酸菜中一株產(chǎn)氣芽孢桿菌的分離鑒定及耐受性研究

摘要：文章以酸菜為原料，對(duì)其中一株產(chǎn)氣芽孢桿菌進(jìn)行分離鑒定和產(chǎn)氣驗(yàn)證，并構(gòu)建基因發(fā)育樹；再利用酸菜中可使用的防腐劑進(jìn)行抑菌試驗(yàn)和耐受性測(cè)試。序列分析系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建結(jié)果表明，酸菜中產(chǎn)氣芽孢桿菌為貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis）。6種防腐劑抑菌試驗(yàn)結(jié)果顯示，焦亞硫酸鈉的抑菌效果最佳，脫氫乙酸鈉、苯甲酸鈉次之，而Nisin（乳酸鏈球菌素）的抑菌效果最差。耐受性測(cè)試結(jié)果顯示，NaCl濃度低時(shí)抑制效果不明顯，當(dāng)NaCl濃度高于14 g/100 g時(shí)菌株幾乎不再生長(zhǎng)；菌株在低酸性環(huán)境下生長(zhǎng)良好，而在高酸性環(huán)境下生長(zhǎng)受到抑制，幾乎不生長(zhǎng)；菌株在95 ℃下處理30 min還能繼續(xù)生長(zhǎng)，說明該菌株具有耐熱性。該研究可為酸菜的生產(chǎn)加工提供一定的參考依據(jù)和理論指導(dǎo)，對(duì)酸菜制品的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有重要意義。

關(guān)鍵詞：芽孢桿菌；分離鑒定；耐受性；抑菌效果

中圖分類號(hào)：TS255.54文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1000-9973（2025）03-0120-05

Isolation， Identification and Tolerance of a Strain of Aerogenic

Bacillus in Sauerkraut

LIU Li^1，2， JIN Huai-kang^1，2， KONG Lei^1，2， WEI Jin-huan^1，2， YANG Can^1，2， GAO Hui-fang^1，2

（1.Honghe Hopen Food Co.， Ltd.， Honghe 651400， China; 2.Key Laboratory of

Fermented Vegetables in Yunnan Province， Honghe 651400， China）

Abstract： In this paper， with sauerkraut as the raw material， a strain of aerogenic Bacillus is isolated， identified and verified for gas production， and a gene phylogenetic tree is constructed. The preservatives that can be used in sauerkraut are used to conduct antibacterial test and tolerance test. The results of phylogenetic tree constructed by sequence analysis show that aerogenic Bacillus in sauerkraut is Bacillus velezensis. The antibacterial test results of six preservatives show that sodium metabisulfite has the best antibacterial effect， followed by sodium dehydroacetate and sodium benzoate， and Nisin has the worst antibacterial effect. The tolerance test results show that the inhibition effect is not obvious when the NaCl concentration is low， and the strain almost no longer grows when the NaCl concentration is higher than 14 g/100 g. The strain grows well in low acidic environment， while the growth is inhibited in high acidic environment and the strain almost does not grow. The strain treated at 95 ℃ for 30 min can continue to grow， indicating that the strain has heat resistance. This study can provide a certain reference basis and theoretical guidance for the production and processing of sauerkraut， and is of vital significance for the industrialization development of sauerkraut products.

Key words： Bacillus; isolation and identification; tolerance; antibacterial effect

收稿日期：2024-10-28

基金項(xiàng)目：云南省科技人才與平臺(tái)計(jì)劃項(xiàng)目（202205AG070001）;云南省生物種業(yè)和農(nóng)產(chǎn)品精深加工專項(xiàng)（202102AE090025，202202AE090017）;云南省基礎(chǔ)研究專項(xiàng)（202401AS070025）

