香蕉MaERF15與MaACO8靶向結(jié)合調(diào)控果實采后成熟的分子機制

摘""要：香蕉是典型的呼吸躍變型果實。MaERF15是定位于細胞核且具有調(diào)控香蕉果實采后成熟作用的轉(zhuǎn)錄因子，MaACO8是在香蕉果實采后成熟過程中高水平表達的1個乙烯生物合成關(guān)鍵酶-ACC氧化酶基因，但MaERF15和MaACO8的分子互作機制尚未明確。探究乙烯響應(yīng)因子MaERF15對下游乙烯合成關(guān)鍵基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制，為香蕉果實采后保鮮技術(shù)的創(chuàng)新提供理論依據(jù)。本研究從香蕉DNA中分離出MaACO8啟動子序列，通過生物信息學分析、GUS染色等方法研究MaACO8的啟動子活性；采用酵母單雜交技術(shù)、EMSA、雙熒光素報告系統(tǒng)和活體成像系統(tǒng)研究MaERF15與MaACO8啟動子互作機制。結(jié)果表明：MaACO8的啟動子序列有11個，與AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合元件GCC-box具有較強的啟動活性；MaERF15能與MaACO8啟動子的GCC-box特異性結(jié)合，激活MaACO8的表達，促進乙烯的生物合成進而調(diào)控果實成熟。本研究結(jié)果進一步完善了香蕉果實采后乙烯生物合成調(diào)控果實成熟的理論，為香蕉耐貯運育種和成熟調(diào)控新技術(shù)的研發(fā)分別提供基因資源和理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：香蕉；MaERF15；MaACO8；轉(zhuǎn)錄調(diào)控中圖分類號：S668.1""""""文獻標志碼：A

Molecular"Mechanism"of"Banana"MaERF15"Regulating"Postharvest"Fruit"Ripening"by"Directly"Binding"MaACO8"Promoter

HUANG"Bingyun1，2，"ZHENG"Yunke2，3，"ZHANG"Jianbin2，3，"LI"Xinguo1*，"LIU"Juhua2，3*

1."School"of"Tropical"Agriculture"and"Forestry，"Hainan"University，"Haikou，"Hainan"570228，"China;"2."National"Key"Laboratory"for"Tropical"Crops"Breeding"/"Sanya"Research"Institute，"Chinese"Academy"of"Tropical"Agricultural"Sciences，"Sanya，"Hainan"572024，"China;"3."Institute"of"Tropical"Bioscience"and"Biotechnology，"Chinese"Academy"of"Tropical"Agricultural"Sciences，"Haikou，"Hainan"571101，"China

Abstract："Banana"isnbsp;a"typical"respiration"fruit."MaERF15"is"a"transcription"factor"located"in"the"nucleus"and"has"the"effect"of"regulating"postharvest"ripening"of"banana"fruits."MaACO8"is"a"key"ethylene"biosynthesis-ACC"oxidase"gene"expressed"at"high"levels"during"postharvest"ripening"of"banana"fruits."But"the"molecular"interaction"mechanism"between"the"two"has"not"been"clarified."To"explore"the"transcriptional"regulation"mechanism"of"ethylene"response"factor"MaERF15"on"the"key"genes"of"downstream"ethylene"synthesis"was"to"provide"a"theoretical"basis"for"the"innovation"of"postharvestnbsp;preservation"technology"of"banana"fruits."In"this"study，"the"promoter"sequence"of"MaACO8"was"isolated"from"banana"DNA，"and"the"promoter"activity"of"MaACO8"was"studied"by"bioinformatics"analysis"and"GUS"staining."Yeast"monohybridization，"EMSA，"dual"fluorescein"reporter"system"and"in"vivo"imaging"system"were"used"to"study"the"interaction"mechanism"between"MaERF15"and"MaACO8"promoter."The"results"showed"that"there"were"11"GCC-boxes"in"the"promoter"sequence"of"MaACO8"that"bind"to"AP2/ERF"transcription"factors，"which"had"strong"priming"activity."MaERF15"could"specifically"bind"to"the"GCC-box"of"the"MaACO8"promoter，"activate"the"expression"of"MaACO8，"promote"the"biosynthesis"of"ethylene，"and"regulate"fruit"ripening."The"results"further"improved"the"theory"of"postharvest"ethylene"biosynthesis"regulating"fruit"ripening"of"banana"fruits，"and"would"provide"genetic"resources"and"theoretical"basis"for"the"research"and"development"of"new"technologies"for"storage"and"transportation"tolerance"breeding"and"maturity"regulation"of"bananas，"respectively.

Keywords："banana;"MaERF15;"MaACO8;"transcription"regulation

DOI："10.3969/j.issn.1000-2561.2025.05.002

香蕉是全球產(chǎn)量最高的水果作物，也是全球水果貿(mào)易市場中重要的熱帶水果之一[1]。香蕉果實是典型的呼吸躍變型果實，含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)（如纖維、淀粉、多糖、維生素），對人體健康具有重要作用[2-3]。香蕉作為全球貿(mào)易型的水果，在鮮果運輸中保鮮技術(shù)顯得尤為重要。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，研究果實品質(zhì)形成與果實成熟機制有助于果實質(zhì)量的提高和鮮果儲存壽命的延長，促進果實保鮮技術(shù)的發(fā)展，減少全球鮮果產(chǎn)品的浪費[4-5]。

