǎng)物質有效地提供給植物，從而為瀕危蘭科植物的種子萌發(fā)和植株生長提供必要的支持[44-45]。

4""結論

本研究比較了不同蘭科菌根真菌對白花白及種子的促萌發(fā)效果，研究發(fā)現(xiàn)白花白及種子可以在無真菌共生的條件下實現(xiàn)自萌發(fā)，這可能與其種胚細胞含有的脂質為種子萌發(fā)提供營養(yǎng)有關[16]，但后續(xù)的幼苗形成和生長發(fā)育過程需要菌根真菌的參與。不同菌根真菌對白花白及種子的促萌發(fā)作用存在一定差異，與兼容性（compatibility）高的菌根真菌（MB-18）共生時，其種子萌發(fā)率、原球莖率和幼苗率均顯著增加；鏡檢顯示其他菌株雖然也可以和白花白及形成共生關系，但不能明顯促進種子萌發(fā)、形成原球莖和幼苗。此外，盆栽試驗顯示，蠟殼菌MB-18對白花白及幼苗生長有顯著的促進作用，可能是白花白及從種子萌發(fā)到成年植株整個發(fā)育過程中均具有促進作用的“萬能”菌株，這一菌株的獲得對白花白及的規(guī)?；庇?、種質資源保護和微生物菌劑的開發(fā)具有重要意義。

參考文獻

[1]"MERCKX"V"S"F"T."Mycoheterotrophy："the"biology"of"plants"living"on"fungi[M]."New"York："Springer，"2013："1-17.

[2]"李景蕻，"張麗華，"鐘靜，"段連生."不同菌根真菌對鐵皮石斛穴盤苗生長及生根的影響[J]."華北農學報，"2022，"37"（增刊1）："172-177.LI"J"H，"ZHANG"L"H，"ZHONG"J，"DUAN"L"S."Effects"of"different"mycorrhizal"fungi"on"growth"and"root"system"of"plug"seedlings"of"Dendrobium"officinale[J]."Acta"Agriculturae"Boreali-Sinica，"2022，"37（Suppl."1）："172-177."（in"Chinese）

• ZHAO"D"K，"SELOSSE"M"A，"WU"L"M，"LUO"Y，"SHAO"S"C，"RUAN"Y"L."Orchid"reintroduction"based"on"seed"germination-promoting"mycorrhizal"fungi"derived"from"protocorms"or"seedlings[J]."Frontiers"in"Plant"Science，"2021，"12："701152.
• HUANG"H，"ZI"X"M，"LIN"H，"GAO"J"Y."Host-specificity"of"symbiotic"mycorrhizal"fungi"for"enhancing"seed"germination，"protocorm"formation"and"seedling"development"of"over-collected"medicinal"orchid，"Dendrobium"devonianum[J]."Journal"of"Microbiology，"2018，"56（1）："42-48.
• 徐錦堂，"郭順星."供給天麻種子萌發(fā)營養(yǎng)的真菌——紫萁小菇[J]."真菌學報，"1989（3）："221-226，"245.XU"J"T，"GUO"S"X."Fungus"associated"with"nutritionof"seed"germination"of"Gastrodia"elata："Mycena"osmundicola"Lange"[J]."Acta"Mycologica"Sinica，"1989（3）："221-226，"245."（in"Chinese）
• 郭順星，"徐錦堂."白芨種子萌發(fā)和幼苗生長與紫萁小菇等4種真菌的關系[J]."中國醫(yī)學科學院學報，"1992（1）："51-54，"79-80.GUO"S"X，"XU"J"T."The"relation"between"the"seed"germination"and"seedling"development"of"Bletilla"striata"and"Mycena"osmundicola"etc."fungi[J]."Acta"Academiae"Medicinae"Sinicae，"1992（1）："51-54，"79-80."（in"Chinese）

[7]"ZI"X"M，"SHENG"C"L，"GOODALE"U"M，"SHAO"S"C，"GAO"J"Y."In"situ"seed"baiting"to"isolate"germination-enhancing"fungi"for"an"epiphytic"orchid，"Dendrobium"aphyllum"（Orchidaceae）"[J]."Mycorrhiza，"2014，"24（7）："487-499.

[8]"AGGARWAL"S，"ZETTLER"L"W."Reintroduction"of"an"endangered"terrestrial"orchid，"Dactylorhiza"hatagirea"（D."Don）"Soo，"assisted"by"symbiotic"seed"germination："first"report"from"the"Indian"subcontinent[J]."Nature"and"Science，"2010，"8（10）："139-145.