作者簡(jiǎn)介：劉力（1989—），男，工程師，碩士，研究方向：發(fā)酵蔬菜技術(shù)。

酸菜是以生鮮蔬菜為原料，經(jīng)自然或人工接菌發(fā)酵制成，是我國(guó)歷史悠久的傳統(tǒng)發(fā)酵食品。但受氣候、風(fēng)俗和飲食習(xí)慣的影響，以及選料和工藝的不同分為四川酸菜、江西腌菜和東北酸菜等^[1-2]。其營(yíng)養(yǎng)豐富、風(fēng)味獨(dú)特，還具有開胃健脾等功能^[3]。在酸菜生產(chǎn)中產(chǎn)生大量微生物^[4-5]，導(dǎo)致菌群組成復(fù)雜，易受外源性微生物污染，其中有害微生物產(chǎn)氣、產(chǎn)酸等情況難以控制，在貯藏期間可能出現(xiàn)脹袋、過酸化等問題，致使品質(zhì)下降，貨架期縮短，因此需添加防腐劑以提升產(chǎn)品的貨架期品質(zhì)^[6-7]。

防腐劑是指能抑制微生物生長(zhǎng)繁殖、防止食品腐敗變質(zhì)的一類食品添加劑^[8-9]。實(shí)踐證明，采用防腐劑是延長(zhǎng)食品貨架期最經(jīng)濟(jì)、最有效的辦法之一^[10-11]，其種類繁多，主要分為天然防腐劑^[12-13]、化學(xué)防腐劑^[14]、復(fù)合防腐劑^[15]等，而酸菜中常用焦亞硫酸鈉、苯甲酸鈉、山梨酸鉀等作為防腐劑。曹秋閣等^[16]將山梨酸鉀等幾種防腐劑按一定比例混合，結(jié)果表明其可以抑制酸菜中的病原微生物生長(zhǎng)，延長(zhǎng)貨架期。姜紹通等^[17]研制出的復(fù)合防腐劑可使酸菜中致腐菌抑制率達(dá)到96%。古麗帕麗·買明等^[18]將山梨酸鉀與雙乙酸鈉復(fù)配，可以使巴哈利的保質(zhì)期顯著延長(zhǎng)。李共國(guó)等^[19]在芥菜腌制過程中添加焦亞硫酸鈉、檸檬酸，使腌制芥菜的品質(zhì)有所提升。Plesoianu 等^[20]采用山梨酸對(duì)新鮮藍(lán)莓進(jìn)行浸泡，發(fā)現(xiàn)能顯著抑制微生物生長(zhǎng)，延長(zhǎng)保質(zhì)期。Homa等^[21]制備了負(fù)載山梨酸、BHA和BHT組合活性復(fù)合膜包裝甜甜圈，顯著延長(zhǎng)了貨架期。胡春紅等^[22]利用山梨酸鉀與苯甲酸鈉復(fù)配，結(jié)果表明對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌具有較好的抑制效果。

目前大多數(shù)研究偏向于酸菜發(fā)酵過程中的品質(zhì)變化和影響因素等，而對(duì)脹包酸菜中產(chǎn)氣菌株篩選鑒定等相關(guān)研究較少。本文先對(duì)貨架期內(nèi)酸菜產(chǎn)品中產(chǎn)氣芽孢桿菌進(jìn)行分離鑒定，分析不同耐受條件（NaCl濃度、pH、溫度）對(duì)芽孢桿菌生長(zhǎng)周期OD600的影響，再利用酸菜中常用的6種防腐劑（EDTA（乙二胺四乙酸二鈉）、焦亞硫酸鈉、脫氫乙酸鈉、苯甲酸鈉、乳酸鏈球菌素、山梨酸鉀）對(duì)該菌株的抑制效果進(jìn)行比較分析，旨在為酸菜的工業(yè)化生產(chǎn)加工提供一定的參考依據(jù)和理論指導(dǎo)，對(duì)酸菜及其系列產(chǎn)品的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有重要意義。

1材料與方法

1.1材料與試劑

貨架期內(nèi)脹氣酸菜樣品：由紅河宏斌食品有限公司提供。

牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、葡萄糖；NaCl（純度≥99%）、檸檬酸、EDTA、焦亞硫酸鈉、脫氫乙酸鈉、苯甲酸鈉、Nisin（乳酸鏈球菌素）、山梨酸鉀（均為食品級(jí)）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2儀器與設(shè)備