乙烯響應(yīng)因子（ethylene"response"factor，ERF）是AP2/ERF（apetala2/ethylene"response"factor）大家族中的1個亞族，最早從煙草中分離發(fā)現(xiàn)，含有1個AP2結(jié)構(gòu)域，處于乙烯信號轉(zhuǎn)導通路中的下游，調(diào)控著植物的生長、發(fā)育、成熟與衰老[6]。AP2/ERF家族廣泛參與植物生長和發(fā)育，包括組織分化和生殖器官的發(fā)育，還參與植物的生物和非生物脅迫反應(yīng)[7-10]。ERF作為乙烯信號通路的最終應(yīng)答基因，在果實成熟中發(fā)揮著重要作用，在多種植物水果中發(fā)現(xiàn)其表達調(diào)控的研究，ERF通過結(jié)合下游ACO、ACS、PG、EXP、PSY等基因的啟動子，直接調(diào)控果實成熟[11-14]。ERF與果實品質(zhì)形成相關(guān)基因啟動子靶向結(jié)合，參與調(diào)控番茄（Solanum"lycopersicum"L.）、花椒（Zantho xylum"bungeanum"Maxim.）、荔枝（Litchi"chinensis"Sonn.）等果實中胡蘿卜素、花青素、酚類化合物等抗氧化物質(zhì)的合成，影響果實品質(zhì)的形成[15-17]。ERF調(diào)控果實果皮軟化和乙烯生物合成關(guān)鍵基因，參與果實成熟的調(diào)控。番茄中，SlERF.E4、RIN和SlASR1共同調(diào)控β-D-N-乙酰己糖酶（β-Hex）的表達，參與調(diào)控果實成熟[18]。柿（Diospyros"kaki"Thunb.）的DkERF8、DkERF16和DkERF19通過激活DkXTH9啟動子參與脫澀期間的果實軟化[19]；在獼猴桃（Actinidia"chinensis"Planch.）的研究中發(fā)現(xiàn)，AdERF9通過抑制AdXET5啟動子的活性，影響獼猴桃果實的成熟[20]。木瓜[Pseudocydonia"sinensis"（Dum.Cours.）"C."K."Schneid.]"CpERF9作為轉(zhuǎn)錄抑制因子，與CpPME1、CpPME2和CpPG5啟動子中的GCC-"box結(jié)合，調(diào)控木瓜果實的成熟[21]。桃[Prunus"persica"（L.）"Batsch]"PpeERF2通過抑制2個ABA生物合成基因Ppe NCED2、PpeNCED3以及細胞壁降解基因PpePG1的表達，調(diào)控木瓜果實的成熟[22]。DkERF8和DkERF16分別增強了細胞修飾基因DkXTH11和DkXTH11的啟動子活性，促進其轉(zhuǎn)錄表達。DkERF18增強了乙烯合成酶基因DkACS2啟動子活性，促進了乙烯的生物合成和柿子果實的成熟[23]。蘋果（Malus"domestica"Borkh.）MdERF2抑制了乙烯合成關(guān)鍵基因MdACS1的轉(zhuǎn)錄表達，而MdERF3促進MdACS1的表達，MdERF2與MdERF3拮抗調(diào)節(jié)果實的成熟[24]。PpERF4通過與PpACO1和PpIAA1基因的啟動子結(jié)合促進其表達。ERF還與其他蛋白形成復(fù)合物，共同調(diào)控果實的成熟。PpERF4與PpIAA1結(jié)合形成復(fù)合物，促進脫落酸生物合成基因PpNCED2和PpNCED3以及果實軟化基因PpPG1的表達，加速了桃子果實成熟，縮短了果實貨架期[25]。以上研究報道表明了ERF在果實成熟中的重要意義。在香蕉全基因組水平上重新鑒定香蕉A基因組中的AP2/ERF家族成員，研究其在香蕉果實采后成熟過程中的差異表達特性，發(fā)現(xiàn)AP2/ERFs家族共有317個家族成員，其中MaERF15在巴西蕉和粉蕉果實成熟過程中處于高表達水平，說明其可能在香蕉果實成熟中具有重要作用，可調(diào)控成熟相關(guān)基因的表達，從而影響果實采后成熟[26]。前期從香蕉基因組中分離鑒定出MaERF15，并通過亞細胞定位，轉(zhuǎn)錄激活等實驗，明確了MaERF15是定位于細胞核中具有轉(zhuǎn)錄激活活性的轉(zhuǎn)錄因子，但MaERF15參與乙烯生物合成調(diào)控果實成熟相關(guān)的研究還未見報道[27]。

香蕉是典型的呼吸躍變型果實，伴隨著呼吸躍變，內(nèi)源乙烯生物合成量迅速上升并在短時間內(nèi)達到高峰，所以內(nèi)源乙烯的生物合成在果實采后成熟過程中發(fā)揮重要作用[28]。香蕉果實內(nèi)源乙烯生物合成過程分3個重要步驟：首先是在S-腺苷蛋氨酸合成酶（S-adenosyl-l-"methionine"synthase，"SAMS）的作用下將蛋氨酸合成S-腺苷蛋氨酸；第二步是在氨基環(huán)丙烷羧酸合成酶（（1-"aminocyclopropane-1-carboxylic"acid"synthase，"ACS）的作用下將S-腺苷蛋氨酸合成1-氨基環(huán)丙烷羧酸；最后在氨基環(huán)丙烷羧酸氧化酶（1-aminocy clopropane-"1-carboxylic"acid"oxidase，"ACO）的作用下將1-氨基環(huán)丙烷羧酸氧化生成乙烯[29]。在此過程中，ACO基因的表達與乙烯生物合成速率呈正相關(guān)，其基因活性可用于調(diào)控高等植物中乙烯的生物合成[30]。1991年，首次成功地從甜瓜（Cucumis"melo"L.）果實組織cDNA中提取分離得到ACO基因序列并體外驗證其活性[31]。ACO是乙烯生物合成的關(guān)鍵酶基因，直接影響著乙烯的生物合成，在植物生長的各個時期發(fā)揮著重要作用，對植物生長、花朵衰落和果實成熟的研究中具有重要意義[32]。ACO作為主要靶基因在基因工程中被TFs轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究果實成熟。甜瓜CmPIF8抑制CmACO1啟動子的活性，從而促進了乙烯的釋放，加速了果實的成熟，間接增加了采后甜瓜果實中的蔗糖含量[33]。在南果梨果實的PuACO家族研究中發(fā)現(xiàn)PuACO2、PuACO3和PuACO11在果實成熟和乙烯生物合成中起重要作用，可被乙烯誘導并被1-MCP處理抑制[34]。ACO是一個重要的限速酶，其高表達直接影響乙烯的生物合成，形成一個正反饋調(diào)節(jié)機制，進一步促進果實的成熟[35]。分析香蕉基因組發(fā)現(xiàn)有11個MaACO基因在果實成熟過程中表現(xiàn)出高表達水平，MaACO可能在果實成熟中具有重要的作用，但香蕉果實中乙烯響應(yīng)因子MaERF15與關(guān)鍵酶基因ACO具體的調(diào)控機制還不清楚[36]。

本研究選取MaACO8作為靶基因，研究其啟動子的結(jié)構(gòu)特征和啟動活性，發(fā)現(xiàn)MaACO8啟動子具有較強的活性，并受乙烯響應(yīng)因子MaERF15的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。本研究解析了MaERF15與MaACO8啟動子互作調(diào)控果實成熟的分子機制，促進ERF家族在香蕉果實品質(zhì)中的研究，為香蕉果實采后成熟或保鮮新技術(shù)的研發(fā)提供理論依據(jù)。

1""材料與方法

1.1""材料

巴西蕉果實（Musa"spp，"Cavendish）采自中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院熱帶生物技術(shù)研究所文昌種植基地；本氏煙草（Nicotiana"benthamiana）種子由本實驗室提供；大腸桿菌DH5α感受態(tài)、農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)和Y1H酵母感受態(tài)均購自上海唯地生物技術(shù)有限公司。