[9]"TUPAPAC"OTERO"J，"MOSQUERA"A"T，"FLANAGAN"N"S."Tropical"orchid"mycorrhizae："potential"applications"in"orchid"conservation，"commercialization，"and"beyond[J]."Lankeste riana，"2013，"13："57-63.

[10]"王曉敏，"吳明開，"羅曉青."珍稀藥用蘭科植物白及的研究現(xiàn)狀與展望[J]."貴州農業(yè)科學，"2011，"39（3）："42-45.WANG"X"M，"WU"M"K，"LUOnbsp;X"Q."Present"situation"and"prospect"of"Bletilla"striata[J]."Guizhou"Agricultural"Sciences，"2011，"39（3）："42-45."（in"Chinese）

[11]"朱新焰，"字淑慧，"唐宇，"張智慧，"楊竹雅，"石亞娜，"錢均祥，"孫信梅，"王家金，"季鵬章."不同生長年限白及的多糖組織化學定位研究[J]."西南農業(yè)學報，"2019，"32（3）："511-515.ZHU"X"Y，"ZI"S"H，"TANG"Y，"ZHANG"Z"H，"YANG"Z"Y，"SHI"Y"N，"QIAN"J"X，"SUN"Xnbsp;M，"WANG"J"J，"JI"P"Z."Histochemistry"localization"of"polysaccharides"of"Bletilla"striata"in"different"growth"years[J]."Southwest"China"Journal"of"Agricultural"Sciences，"2019，"32（3）："511-515."（in"Chinese）

[12]"覃海寧，"楊永，"董仕勇，"何強，"賈渝，"趙莉娜，"于勝祥，"劉慧圓，"劉博，"嚴岳鴻，"向建英，"夏念和，"彭華，"李振宇，"張志翔，"何興金，"尹林克，"林余霖，"劉全儒，"侯元同，"劉演，"劉啟新，"曹偉，"李建強，"陳世龍，"金效華，"高天剛，"陳文俐，"馬海英，"耿玉英，"金孝鋒，"常朝陽，"蔣宏，"蔡蕾，"臧春鑫，"武建勇，"葉建飛，"賴陽均，"劉冰，"林秦文，"薛納新."中國高等植物受威脅物種名錄[J]."生物多樣性，"2017，"25（7）："696-744."QIN"H"N，"YANG"Y，"DONG"S"Y，"HE"Q，"JIA"Y，"ZHAO"L"N，"YU"S"X，"LIU"H"Y，"LIU"B，"YAN"Y"H，"XIANG"J"Y，"XIA"N"H，"PENG"H，"LI"Z"Y，"ZHANG"Z"X，"HE"X"J，"YIN"L"K，"LIN"Y"L，"LIU"Q"R，"HOU"Y"T，"LIU"Y，"LIU"Q"X，"CAO"W，"LI"J"Q，"CHEN"S"L，"JIN"X"H，"GAO"T"G，"CHEN"W"L，"MA"H"Y，"GENG"Y"Y，"JIN"X"F，"CHANG"C"Y，"JIANG"H，"CAI"L，"ZANG"C"X，"WU"J"Y，"YE"J"F，"LAI"Y"J，"LIU"B，"LIN"Q"W，"XUE"N"X."Threatened"species"list"of"China’s"higher"plants[J]."Biodiversity"Science，"2017，"25（7）："696-744."（in"Chinese）

[13]"ZHU"J，"CAI"Y"M，"YANG"L"Y，"LI"X，"LUO"S"F，"ZENG"X"H，"ZHANG"Y"C，"HUANG"W"C."Differential"metabolic"analysis"of"Bletilla"striata"and"its"mutants"based"on"widely"targeted"metabolomics"and"transcriptomics[J]."Industrial"Crops"and"Products，"2023，"204："117245.