LYZ-211C恒溫?fù)u床上海龍躍儀器設(shè)備有限公司；HWS-26型恒溫水浴鍋常州智博瑞儀器制造有限公司；YXQ-70A立式壓力蒸汽滅菌鍋上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司；HX3002Z型電子分析天平賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；X-6紫外可見分光光度計(jì)上海元儀儀器科技有限公司；游標(biāo)卡尺（0～200 mm）得力集團(tuán)有限公司；牛津杯（7.8 mm×6 mm×10 mm）上海三麝香實(shí)業(yè)有限公司；玻璃培養(yǎng)皿如皋市華宇玻璃制品廠。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1產(chǎn)氣芽孢桿菌菌株分離及形態(tài)學(xué)鑒定

1.3.1.1分離純化

將分離出的菌株根據(jù)顯微形態(tài)選擇LB液體培養(yǎng)基進(jìn)行富集培養(yǎng)，對(duì)富集后的菌液進(jìn)行分離純化和顯微檢驗(yàn)，并將獲得的優(yōu)勢(shì)菌株于甘油管中-80 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.1.2形態(tài)學(xué)初步鑒定

將分離純化后的菌株接種于LB固體培養(yǎng)基中，在（30±1） ℃下倒置培養(yǎng)48 h，觀察記錄培養(yǎng)基上菌落的形態(tài)，取典型單一菌落進(jìn)行鏡檢，并于10×100倍油鏡下觀察菌體形態(tài)^[23]。根據(jù)菌株的生理生化結(jié)果，查閱《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》和《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》，按照書中提到的鑒定方法分析篩選得到的菌株的生理生化特征。

1.3.1.3產(chǎn)氣驗(yàn)證

將分離擴(kuò)培的菌懸液接種于LB液體培養(yǎng)基中觀察；其中一組于121 ℃滅菌20 min作為對(duì)照組，另一組不做處理。將兩個(gè)處理組于（30±1）℃恒溫倒置培養(yǎng)48～72 h，觀察杜氏小管產(chǎn)氣情況。

1.3.2產(chǎn)氣芽孢桿菌16S rDNA分子生物學(xué)鑒定

將篩選出的目標(biāo)產(chǎn)氣芽孢桿菌送至生工生物工程（上海）股份有限公司（Sangon Biotech （Shanghai） Co.， Ltd.）檢測(cè)，先使用Ezup柱式細(xì)菌基因組脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）提取試劑盒（B518255）提取基因組DNA，上、下游引物分別為27F（5′-AGAGTTTGATC-MTGGCTCAG-3′）和1492R（5′-GGTTACCTTGTTACGA-CTT-3′）。將獲得的菌株基因組DNA進(jìn)行PCR（polymerase chain reaction）擴(kuò)增，反應(yīng)體系：酶Mix（1×TSE102金牌）45 μL，正向引物2 μL（濃度10 mol/L），反向引物2 μL（濃度10 mol/L），DNA模板1 μL。擴(kuò)增程序：98 ℃預(yù)變性2 min，運(yùn)行35次，每次循環(huán)10 s，72 ℃延伸5 min。

1.3.3產(chǎn)氣芽孢桿菌系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建

將擴(kuò)增后的菌株基因組DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，參照Guo等^[24]的方法將PCR產(chǎn)物進(jìn)行基因序列測(cè)定，將最終所得菌株的DNA序列信息輸入NCBI（National Center for Biotechnology Information（www.ncbi.nlm.nih.gov）數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BlastN分析，以此確定分離菌株的種屬，構(gòu)建基因發(fā)育樹。

1.3.4產(chǎn)氣芽孢桿菌耐受性試驗(yàn)

1.3.4.1耐鹽性試驗(yàn)

將純化菌株接種于LB固體培養(yǎng)基中，于（30±1） ℃恒溫培養(yǎng)48～72 h，得到活化純培養(yǎng)菌體，將單菌落接種于適宜的LB液體培養(yǎng)基中，于（30±1） ℃恒溫培養(yǎng)48～72 h。根據(jù)吸光度值，使其菌懸液濃度為1×10⁷ ～5×10⁷ CFU/mL，得到菌株懸液（下同）。