1.2""方法

1.2.1""MaACO8啟動子的分離擴增與生物信息學分析"（1）MaACO8啟動子的分離擴增。根據(jù)香蕉A基因組數(shù)據(jù)庫（http：//banana-genome.cirad."fr/），從香蕉基因組DNA中分離出MaACO8啟動子序列，設(shè)計MaACO8啟動子序列引物，以巴西蕉DNA為模板擴增目的片段，并連接到pMD19-T載體中，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)，進行PCR鑒定，挑選陽性菌株送測序，將測序正確的菌株擴大培養(yǎng)提取質(zhì)粒，得到pMD19-"T-MaACO8質(zhì)粒。

（2）生物信息學分析。利用PlantCARE（http：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plant care/html/）在線網(wǎng)站對啟動子元件進行生物信息學分析，使用TBtools軟件制作啟動子結(jié)構(gòu)可視化圖。

1.2.2""目的基因克隆及載體構(gòu)建""（1）MaERF15的克隆及相關(guān)載體的構(gòu)建。根據(jù)基因的cDNA序列設(shè)計特異性引物，以巴西蕉cDNA為模板擴增MaERF15全長，并連接到pMD19-T載體中，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)，經(jīng)PCR鑒定后，挑選陽性菌株送測序，將測序正確的菌株活化培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，得到pMD19-T-MaERF15質(zhì)粒。分別在特異性引物兩端添加無縫克隆接頭序列，以pMD19-T-MaERF15質(zhì)粒為模板，擴增目的片段，分別連接到pGreenⅡ62-SK和pGADT7載體中。擴增、回收、連接、轉(zhuǎn)化鑒定并送測菌液。擴大培養(yǎng)測序正確的pGADT7-MaERF15和pGreenⅡ-62-SK-MaERF15菌液并抽提重組質(zhì)粒。

（2）MaACO8啟動子的克隆及相關(guān)載體的構(gòu)建。根據(jù)MaACO8基因啟動子序列設(shè)計包含MaERF15結(jié)合位點的特異性引物，以pMD19-T-"MaACO8質(zhì)粒為模板擴增啟動子片段。將pBI121的35S啟動子替換為MaACO8啟動子，用Sda"I和Xba"I雙酶切pBI121載體和啟動子，將擴增片段MaACO8啟動子連接到pBI121載體中。分別在特異性引物兩端加無縫克隆接頭序列，以pMD19-T-MaACO8為模板擴增目的片段，分別連接到pAbAi、pGreenⅡ0800-LUC表達載體中。將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)，經(jīng)PCR鑒定后，挑選陽性菌株送測序，將測序正確的菌株活化培養(yǎng)提取質(zhì)粒，得到pBI121-MaACO8、pAbAi-"MaACO8和pGreenⅡ0800-LUC-MaACO8重組質(zhì)粒。

1.2.3""MaACO8啟動子的活性檢測""（1）轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌。將構(gòu)建好的pBI121-MaACO8重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌GV1301，具體轉(zhuǎn)化步驟如下：從–80"℃冰箱內(nèi)取出GV3101農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞，迅速插入冰盒內(nèi)，使其溶解。加入pBI121-"MaACO8質(zhì)粒輕輕混勻，依次于冰盒上靜置5"min、液氮5"min（或干冰乙醇浴盒–80"℃和–80"℃冰凍）、37"℃水浴5"min、冰浴5"min。添加700"μL不含抗生素的YEB液體培養(yǎng)基，混合均勻，于28"℃震蕩培養(yǎng)2～3"h。6000"r/min離心1"min，收集菌體，留取100"μL左右上清輕輕吹打重懸菌體并涂布于含相應(yīng)抗生素的YEB平板上，倒置于28"℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2～3"d。挑菌進行PCR鑒定，將陽性菌株放入50"mL的離心管中擴大培養(yǎng)備用。

（2）農(nóng)桿菌介導法侵染香蕉果實切片。將農(nóng)桿菌菌液在30"℃的恒溫搖床中震蕩培養(yǎng)至OD600=0.8，8000"r/min離心10"min，收集菌體，并用加入200"μmol/L乙酰丁香酮（AS）的MS液體培養(yǎng)基重懸至OD600=0.6～0.8，室溫暗處靜置孵育2～3"h。將香蕉果實切成形狀和厚度大致相同的薄片，于1.5%亞硫酸氫鈉溶液中浸泡10"min。把香蕉薄片放入孵育好的菌液中，進行真空輔助侵染。將侵染后的香蕉薄片均勻放置于1/2MS固體培養(yǎng)基上28"℃暗培養(yǎng)3"d，每組重復(fù)3次。

（3）GUS染色實驗。選取侵染后大小相近的香蕉果實薄片置于50"mL小燒杯中放于GUS染液中進行染色處理過夜，每組重復(fù)3次，具體操作步驟按照試劑盒說明書，把染色處理后的果片用75%乙醇進行脫色，直到脫色液透明，將果片體置于體視顯微鏡下觀察拍照。切去35S啟動子的空載體為陰性對照，正常pBI121載體為陽性對照。

（4）GUS酶活性檢測。將侵染后的香蕉薄片樣品放入研缽中，加入液氮研磨，然后取200"mg樣品放入1.5"mL離心管中，加入1800"μL"PBS，渦旋30"s后，在冰上靜置10"min，接著12"000"r/min離心10"min，離心后收集的上清液為GUS酶活的測定樣品。具體檢測方法參考植物β-葡萄糖苷酸酶（GUS）ELISA試劑盒（mlbio酶聯(lián)生物，中國）說明書。

1.2.4""酵母單雜交（YIH）""（1）AbA的背景篩選。①轉(zhuǎn)化Y1H"Gold酵母感受態(tài)：將構(gòu)建好的pAbAi-MaACO8和pAbAi-p53i質(zhì)粒用BstbI單酶切，65"℃酶切1"h，電泳泡膠檢測正確后，純化回收目的片段，轉(zhuǎn)化Y1HGold酵母感受態(tài)細胞（轉(zhuǎn)化步驟參照Y1H酵母感受態(tài)轉(zhuǎn)化說明書）。觀察菌落生長情況，并挑選出長勢較好的菌落，PCR鑒定pAbAi-MaACO8整合到Y(jié)1HGold基因組中的情況。將檢測正確的陽性菌株保存（–80"℃甘油保存），此酵母菌株為Y1HGold（pAbAi-"MaACO8）陽性菌株。②AbA背景表達水平篩選：挑取固體培養(yǎng)基中Y1Hgold（pAbAi-MaACO8）陽性單克隆，用100"μL"0.9%"NaCl"溶液吸打混勻，測定其吸光度，根據(jù)比例稀釋菌液至OD600="0.002。吸取100"μL混合液均勻涂布于含有不同濃度AbA抗生素的SD/-Ura固體培養(yǎng)基上，設(shè)置AbA濃度每50"ng為1個梯度，設(shè)置范圍為0～"1000"ng/mL。30"℃倒置培養(yǎng)48～72"h。觀察不同AbA濃度下SD/-Ura板中單菌落的生長情況，若到某一個濃度酵母菌無法生長，則在該濃度范圍內(nèi)進行細致篩選，最終篩選AbA表達水平為酵母無法生長的最低濃度。