[14]"徐玲玲，"張焱，"趙明陽，"李肖肖，"南夢月，"孟凡菊."菌根真菌對白及種子萌發(fā)和幼苗生根的作用[J]."菌物學報，"2019，"38（9）："1440-1449.XU"L"L，"ZHANG"Y，"ZHAO"M"Y，"LI"X"X，"NAN"M"Y，"MENG"F"J."Effects"of"mycorrhizal"fungi"on"seed"germination"and"seedling"rooting"of"Bletilla"striata[J]."Mycosystema，"2019，"38（9）："1440-1449."（in"Chinese）

[15]"牛俊峰，"王喆之."白及種子直播繁育新方法[J]."陜西師范大學學報（自然科學版），"2016，"44（4）："83-86.NIU"J"F，"WANG"Z"Z."The"new"direct"seeding"and"breeding"method"of"Bletilla"striata[J]."Journal"of"Shaanxi"Normal"University"（Natural"Science"Edition），"2016，"44（4）："83-86."（in"Chinese）

[16]"ZHANG"M，"SHAO"Q"S，"XU"E"T，"WANG"Z"A，"WANG"Z，"YIN"L"H."Bletilla"striata："a"review"of"seedling"propagation"and"cultivation"modes[J]."Physiology"and"Molecular"Biology"of"Plants，"2019，"25（3）："601-609.

[17]"陳曉芳，"劉準，"陶剛，"朱英，"劉作易."蘭科菌根真菌對黃花白及Bletilla"ochracea"Schltr.種子萌發(fā)率的影響[J]."西南農業(yè)學報，"2012，"25（4）："1393-1397.CHEN"X"F，"LIU"Z，"TAO"G，"ZHU"Y，"LIU"Z"Y."Study"on"seed"germination"of"Bletilla"ochracea"improved"by"mycorrhizal"fungi"of"orchid[J]."Southwest"China"Journal"of"Agricultural"Sciences，"2012，"25（4）："1393-1397."（in"Chinese）

• STEWART"S"L，"ZETTLER"L"W."Symbiotic"germination"of"three"semi-aquatic"rein"orchids"（Habenaria"repens，"H."quinquiseta，"H."macroceratitis）"from"Florida[J]."Aquatic"Botany，"2002，"72（1）："25-35.
• YANG"F"S，"SUN"A"H，"ZHU"J，"DOWNING"J，"SONG"X"Q，"LIU"H."Impacts"of"host"trees"and"sowing"conditions"on"germination"success"and"a"simple"ex"situ"approach"to"generate"symbiotic"seedlings"of"a"rare"epiphytic"orchid"endemic"to"Hainan"island，"China[J]."Botanical"Review，"2017，"83："74-86.
• 楊前宇，"何聰芬，"梁立雄，"王濤，"李潞濱，"劉蕾."菌根真菌對3種蘭花幼苗生長作用研究[J]."核農學報，"2019，"33（4）："687-695.YANG"Q"Y，"HE"C"F，"LIANG"L"X，"WANG"T，"LI"L"B，"LIU"L."Effect"of"mycorrhizal"fungi"on"the"plantlets"growth"of"three"species"of"orchid[J]."Journal"of"Nuclear"Agricultural"Sciences，"2019，"33（4）："687-695."（in"Chinese）

[21]"金有亮，"楊福孫，"宋希強，"周兆德."文心蘭組培苗與野生蘭科植物內生真菌共培養(yǎng)的生長效應研究[J]."熱帶作物學報，"2011，"32（8）："1483-1487.JIN"Y"L，"YANG"F"S，"SONG"X"Q，"ZHOU"Z"D."Studies"on"symbiotic"culture"growth"effect"of"Oncidium"tissue"culture"seedlings"and"native"orchidaceae"plants"endophytic"fungi[J]."Chinese"Journal"of"Tropical"Crops，"2011，"32（8）："1483-1487."（in"Chinese）

[22]"RASMUSSEN"H"N，"DIXON"K"W，"JERSAKOVA"J，"TESITELOVA"T."Germination"and"seedling"establishment"in"orchids："a"complex"of"requirements[J]."Annals"of"Botany，"2015，"116（3）："391-402.

[23]"GHIRARDO"A，"FOCHI"V，"LANGE"B，"WITTING"M，"SCHNITZLER"J"P，"PEROTTO"S，"BALESTRINI"R."Metabolomic"adjustments"in"the"orchid"mycorrhizal"fungus"Tulasnella"calospora"during"symbiosis"with"Serapias"vomeracea[J]."New"Phytologist，"2020，"228（6）："1939-1952.

[24]"XI"G"J，"SHI"J，"LI"J"B，"HAN"Z"M."Isolation"and"identification"of"beneficial"orchid"mycorrhizal"fungi"in"Bletilla"striata"（Thunb.）"Rchb.f."（Orchidaceae）[J]."Plant"Signaling"amp;"Behavior，"2020，"15（12）："e1816644.