耐鹽性能供試培養(yǎng)基：選擇適宜的LB液體培養(yǎng)基，不添加NaCl，初始培養(yǎng)基鹽分不得超過0.5%（以NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)算）。

參考連鑫等^[25]的方法，將菌懸液接種于不同NaCl濃度的LB液體培養(yǎng)基中，于（30±1） ℃恒溫培養(yǎng)72 h。培養(yǎng)過程中，每間隔4 h測(cè)定OD600，繪制生長(zhǎng)曲線。

1.3.4.2耐酸性試驗(yàn)

酸性培養(yǎng)基配制：取300 mL三角瓶，準(zhǔn)確稱量LB液體培養(yǎng)基100 g，緩慢添加檸檬酸使其溶解，靜置5 min測(cè)定并調(diào)整pH，做好標(biāo)記并封口，于121 ℃滅菌15 min，冷卻后備用。其余酸性培養(yǎng)基同法配制。

參考熊建等^[26]的方法，將菌株懸液接種于不同pH條件下的LB液體培養(yǎng)基中，置于搖床上，于（30±1） ℃恒溫培養(yǎng)72 h。培養(yǎng)過程中，每4 h取樣測(cè)定OD600，繪制生長(zhǎng)曲線。

1.3.4.3耐溫性測(cè)試

參考盧曉^[27]的方法，將菌懸液接種于LB液體培養(yǎng)基中（1 mL/管），將接種菌株的試管置于85～95 ℃下分別處理10，20，30 min后，恒溫培養(yǎng)72 h，測(cè)試其溫度耐受性。

1.3.5防腐劑對(duì)芽孢桿菌抑菌效能評(píng)估

參照國(guó)標(biāo)GB/T 39101—2020《多肽抗菌性測(cè)定 抑菌圈法》^[28]中的抑菌圈法進(jìn)行測(cè)定。

1.4數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Excel 2010統(tǒng)計(jì)結(jié)果；采用SPSS 18.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA）和Duncan多水平檢驗(yàn)各組間差異；結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，當(dāng)P＜0.05時(shí)表示差異顯著，每組試驗(yàn)重復(fù)3次。

2結(jié)果與分析

2.1產(chǎn)氣芽孢桿菌的分離鑒定

2.1.1菌株顯微形態(tài)學(xué)初步鑒定

本文從貨架期內(nèi)脹氣酸菜包中均勻取樣，經(jīng)過富集培養(yǎng)、分離純化、形態(tài)觀察，從樣品中篩選得到菌株。經(jīng)平板涂布、劃線分離培養(yǎng)，共得到1株代表性的優(yōu)勢(shì)菌株，富集并培養(yǎng)形成菌液后進(jìn)行分離純化和顯微檢驗(yàn)，獲得的純培養(yǎng)微生物菌落形態(tài)見圖1中A，顯微鏡鏡檢結(jié)果見圖1中B，通過觀察對(duì)比，菌株單個(gè)或鏈狀排列，著色均勻，無莢膜，芽孢囊不明顯膨大，且菌落粗糙，不透明，不閃光，擴(kuò)張，呈污白色或微帶黃色，與蔡高磊等^[29]的描述相似，說明該菌株為芽孢桿菌。

2.1.2菌株產(chǎn)氣試驗(yàn)驗(yàn)證

在酸菜的工業(yè)化生產(chǎn)中，常出現(xiàn)由微生物大量繁殖而引起的酸菜制品脹包等現(xiàn)象，給工廠造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。由于芽孢桿菌具有較強(qiáng)的耐受性，因此，對(duì)目標(biāo)菌株進(jìn)行產(chǎn)氣檢測(cè)試驗(yàn)非常有必要。通過對(duì)菌株進(jìn)行產(chǎn)氣試驗(yàn)，觀察杜氏小管的產(chǎn)氣情況，結(jié)果見表1。

由表1可知，在試驗(yàn)組試管中有氣泡產(chǎn)生，說明菌株具有產(chǎn)氣能力。綜上所述，可以推斷出從脹包酸菜中分離純化得到的菌株為產(chǎn)氣芽孢桿菌。