（2）酵母轉(zhuǎn)化。①Y1H"Gold（pAbAi-MaACO8）酵母感受態(tài)制備：在SD/-Ura板上挑取3～5個Y1Hgold（pAbAi-MaACO8）陽性菌于3"mL"YPDA培養(yǎng)基中，在30"℃搖床中200"r/min活化培養(yǎng)8～12"h；選取活性強的菌液，吸取5"μL加入到50"mL的YPDA培養(yǎng)基中在250"mL的錐形瓶繼續(xù)培養(yǎng)孵育，16～20"h至OD600=0.15～0.3；將菌液收集于50"mL離心管中，7000"r/min離心5"min，棄上清液，加入50"mL的YPDA重懸，于250nbsp;mL的錐形瓶培養(yǎng)3～5"h，使得OD600=0.4～0.5；收集菌體7000"r/min離心5"min，棄上清，加入30"mL"ddH2O重懸，7000"r/min離心"5"min，棄上清液，將沉淀重懸于1.5"mL的1.1×TE/LiAC；細胞懸液轉(zhuǎn)移至1.5"mL離心管中，12"000"r/min離心50"s，棄上清液，向管中沉淀加入600"μL"1.1×TE/LiAC，酵母Bait-MaACO8感受態(tài)制備完成（保存于冰上，2"h內(nèi)轉(zhuǎn)化）。②Y1HGold（pBait）酵母感受態(tài)與Prey表達載體互作驗證：取上述50"μL"Y1Hgold（pAbAi-MaACO8）酵母感受態(tài)細胞放入2個1.5"mL離心管中，向管中分別加入100"ng"Prey表達載體pGADT7-MaERF15和pGADT7，具體轉(zhuǎn)化步驟參照1.2.4（1）中的轉(zhuǎn)化方法，吸取100"μL轉(zhuǎn)化菌液涂布于SD/-Leu板上，培養(yǎng)3～5"d。待菌落長出后，挑取單菌落溶于1"mL"0.9%"NaCl溶液，將OD600調(diào)至0.2，點涂于SD/-Leu和SD/-Leu+"AbA固體培養(yǎng)基上，觀察每組酵母菌的生長情況，從而確定互作情況。

1.2.5""凝膠阻滯實驗（EMSA）""將MaERF15基因的編碼序列克隆到pGEX-4T-1載體（Amersham"Biosciences，"USA）上，獲得帶GST（glutathione"S-transferases）標簽的重組蛋白，將重組蛋白轉(zhuǎn)化Escherichia"coli菌株BM"Rosetta（DE3），得到的蛋白用Glutathione-Superflow"Resin（Clontech）進行純化。MaACO8啟動子與MaERF15的結(jié)合順式作用元件的探針序列（5-ATGGCCGACATGC-"3）由上海生工合成，其5'端用生物素標記。EMSA具體操作步驟參照XIAO等[37]的方法。

1.2.6""雙熒光素酶報告系統(tǒng)試驗""（1）轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌GV3101。參照上述1.2.2轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌GV1301的方法，將構(gòu)建好的pGreenⅡ0800-LUC-"MaACO8和pGreenⅡ-62-SK-MaERF15質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌感受態(tài)GV3101（pSoup）。pGreenⅡ0800-LUC和pGreenⅡ62-SK空載體轉(zhuǎn)化為對照。

（2）煙草轉(zhuǎn)化和瞬時表達。將實驗組（GV3101/"pGreenⅡ-LUC-MaACO8和GV3101/"pGreenⅡ-"62-SK-MaERF15）與對照組（GV3101/"pGreenⅡ0800-LUC-MaACO8和GV3101/pGreenⅡ-62-SK）分別置于YEP液體培養(yǎng)基（25"μg/mL"Rif、50"μg/mL"Kan和20"μg/mL"Tet）中，30"℃，220"r/min活化擴大培養(yǎng)至OD600=0.8，5000"r/min離心10"min，收集菌體。將菌體用侵染液重懸至OD600=0.6，室溫靜置2"h。將GV3101/pGreenⅡ-"LUC-MaACO8分別與GV3101/pGreenⅡ-62-SK和GV3101/pGreenⅡ-62-SK-MaERF15以1∶3的

體積比混勻。用去掉針頭的1"mL注射器將混合好的菌液從煙草葉背面進行注射。為保證實驗背景的一致性，需要將對照載體和實驗?zāi)繕溯d體的菌液注射在同一葉片的不同部位上。室溫條件下培養(yǎng)2"d，每天向葉片噴水1～2次，保持濕潤。

（3）雙熒光素酶報告基因活性檢測。取注射后的實驗組和對照組煙草葉片分別放入研缽中研磨，參照FU等[21]的方法測定螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶的活性值，最后統(tǒng)計分析實驗組和對照組的螢火蟲熒光素酶活性值/海腎熒光素酶活性值（LUC/REN）。

（4）活體植物發(fā)光成像觀察。將1.2.6（1）中的菌液1∶3混勻組成4種組合，在同一片葉片中分為4個區(qū)域分別注射4種組合的菌液分為對照組和實驗組。48"h后用活體植物發(fā)光成像系統(tǒng)進行拍照觀察，觀察前需要于暗處在煙草葉片上噴灑反應(yīng)底物D-蟲熒光素鉀鹽溶液反應(yīng)5"min。

1.3""數(shù)據(jù)處理

使用Excel、GraphPadPrism"9.5、TBtools、IBM"SPSS"Statistics"25軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計和分析。

2""結(jié)果與分析

2.1""MaACO8啟動子的克隆和生物信息學分析

根據(jù)香蕉A基因組數(shù)據(jù)庫（http：//banana-"genome.cirad.fr/）BLAST，從香蕉基因組DNA中分離出2000"bp的MaACO8啟動子序列，采用PlantCARE軟件對MaACO8啟動子進行生物信息學分析。結(jié)果表明，MaACO8啟動子包含11處與ERF結(jié)合的GCC-box核心啟動子元件、36個CAAT-box、14個負責啟動、促進和增強轉(zhuǎn)錄的TATA-box等（圖1）。

2.2""MaACO8啟動子活性檢測

將MaACO8啟動子取代pBI121載體的35S啟動子（圖2A），利用農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化侵染香蕉果實切片。pBI121作為陽性對照，去除35S啟動子的pBI121作為陰性對照進行GUS染色。染色結(jié)果顯示，使用MaACO8啟動子侵染的香蕉薄片顏色比陰性對照藍，但比陽性對照稍淺（圖2B）。其GUS活性（圖2C）與染色結(jié)果一致，表明MaACO8啟動子具有較強的啟動活性。