[25]"WANG"X"J，"WU"Y"H，"MING"X"J，"WANG"G，"GAO"J"Y."Isolating"ecological-specific"fungi"and"creating"fungus-seed"bags"for"epiphytic"orchid"conservation[J]."Global"Ecology"and"Conservation，"2021，"28："e01714.

[26]"MCKENDRICK"S"L，"LEAKE"J"R，"TAYLOR"D"L，"READ"D"J."Symbiotic"germination"and"development"of"the"myco-heterotrophic"orchid"Neottia"nidus-avis"in"nature"and"its"requirement"for"locally"distributed"Sebacina"spp.[J]."New"Phytologist，"2002，"154（1）："233-247.

[27]"MASUHARA"G，"KATSUYA"K."In"situ"and"in"vitro"specificity"between"Rhizoctonia"spp."and"Spiranthes"sinensis"（Persoon）"Ames."var."amoena"（M."Bieberstein）"Hara"（Orchidaceae）[J]."New"Phytologist，"1994，"127（4）："711-718.

[28]"SWIFT"S，"MUNROE"S，"IM"C，"TIPTON"L，"HYNSON"N"A."Remote"tropical"island"colonization"does"not"preclude"symbiotic"specialists："new"evidence"of"mycorrhizal"specificity"across"the"geographic"distribution"of"the"Hawaiian"endemic"orchid"Anoectochilus"sandvicensis[J]."Annals"of"Botany，"2019，"123（4）："657-666.

[29]"唐燕靜，"郭順星，"陳娟."蘭科植物與菌根真菌專一性研究進展[J]."首都師范大學學報（自然科學版），"2021，"42（3）："63-74.TANG"Y"J，"GUO"S"X，"CHEN"J."Advances"in"the"specificity"of"Orchid-mycorrhizal"fungi[J]."Journal"of"Capital"Normal"University"（Natural"Science"Edition），"2021，"42（3）："63-74."（in"Chinese）

[30]"SWARTS"N"D，"SINCLAIRnbsp;E"A，"FRANCIS"A，"DIXON"K"W."Ecological"specialization"in"mycorrhizal"symbiosis"leads"to"rarity"in"an"endangered"orchid[J]."Molecular"Ecology，"2010，"19（15）："3226-3242.

[31]"XING"X"K，"MA"X"T，"MEN"J"X，"CHEN"Y"H，"GUO"S"X."Phylogenetic"constrains"on"mycorrhizal"specificity"in"eight"Dendrobium"（Orchidaceae）"species[J]."Science"China"Life"Sciences，"2017，"60（5）："536-544.

[32]"IRWIN"M"J，"BOUGOURE"J"J，"DEARNALEY"J"D"W."Pterostylis"nutans"（Orchidaceae）"has"a"specific"association"with"two"Ceratobasidium"root"associated"fungi"across"its"range"in"eastern"Australia[J]."Mycoscience，"2007，"48（4）："231-239.

[33]"GRAHAM"R"R，"DEARNALEY"J"D"W."The"rare"Australian"epiphytic"orchid"Sarcochilus"weinthalii"associates"with"a"single"species"of"Ceratobasidium[J]."Fungal"Diversity，"2012，"54（1）："31-37.

[34]"ZIMMER"K，"MEYER"C，"GEBAUER"G."The"ectomyco rrhizal"specialist"orchid"Corallorhiza"trifida"is"a"partial"myco-heterotroph[J]."New"Phytologist，"2008，"178（2）："395-"400.

[35]"JIANG"J"W，"ZHANG"K，"CHENG"S，"NIE"Q"W，"ZHOU"S"X，"CHEN"Q"Q，"ZHOU"J"L，"ZHEN"X，"LI"X"T，"ZHEN"T"W，"XU"M"Y，"HSIANG"T，"SUN"Z"X，"ZHOU"Y."Fusarium"oxysporum"KB-3"from"Bletilla"striata："an"orchid"mycorrhizalnbsp;fungus[J]."Mycorrhiza，"2019，"29（5）："531-540.

[36]"CHEN"J"H，"LI"L"L，"TIAN"P"W，"XIANG"W，"LU"X，"HUANG"R"S，"LI"L"B."Fungal"endophytes"from"medicinal"plant"Bletilla"striata"（Thunb.）"Reichb."F."promote"the"host"plant"growth"and"phenolic"accumulation[J]."South"African"Journal"of"Botany，"2021，"143："25-32.