2.1.3芽孢桿菌生物學(xué)分子鑒定

將純化的產(chǎn)氣芽孢桿菌進(jìn)行16S rDNA基因測(cè)序，菌株基因序列片段大小為1 381 bp，在NCBI上進(jìn)行BlastN比對(duì)，結(jié)果顯示該鑒定菌株HPSC001與Bacillus velezensis（GeneBank No.：MK208528.1）有100%相似性，初步鑒定為貝萊斯芽孢桿菌。

2.1.4芽孢桿菌序列分析系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建

根據(jù)同源序列搜索結(jié)果，用GeneBank登錄號(hào)下載序列，保存為Fasta格式，使用BioEdit分析軟件進(jìn)行多序列對(duì)位排序，采用MEGA 7.0軟件中的N-J（Neighbor-Joining）算法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，見圖2。

由圖2可知，菌株HPSC001與Bacillus velezensis聚為一支，可信度為100%，因此可將菌株HPSC001鑒定為貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis）。

2.2產(chǎn)氣芽孢桿菌耐受性試驗(yàn)分析

2.2.1不同NaCl濃度對(duì)芽孢桿菌生長(zhǎng)周期OD600的影響

不同NaCl濃度對(duì)芽孢桿菌生長(zhǎng)周期OD600的影響見圖3。由圖3可知，隨著含鹽量的增加，菌株的活性逐漸降低，生長(zhǎng)繁殖受到抑制。鹽濃度低時(shí)抑制效果不明顯，鹽濃度高時(shí)幾乎不生長(zhǎng)，與袁先鈴等^[30]在酸菜中篩選出的乳酸菌生長(zhǎng)情況類似，都是在低濃度時(shí)生長(zhǎng)較好，在高濃度條件下幾乎不生長(zhǎng)。當(dāng)NaCl濃度為6，8，10，12 g/100 g時(shí)，隨著鹽濃度升高，調(diào)整期也逐漸延長(zhǎng)，說明高鹽環(huán)境對(duì)菌株的生長(zhǎng)有較大的抑制作用，而當(dāng)NaCl濃度≥14 g/100 g時(shí)，菌株幾乎不再生長(zhǎng)，這可能是高滲透壓導(dǎo)致菌株停止生長(zhǎng)或失水死亡，也可能是菌株對(duì)高鹽較敏感，抑制了菌株生長(zhǎng)，而在實(shí)際生產(chǎn)中可根據(jù)需要，采用高鹽抑制此類微生物生長(zhǎng)，保證產(chǎn)品質(zhì)量，延長(zhǎng)貨架期。

2.2.2不同pH條件對(duì)芽孢桿菌生長(zhǎng)周期OD600的影響

不同pH條件對(duì)菌株生長(zhǎng)周期的影響見圖4。

由圖4可知，菌株在低酸性環(huán)境下生長(zhǎng)良好，而在高酸性環(huán)境下生長(zhǎng)受到抑制，幾乎不生長(zhǎng)。在低酸性條件下，菌株生長(zhǎng)調(diào)整期相對(duì)較短，影響較小。菌株在pH 4.5時(shí)的生長(zhǎng)活性降低，與低酸性pH 5.5，6.5兩組相比，調(diào)整期有所延長(zhǎng)，而當(dāng)pH低于4.5時(shí)，菌株在強(qiáng)酸性環(huán)境下生長(zhǎng)受到抑制，幾乎不再生長(zhǎng)，因此說明菌株在高酸性環(huán)境下耐受性能較差，不適宜在高酸性環(huán)境下生長(zhǎng)，生產(chǎn)中可以適量調(diào)整pH來抑制其生長(zhǎng)，保證產(chǎn)品品質(zhì)。

2.2.3耐溫性測(cè)試分析

通過不同溫度對(duì)芽孢桿菌耐溫性能進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果見表2。

由表2可知，在處理時(shí)間為10，20，30 min的條件下，隨著處理溫度的升高和處理時(shí)間的延長(zhǎng)，菌株對(duì)溫度的耐受性無太大差異，均能正常生長(zhǎng)；綜上所述，說明該菌株的耐溫性較強(qiáng)，具有較強(qiáng)的抗逆性，一般的低溫殺菌工藝（≤95 ℃）不能將其殺死，如巴氏殺菌，因此對(duì)于有此類菌株生長(zhǎng)的產(chǎn)品，不適宜使用低溫殺菌處理此類產(chǎn)品以達(dá)到延長(zhǎng)貨架期的目的，必須采用高溫滅菌等其他手段。