2.3""MaERF15與MaACO8啟動子的互作機制

2.3.1""pAbAi-MaACO8載體轉(zhuǎn)化酵母""為了驗證MaERF15是否與MaACO8啟動子存在互作關(guān)系，分別將MaERF15和MaACO8啟動子構(gòu)建到pGADT7和pAbAi載體中，得到pGADT7-Ma

ERF15和pAbAi-MaACO8重組載體進行酵母單雜交實驗（圖3A）。將構(gòu)建好的Bait載體pAbAi-"MaACO8和pAbAi-p53i質(zhì)粒用BstbⅠ單酶切反應(yīng)后回收。將酶切產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到酵母Y1HGold感受態(tài)中，取100"μL轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布于SD/-Ura培養(yǎng)基上，30"℃倒置培養(yǎng)48～96"h，挑取單菌落進行PCR鑒定，檢測pBait-AbAi是否整合到酵母菌株中（pAbAi-p53i為陽性對照）。結(jié)果表明pAbAi-"MaACO8載體成功整合到酵母基因組中，誘餌載體轉(zhuǎn)化成功。

2.3.2""AbA背景篩選""金擔子素A（aureobasidin"A，"AbA）是環(huán)酯肽類抗生素中的一種，其濃度為0.1～0.5"μg/mL時能抑制酵母菌株生長。以pAbAi-"p53i為對照檢驗金擔子素的背景表達，其酵母菌株的生長濃度范圍是0～200"ng/mL。結(jié)果表明，抑制pAbAi-MaACO8酵母菌株生長的最低AbA濃度為50"ng/mL。

2.3.3""酵母單雜交""將轉(zhuǎn)入pAbAi-MaACO8誘餌載體的酵母菌制作成Y1HGold（pBait）酵母感受態(tài)后與MaERF15構(gòu)建的Prey表達載體共轉(zhuǎn)化后觀察酵母細胞的生長情況。如圖3B所示，酵母細胞在不含有抗生素AbA的SD/-Leu培養(yǎng)基上生長良好。培養(yǎng)基內(nèi)加入抗生素50"ng/mL的AbA后，實驗組（AD-MaERF15+MaACO8-promoter）的酵母細胞可以正常生長；而陰性對照組（AD-"Empty+MaACO8-promoter）共轉(zhuǎn)化的酵母細胞則不能生長，表明MaERF15與MaACO8啟動子互作。

2.3.4""凝膠阻滯實驗（EMSA）""生物信息學分析結(jié)果表明MaACO8的啟動子有MaERF15的結(jié)合元件GCC-box，因此采用EMSA技術(shù)來驗證MaERF15是否能與MaACO8的啟動子直接結(jié)合。如圖3C所示，MaERF15轉(zhuǎn)錄因子能與MaACO8的啟動子上的GCC-box直接結(jié)合，隨著競爭性的冷探針的加入顯著降低了MaERF15與MaACO8

啟動子的結(jié)合能力，加入非標記的突變探針并未影響MaERF15與MaACO8的結(jié)合能力，非標記的突變探針則不能與MaERF15結(jié)合。以上結(jié)果表明MaERF15轉(zhuǎn)錄因子能特異性地與MaACO8的啟動子上的GCC-box直接結(jié)合。

2.4""MaERF15對MaACO8的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用

分別將MaERF15和MaACO8構(gòu)建到pGreenⅡ62-SK和pGreenⅡ0800-LUC載體中，得到pGreenⅡ-62-SK-MaERF15和pGreenⅡ0800-"LUC-MaACO8重組載體（圖4A）。轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌侵染煙草葉片，用雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒對熒光素酶活性進行檢測，驗證MaERF15與MaACO8的啟動子的互作能力。將報告載體與效應(yīng)載體共侵染煙草葉片，將MaACO8啟動子加空效應(yīng)載體作為對照組，其LUC/REN比值作為1。結(jié)果顯示，MaERF15與MaACO8啟動子共侵染煙草葉片LUC活性顯著高于對照組（圖4B）。同樣地，在活體植物發(fā)光成像系統(tǒng)下熒光強弱也直觀顯示出MaERF15與MaACO8啟動子的熒光素酶活性明顯高于對照組（圖4C），這充分說明MaERF15對MaACO8的轉(zhuǎn)錄具有激活作用。

3""討論

香蕉采后成熟決定了水果的保質(zhì)期，乙烯生物合成是決定香蕉成熟的核心因素[38]。ACO（1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸氧化酶）是植物乙烯合成途徑中的關(guān)鍵酶，對植物的開花、果實成熟和種子發(fā)育等生物學過程有重要影響，參與調(diào)控植物的成熟和衰老過程[39]。2003年，RASORI等[40]構(gòu)建β-葡萄糖醛酸酶（GUS）報告基因與桃ACO基因啟動子之間的嵌合融合體，轉(zhuǎn)化番茄植株，并在桃果實中進行瞬時活性鑒定，分析ACO啟動子的功能。本研究通過將MaACO8啟動子構(gòu)建到具有β-葡萄糖醛酸酶（GUS）報告基因的pBI121載體中，使用農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化到香蕉果片中，通過染色觀察GUS基因的瞬時表達情況和定量分析GUS酶活性，從而確定啟動子活性的強弱，研究結(jié)果表明MaACO8啟動子具有較強的啟動子活性。

ERF是AP2/ERF超家族的一個亞家族，廣泛參與調(diào)控果實品質(zhì)的形成，是植物生長過程中重要的轉(zhuǎn)錄因子[41]。ERFs作為激活子或抑制子調(diào)控果實品質(zhì)形成相關(guān)基因的表達，參與果實成熟的調(diào)控。ERFs可以直接或間接調(diào)控乙烯生物合成中的關(guān)鍵酶基因ACS和ACO，直接影響果實中乙烯的生物合成，進而影響成熟過程[42]。MdERF4直接與MdACS1啟動子結(jié)合并抑制其表達，并與MdERF3啟動子結(jié)合，抑制MdERF3對MdACS1啟動子的激活作用，間接抑制了乙烯的合成，延長了果實的貯藏期[43]。WANG等[36]從香蕉A基因組中鑒定到11個與果實成熟密切相關(guān)的ACO基因，其中MaACO8在巴西蕉和粉蕉果實采后成熟過程中高水平表達，這與MaERF15在采后果實中的表達具有相似的趨勢，二者互作在調(diào)控香蕉果實采后乙烯生物合成和果實成熟過程中具有重要作用。本研究中的MaERF15是乙烯響應(yīng)因子，生物信息學分析結(jié)果表明MaACO8啟動子區(qū)域有多個ERF轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合域，酵母單雜交實驗證明二者存在互作關(guān)系，EMSA證明MaERF15與MaACO8基因啟動子的GCC-box直接結(jié)合，并通過雙熒光素酶報告系統(tǒng)和活體熒光成像系統(tǒng)證實了MaERF15對MaACO8的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用，進而調(diào)控乙烯的生物合成，影響香蕉的成熟過程。這與香蕉B基因家族中MbERF71、MbERF113可分別靶向MbACO2啟動子的GCC-box，激活MbACO2的表達結(jié)果一致[44]。MaERF11轉(zhuǎn)錄因子募集組蛋白脫乙酰酶MaHDA1并與MaACO1啟動子相互作用以抑制其表達，而MaERF9則激活MaACO1啟動子活性[45]。這表明乙烯合成關(guān)鍵酶基因ACO受到多個ERF家族成員的復(fù)雜調(diào)控。ERF參與果實成熟調(diào)控的網(wǎng)絡(luò)錯綜復(fù)雜，本研究解釋了ERF通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控乙烯生物合成關(guān)鍵基因ACO參與果實成熟的調(diào)控機制。