[37]"羅琳，"黃學敏，"陳曉悅，"李龍，"邢玥，"林作棟，"景詩夢，"劉舒雅，"彭東輝."寒蘭根內生真菌誘導子對白芨種子萌發(fā)和幼苗生長的影響[J]."熱帶作物學報，"2021，"42（2）："442-448.LUO"L，"HUANG"X"M，"CHEN"X"Y，"LI"L，"XING"Y，"LIN"Z"D，"JING"S"M，"LIU"S"Y，"PENG"D"H."Effects"of"endophytic"fungal"elicitors"from"Cymbidium"kanran"roots"on"seed"germination"and"plant"growth"of"Bletilla"striata[J]."Chinese"Journal"of"Tropical"Crops，"2021，"42（2）："442-448."（in"Chinese）

[38]"高越，"郭順星，"刑曉科."蘭科植物種子共生萌發(fā)真菌多樣性及共生萌發(fā)機制研究進展[J]."菌物學報，"2019，"38（11）："1808-1825.GAO"Y，"GUO"S"X，"XING"X"K."Fungal"diversity"and"mechanisms"of"symbiotic"germination"of"orchid"seeds："a"review[J]."Mycosystema，"2019，"38（11）："1808-1825."（in"Chinese）

[39]"徐錦堂，"牟春."天麻原球莖生長發(fā)育與紫萁小菇及蜜環(huán)菌的關系[J]."植物學報，"1990，"32（1）："26-31.XU"J"T，"MU"C."The"relation"between"growth"of"Gastrodia"elata"protocorms"and"fungi[J]."Journal"of"Integrative"Plant"Biology，"1990，"32（1）："26-31."（in"Chinese）

[40]"SHAO"S"C，"WANG"Q"X，"BENG"K"C，"ZHAO"D"K，"JACQUEMYN"H."Fungi"isolated"from"host"protocorms"accelerate"symbiotic"seed"germination"in"an"endangered"orchid"species"（Dendrobium"chrysotoxum）"from"southern"China[J]."Mycorrhiza，"2020，"30（4）："529-539.

[41]"楊文科."促進白旗兜蘭種子共生萌發(fā)有效真菌的分離與應用[D]."昆明："云南大學，"2021.YANG"W"K."Isolating"effective"fungi"to"facilitate"seed"germinationof"Paphiopedilum"spicerianum"and"application"inconservation"practice[D]."Kunming："Yunnan"University，"2021."（in"Chinese）

[42]"RAFTER"M，"YOKOYA"K，"SCHOFIELD"E"J，"ZETTLER"L"W，"SARASAN"V."Non-specific"symbiotic"germination"of"Cynorkis"purpurea"（Thouars）"Kraezl.，"a"habitat-specific"terrestrial"orchid"fromnbsp;the"Central"Highlands"of"Madagascar[J]."Mycorrhiza，"2016，"26（6）："541-552.

[43]"WANG"H，"FANG"H"Y，"WANG"Y"Q，"DUAN"L"S，"GUO"S"X."In"situ"seed"baiting"techniques"in"Dendrobium"officinale"Kimura"et"Migo"and"Dendrobium"nobile"Lindl.："the"endangered"Chinese"endemic"Dendrobium"（Orchidaceae）[J]."World"Journal"of"Microbiol"amp;"Biotechnol，"2011，"27（9）："2051-2059.

[44]"RASMUSSEN"H"N."Cell"differentiation"and"mycorrhizal"infection"in"Dactylorhiza"majalis"（Rchb."f.）"Hunt"amp;"Summerh."（Orchidaceae）"during"germination"in"vitro[J]."New"Phytologist，"1990，"116（1）："137-147.

[45]"金輝，"許忠祥，"陳金花，"韓素芬，"葛頌，"羅毅波."鐵皮石斛組培苗與菌根真菌共培養(yǎng)過程中的相互作用[J]."植物生態(tài)學報，"2009，"33（3）："433-441.JIN"H，"XU"Z"X，"CHEN"J"H，"HAN"S"F，"GE"S，"LUO"Y"B."Interaction"between"tissue-cultured"seedlings"of"Dendrobium"officinale"and"mycorrhizal"fungus"（Epulorhiza"sp.）[J]."Chinese"Journal"of"Plant"Ecology，"2009，"33（3）："433-441."（in"Chinese）