2.36種防腐劑對(duì)芽孢桿菌抑菌效果的影響

將篩選出的產(chǎn)氣芽孢桿菌進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，采用牛津杯法測(cè)定6種防腐劑的抗菌效價(jià)，結(jié)果見表3。

由表3可知，通過抑菌圈直徑與相關(guān)性方程計(jì)算可以看出每種防腐劑對(duì)菌株均有抑制作用，除山梨酸鉀和Nisin的抗菌效果較差外，其余結(jié)果均具有顯著性差異（P＜0.05），其中焦亞硫酸鈉的抗菌效價(jià)最高，為513.65 AU/mg，最低的是Nisin，為9.13 AU/mg，這可能與每種防腐劑的化學(xué)性質(zhì)和所處環(huán)境等因素有關(guān)，如脫氫乙酸鈉對(duì)霉菌、酵母菌等具有較好的抑制作用，而對(duì)其他微生物的抑制效果相對(duì)較差^[31]。田靜等^[32]研究表明，使用焦亞硫酸鈉溶液處理貯藏期葡萄，可使貨架期延長(zhǎng)，微生物數(shù)量降低，當(dāng)pH為4.0時(shí)貯藏效果最佳。本試驗(yàn)中焦亞硫酸鈉的抑菌效果最好，為513.65 AU/mg，可能是菌株所處環(huán)境pH為4.0左右所致。山梨酸鉀類防腐劑對(duì)霉菌和酵母菌的抑制效果優(yōu)異^[33]，但其溶解后溶液呈酸性，抑菌活性受環(huán)境pH水平的影響較大，在酸性環(huán)境下抑菌效果更好，反之效果較差^[34]。Razavi等^[35]研究表明山梨酸在低pH時(shí)比高pH時(shí)對(duì)真菌的抑制效果更好，而在pH為7.0時(shí)抑菌效果較好，本試驗(yàn)中可能是菌株所處的環(huán)境pH較高或較低，導(dǎo)致其抑菌效果較差，抗菌效價(jià)為9.30 AU/mg。對(duì)于Nisin，研究表明它在酸性pH水平下具有抗菌活性，但在中性或pH高于7.0時(shí)活性幾乎喪失^[36]。本試驗(yàn)中可能是因?yàn)榫晁幁h(huán)境pH水平較高，導(dǎo)致Nisin的抑菌效果在6種防腐劑中最差，抗菌效價(jià)僅為9.13 AU/mg。

3結(jié)論

本文對(duì)貨架期內(nèi)酸菜產(chǎn)品中的一株產(chǎn)氣芽孢桿菌進(jìn)行分離鑒定，再利用酸菜中可使用的6種防腐劑（EDTA、焦亞硫酸鈉、脫氫乙酸鈉、苯甲酸鈉、乳酸鏈球菌素、山梨酸鉀）對(duì)該菌株的抑菌效果和耐受性進(jìn)行測(cè)試。通過對(duì)酸菜中一株產(chǎn)氣菌株進(jìn)行富集培養(yǎng)、分離純化、形態(tài)觀察、產(chǎn)氣測(cè)試，確定了該菌株為產(chǎn)氣芽孢桿菌，序列分析構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹和分子鑒定結(jié)果顯示，該菌株為貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis）。利用6種防腐劑對(duì)其進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，結(jié)果顯示焦亞硫酸鈉的抑菌效果最佳，而Nisin的抑菌效果最差。通過耐受性試驗(yàn)得出，鹽濃度低時(shí)抑制效果不明顯，鹽濃度高于14 g/100 g時(shí)菌株幾乎不再生長(zhǎng)；菌株在低酸性環(huán)境下生長(zhǎng)良好，而在高酸性環(huán)境下生長(zhǎng)受到抑制，且?guī)缀醪簧L(zhǎng)；通過不同溫度對(duì)芽孢桿菌的耐溫性能進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果顯示該菌株在95 ℃下處理30 min還能繼續(xù)生長(zhǎng)，說明該菌株具有一定的耐熱性。因此，在酸菜的工業(yè)化生產(chǎn)中可根據(jù)實(shí)際需要添加防腐劑、調(diào)整pH、適當(dāng)提高鹽濃度等來防止這類產(chǎn)氣芽孢桿菌引起的酸菜產(chǎn)品產(chǎn)氣脹袋現(xiàn)象，延長(zhǎng)貨架期，保證其品質(zhì)。本研究可為酸菜工業(yè)化生產(chǎn)提供參考，對(duì)酸菜產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有重要意義。