4nbsp;"結(jié)論

本研究揭示了香蕉中乙烯響應(yīng)因子MaERF15與乙烯生物合成關(guān)鍵基因MaACO8相互作用參與果實成熟的調(diào)控機制。MaERF15與MaACO8啟動子中的GCC-box靶向結(jié)合，激活MaACO8的表達，從而促進果實中乙烯的生物合成，加快果實成熟的進程。本研究促進了ERF轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控下游乙烯生物合成關(guān)鍵基因的研究，進一步解析ERF在采后果實成熟中的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，為種質(zhì)資源改良和果實保鮮技術(shù)的創(chuàng)新提供理論基礎(chǔ)。

參考文獻

[1]"PANIGRAHI"N，"THOMPSON"A"J，"ZUBELZU"S，"KNOX"J"W."Identifying"opportunities"to"improve"management"of"water"stress"in"banana"production[J]."Scientia"Horticulturae，"2021，"276："109735.

[2]"QAMAR"S，"SHAIKH"A."Therapeutic"potentials"and"compositional"changes"of"valuable"compounds"from"banana："a"review[J]."Trends"in"Food"Science"amp;"Technology，"2018，"79："1-9.

[3]"KUMAR"P"S，"SARAVANAN"A，"SHEEBA"N，"UMA"S."Structural，"functional"characterization"and"physicochemical"properties"of"green"banana"flour"from"dessert"and"plantain"bananas"（Musa"spp.）[J]."Food"Science"and"Technology，"2019，"116："108524.

• AL-DAIRI"M，"PATHARE"P"B，"AL-YAHYAI"R，"JAYASURIYA"H，"AL-ATTABI"Z."Postharvest"quality，"technologies，"and"strategies"to"reduce"losses"along"the"supply"chain"of"banana："a"review[J]."Trends"in"Food"Science"amp;"Technology"2023，"134："177-191.

[5]"朱孝揚，"李雪萍，"單偉，"鄺健飛，"陳建業(yè)，"陳維信，"陸旺金."香蕉貯運保鮮技術(shù)研究進展[J]."熱帶作物學報，"2020，"41（10）："2013-2021.ZHU"X"Y，"LI"X"P，"SHAN"W，"KUANG"J"F，"CHEN"J"Y，"CHEN"W"X，"LU"W"J."Research"progress"on"banana"storage，"transportation"and"preservation"technology[J]."Chinese"Journal"of"Tropical"Crops，"2020，"41（10）："2013-2021."（in"Chinese）

[6]"FENG"K，"HOU"X"L，"XING"G"M，"LIU"J"X，"DUAN"A"Q，"XU"Z"S，"LI"M"Y，"ZHUANG"J，"XIONG"A"S."Advances"in"AP2/ERF"super-family"transcription"factors"in"plant[J]."Critical"Reviews"in"Biotechnology，"2020，"40（6）："750-776.

[7]"XIE"Z，"NOLAN"T"M，"JIANG"H，"YIN"Y."AP2/ERF"transcription"factor"regulatory"networks"in"hormone"and"abiotic"stress"responses"in"Arabidopsis[J]."Front"Plant"Science，"2019，"10："228.

[8]"LI"J"J，"GUO"X，"ZHANG"M"H，"WANG"X，"ZHAO"Y，"YIN"Z"G，"ZHANG"Z"Y，"WANG"Y"M，"XIONG"H"Y，"ZHANG"H"L，"TODOROVSKA"E，"LI"Z"C."OsERF71"confers"drought"tolerance"via"modulating"ABA"signaling"and"proline"biosynthesis[J]."Plant"Science，"2018，"270："131-139.

[9]"ZHANG"Z"J，"HUANG"R"F."Enhanced"tolerance"to"freezing"in"tobacco"and"tomato"overexpressing"transcription"factor"TERF2/LeERF2"is"modulated"by"ethylene"biosynthesis[J]."Plant"Physiology，"2010，"73（3）："241-249.

[10]"LI"B"B，"WANG"X"H，"WANG"X"F，"XI"Z"M."An"AP2/ERF"transcription"factor"VvERF63"positively"regulates"cold"tolerance"in"Arabidopsis"and"grape"leaves[J]."Environmental"and"Experimental"Botany，"2023，"205："105124.

[11]"HAN"Y"C，"KUANG"J"F，"CHEN"J"Y，"LIU"X"C，"XIAO"Y"Y，"FU"C"C，"WANG"J"N，"WU"K"Q，"LU"W"J."Banana"transcription"factor"MaERF11"recruits"histone"deacetylase"MaHDA1"and"represses"the"expression"of"MaACO1"and"expansins"during"fruit"ripening[J]."Plant"Physiology，"2016，"171（2）："1070-1084.

[12]"LEE"J"M，"JOUNG"J"G，"MCQUINN"R，"CHUNG"M"Y，"FEI"Z，"TIEMAN"D，"KLEE"H，"GIOVANNONI"J."Combined"transcriptome，"genetic"diversity"and"metabolite"profiling"in"tomato"fruit"reveals"that"the"ethylene"response"factor"SlERF6"plays"an"important"role"in"ripening"and"carotenoid"accumulation[J]."Plant"J，"2012，"70（2）："191-204.

• LIU"M，"DIRETTO"G，"PIRRELLO"J，"ROUSTAN"JP，"LI"Z，"GIULIANO"G，"REGAD"F，"BOUZAYEN"M."The"chimeric"repressor"version"of"an"Ethylene"Response"Factor"（ERF）"family"member，"Sl-ERF."B3，"shows"contrasting"effects"on"tomato"fruit"ripening[J]."New"Phytologist，"2014，"203（1）："206-218.

[14]"LIU"M，"GOMES"B"L，"MILA"I，"PURGATTO"E，"PERES"L"E，"FRASSE"P，"MAZA"E，"ZOUINE"M，"ROUSTAN"J"P，"BOUZAYEN"M，"PIRRELLO"J."Comprehensive"profiling"of"ethylene"response"factor"expression"identifies"ripening-asso ciated"ERF"genes"and"their"link"to"key"regulators"of"fruit"ripening"in"tomato[J]."Plant"Physiology，"2016，"170（3）："1732-"1744.

[15]"ZHANG"S"Y，"LIU"S，"REN"Y"S，"ZHANG"J，"HAN"N，"WANG"C，"WANG"D"M，"LI"H"H."The"ERF"transcription"factor"ZbERF3"promotes"ethylene-induced"anthocyanin"biosynthesis"in"Zanthoxylum"bungeanum[J]."Plant"Science，"2024，"349："112264.

[16]"ZHUO"M"G，"WANG"T"Y，"HUANG"X"M，"HU"G"B，"ZHOU"B"Y，"WANG"H"C，"ABBAS"F."ERF"transcription"factors"govern"anthocyanin"biosynthesis"in"litchi"pericarp"by"modulating"the"expression"of"anthocyanin"biosynthesis"genes[J]."Scientia"Horticulturae，"2024，"337："113464.

[17]"CAI"D"L，"XU"H，"LIU"Z"L，"CHEN"N"H，"ZHU"L，"LIN"Z"X，"WU"C"J，"SHAN"W，"CHEN"J"Y，"LU"W"J，"CHEN"L，"KUANG"J"F."Banana"MaERF124"negatively"modulates"carotenoid"accumulation"during"fruit"ripening"through"repression"of"carotenogenesis"genes[J]."Postharvest"Biology"and"Technology，"2023，"195："112151.

[18]"IRFAN"M，"KUMAR"P，"KUMAR"V，"DATTA"A."Fruit"ripening"specific"expression"of"β-D-N-acetylhexosaminidase"（β-Hex）"gene"in"tomato"is"transcriptionally"regulated"by"ethylene"response"factor"SlERF."E4[J]."Plant"Science，"2022，"323："111380.

[19]"WANG"M"M，"ZHU"Q"G，"DENG"C"L，"LUO"Z"R，"SUN"N"J，"GRIERSON"D，"YIN"X"R，"CHEN"K"S."Hypoxia-responsive"ERFs"involved"in"postdeastringency"softening"of"persimmon"fruit[J]."Plant"Biotechnol"Journal，"2017，"15（11）："1409-1419.

[20]"YIN"X"R，"ALLAN"A"C，"CHEN"K"S，"FERGUSON"I"B."Kiwifruit"EIL"and"ERF"genes"involved"in"regulating"fruit"ripening[J]."Plant"Physiology，"2010，"153（3）："1280-1292.

[21]"FU"C"C，"HAN"Y"C，"QI"X"Y，"SHAN"W，"CHEN"J"Y，"LU"W"J，"KUANG"J"F."Papaya"CpERF9"acts"as"a"transcriptional"repressor"of"cell-wall-modifying"genes"CpPME1/2"and"CpPG5"involved"in"fruit"ripening[J]."Plant"Cell"Reports，"2016，"35（11）："2341-2352.

[22]"WANG"X"B，"ZENG"W"F，"DING"Y"F，"WANG"Y，"NIU"L，"YAO"J"L，"PAN"L，"LU"Z"H，"CUI"G"C，"LI"G"H，"WANG"Z"Q."Peach"ethylene"response"factor"PpeERF2"represses"the"expression"of"ABA"biosynthesis"and"cell"wall"degradation"genes"during"fruit"ripening[J]."Plant"Scences，"2019，"283："116-126.

[23]"HE"Y"H，"XUE"J，"LI"H，"HAN"S"K，"JIAO"J"Q，"RAO"J"P."Ethylene"response"factors"regulate"ethylene"biosynthesis"and"cell"wall"modification"in"persimmon"（Diospyros"kaki"L.）"fruit"during"ripening[J]."Postharvest"Biology"and"Technology，"2020，"168："111255.

[24]"LI"T，"JIANG"Z"Y，"ZHANG"L"C，"TAN"D"M，"WEI"Y，"YUAN"H，"LI"T"L，"WANG"A."Apple"（Malus"domestica）"MdERF2"negatively"affects"ethylene"biosynthesis"during"fruit"ripening"by"suppressing"MdACS1"transcription[J]."The"Plant"Journal，"2016，"88（5）："735-748.

[25]"WANG"X"B，"PAN"L，"WANG"Y，"MENG"J"R，"DENG"L，"NIU"L，"LIU"H，"DING"Y"F，"YAO"J"L，"NIEUWENHUIZEN"N"J，"AMPOMAH-DWAMENA"C，"LU"Z"H，"CUI"G"C，"WANG"Z，"ZENG"W."PpIAA1"and"PpERF4"form"a"positive"feedback"loop"to"regulate"peach"fruit"ripening"by"integrating"auxin"and"ethylene"signals[J]."Plant"Science，"2021，"313："111084.

[26]"張海波，"鄭云柯，"付毛妮，"張建斌，"賈彩紅，"李新國，"劉菊華."香蕉AP2/ERFs超家族的重新鑒定及在果實采后成熟過程中的差異表達特性[J]."果樹學報，"2024，"41（5）："861-874.ZHANG"H"B，"ZHENG"Y"K，"FU"M"N，"ZHANG"J"B，"JIA"C"H，"LI"X"G，"LIU"J"H."Re-identification"of"the"AP2/ERFs"superfamily"in"banana"and"its"differential"expression"characteristics"during"postharvest"ripening[J]."Journal"of"Fruit"Science，"2024，"41（5）："861-874."（in"Chinese）

[27]"張海波."香蕉MaAP2/ERFs家族的全基因組分析及關(guān)鍵MaERFs在果實采后成熟過程中的作用[D]."海口："海南大學，"2024.ZHANG"H"B."Genome-wide"analysis"of"banana"MaAP2/ERFs"family"and"the"role"of"key"MaERFs"in"fruit"postharvest"ripening[D]."Haikou："Hainan"University，"2024."（in"Chinese）

[28]"LIU"M"Y，"WANG"C"R，"JI"H"L，"SUN"M"X，"LIU"T"Y，"WANG"J"H，"CAO"H，"ZHU"Q"G."Ethylene"biosynthesis"and"signal"transduction"during"ripening"and"softening"in"non-climacteric"fruits："an"overview[J]."Frontiers"in"Plant"Science，"2024，"15："1368692.

[29]"LI"S，"CHEN"K"S，"GRIERSON"D."A"critical"evaluation"of"the"role"of"ethylene"and"MADS"transcription"factors"in"the"network"controlling"fleshy"fruit"ripening[J]."New"Phytologist，"2019，"221（4）："1724-1741.

[30]"RUDU?"I，"SASIAK"M，"K?PCZY?SKIV"J."Regulation"of"ethylene"biosynthesis"at"the"level"of"1-aminocyclopropane-1-"carboxylate"oxidase"（ACO）"gene[J]."Acta"Physiol"Plant，"2013，"35："295-307.

[31]"VERVERIDIS"P，"JOHN"P."Complete"recovery"in"vitro"of"ethylene-forming"enzyme"activity[J]."Phytochemistry，"1991，"30（3）："725-727.

[32]"PATTYN"J，"VAUGHAN-HIRSCH"J，"VAN"DE"POEL"B."The"regulation"of"ethylene"biosynthesis："a"complex"multilevel"control"circuitry[J]."New"Phytologist，"2021，"229（2）："770-782.

[33]"GUAN"J"Y，"LIANG"X，"GAO"G，"YANG"F，"QI"H"Y."The"interaction"between"CmPIF8"and"CmACO1"under"postharvest"red"light"treatment"might"affect"fruit"ripening"and"sucrose"accumulation"in"oriental"melon"fruit[J]."Postharvest"Biology"and"Technology，"2024，"209："112717.

[34]"YUAN"H，"YUE"P"T，"BU"H"D，"HAN"D"G，"WANG"A."Genome-wide"analysis"of"ACO"and"ACS"genes"in"pear"（Pyrus"ussuriensis）[J]."In"Vitro"Cellular"amp;"Developmental"Biology-Plant，"2019，"56："193-199.

[35]".HOUBEN"M，"VAN"DE"POEL"B."1-aminocyclopropane-"1-carboxylic"acid"oxidase"（ACO）："the"enzyme"that"makes"the"plant"hormone"ethylene[J]."Front"Plant"Science，"2019，"10："695.

[36]"WANG"Z，"MIAO"H"X，"LIU"J"H，"XU"B"Y，"YAO"X"M，"XU"C"Y，"ZHAO"S"C，"FANG"X"D，"JIA"C"H，"WANG"J"Y，"ZHANG"J"B，"LI"J"Y，"XU"Y，"WANG"J"S，"MA"W"H，"WU"Z"Y，"YU"L"L，"YANG"Y"L，"LIU"C，"GUO"Y，"SUN"S"L，"BAURENS"F"C，"MARTIN"G"L，"SALMON"F，"GARSMEUR"O，"YAHIAOUI"N，"HERVOUET"C，"ROUARD"M，"LABOUREAU"N，"HABAS"R，"RICCI"S，"PENG"M，"GUO"A"P，"XIE"J"H，"LI"Y，"DING"Z"H，"YAN"Y，"TIE"W"W，"D'HONT"A，"HU"W，"JIN"Z."Musa"balbisiana"genome"reveals"subgenome"evolution"and"functional"divergence[J]."Nature"Plants，"2019，"5（8）："810-821.

[37]"XIAO"Y"Y，"KUANG"J"F，"QI"X"N，"YE"Y"J，"WU"Z"X，"CHEN"J"Y，"LU"W"J."Acomprehensive"investigation"of"starch"degradation"process"and"identifica-tion"of"a"transcriptional"activator"MabHLH6"during"banana"fruit"ripening[J]."Plant"Biotechnology"Journal，"2018，"16："151-164.

[38]"XU"B"Y，"SU"W，"LIU"J"H，"WANG"J"B，"JIN"Z"Q."Differentially"expressed"cDNAs"at"the"early"stage"of"banana"ripening"identified"by"suppression"subtractive"hybridization"and"cDNA"microarray[J]."Planta，"2007，"226（2）："529-539.

[39]"ZHANG"Y"X，"ZHANG"Y"R，"YU"Z，"WANG"H"Y，"PING"B"Y，"LIU"Y"X，"LIANG"J"K，"MA"F"W，"ZOU"Y"J，"ZHAO"T."Insights"into"ACO"genes"across"Rosaceae："evolution，"expression，"and"regulatory"networks"in"fruit"development[J]."Genes"Genomics，"2024，"46（10）："1209-1223.

[40]"RASORI"A，"BERTOLASI"B，"FURINI"A，"BONGHI"C，"TONUTTI"P，"RAMINA"A."Functional"analysis"of"peach"ACC"oxidase"promoters"in"transgenic"tomato"and"in"ripening"peach"fruit[J]."Plant"Science，"2003，"165（3）："523-530.

[41]"宋康華，"黎宇婷，"張魯斌."AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控果實品質(zhì)研究進展[J]."熱帶作物學報，"2019，"40（5）："1032-1040.SONG"K"H，"LI"Y"T，"ZHANG"L"B."Research"progress"on"the"regulation"of"fruit"quality"by"AP2/ERF"transcription"factors[J]."Chinese"Journal"of"Tropical"Crops，"2019，"40（5）："1032-1040."（in"Chinese）

[42]"HAO"P"P，"WANG"G"M，"CHENGnbsp;H"Y，"KE"Y"Q，"QI"K"J，"GU"C，"ZHANG"S"L."Transcriptome"analysis"unravels"an"ethylene"response"factor"involved"in"regulating"fruit"ripening"in"pear[J]."Physiologia"Plantarum，"2018，"163（1）："124-135.

[43]"ZANG"N"N，"LI"X"J，"QI"L"Y，"ZHANG"Z"R，"YANG"Y"M，"YIN"Z"P，"WANG"A"D."H2O2-activated"transcription"factor"MdERF4"negatively"regulates"ethylene"biosynthetic"during"fruit"ripening"by"suppressing"MdACS1"transcription[J]."Postharvest"Biology"and"Technology，"2023，"204："112461.

[44]"TANG"Y"Q，"YAN"Y，"TIE"W"W，"YE"X"X，"ZENG"L"W，"ZENG"L"M，"YANG"J"H，"XU"B"Y，"LI"M"Y，"WANG"Y，"XIE"Z"N，"JIN"Z"Q，"HU"W."Transcriptional"regulation"of"MbACO2-mediated"ethylene"synthesis"during"postharvest"banana"ripening[J]."Postharvest"Biology"and"Technology，"2023，"200："112325.

[45]"XIAO"Y"Y，"CHEN"J"Y，"KUANG"J"F，"SHAN"W，"XIE"H，"JIANG"Y"M，"LU"W"J."Banana"ethylene"response"factors"are"involved"in"fruit"ripening"through"their"interactions"with"ethylene"biosynthesis"genes[J]."Journal"of"Experimental"Botany，"2013，"64（8）："2499-2510.