參考文獻(xiàn)：

[1]郎鑫崧.酸菜發(fā)酵過程中菌群多樣性與生物胺演變規(guī)律相關(guān)性的研究[D].吉林：吉林大學(xué)，2022.

[2]尼海峰，鄧冕，馮月玲.東北酸菜產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀與發(fā)展對(duì)策[J].中國(guó)調(diào)味品，2011，36（6）：10-12.

[3]馬藝熒，孫波，張宇，等.東北酸菜不同發(fā)酵時(shí)間有機(jī)酸變化及其對(duì)產(chǎn)品酸感的影響[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2019，45（5）：45-50.

[4]鄒慧芳，渠暢，吳昊，等.酸菜發(fā)酵過程中微生物多樣性的研究進(jìn)展[J].中國(guó)調(diào)味品，2013，38（11）：107-112.

[5]施安輝，周波.蔬菜傳統(tǒng)腌制發(fā)酵工藝過程中微生物生態(tài)學(xué)的意義[J].中國(guó)調(diào)味品，2002（5）：11-15.

[6]XIAO M Y，HUANG T，HUANG C L，et al.The microbial communities and flavour compounds of Jiangxi yancai， Sichuan paocai and Dongbei suancai： three major types of traditional Chinese fermented vegetables[J].LWT-Food Science and Technology，2020，121（235）：108865.

[7]李繼文，姜愛麗，胡文忠，等.東北酸菜的發(fā)酵工藝及使用食品抗氧化劑和防腐劑的必要性[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2018（19）：5090-5094.

[8]章萍萍.食品防腐劑檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J].食品安全導(dǎo)刊，2023（15）：180-182.

[9]黃本婷，余靜，何丹，等.肉制品防腐添加劑及其應(yīng)用[J].中國(guó)調(diào)味品，2019，44（2）：175-178.

[10]羅傲霜，淳澤，羅傲雪，等.食品防腐劑的概況與發(fā)展[J].中國(guó)食品添加劑，2005（4）：55-58，76.

[11]吳得海，張思維，李東梅，等.山梨酸及其鉀鹽類在食品中的應(yīng)用[J].農(nóng)業(yè)科技與信息，2023（7）：149-152.

[12]翟賽亞，李紅艷.天然食品防腐劑在食品中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].食品工程，2022（4）：7-11.

[13]吳周和，徐燕，吳傳茂.八角中天然防腐劑的提取方法及其抑菌作用研究[J].中國(guó)調(diào)味品，2003（9）：18-20.

[14]董欣旖，趙英俠.食品防腐劑在食品中應(yīng)用現(xiàn)狀分析[J].中國(guó)食品添加劑，2020，31（11）：139-143.

[15]劉蘭花.復(fù)合生物防腐劑在腌制蔬菜中的應(yīng)用研究[D].合肥：合肥工業(yè)大學(xué)，2008.

[16]曹秋閣，夏琪娜，侯俊財(cái)，等.響應(yīng)面法優(yōu)化酸菜抑菌配方的研究[J].食品工業(yè)，2014，35（5）：86-89.

[17]姜紹通，孫磊，羅水忠，等.復(fù)合防腐劑對(duì)腌制蔬菜中腐敗細(xì)菌的抑制效果研究[J].食品科學(xué)，2010，31（9）：54-58.

[18]古麗帕麗·買明，白羽嘉，買熱姑·買買提，等.3種常用防腐劑復(fù)配對(duì)巴哈利抑菌效果的影響[J].保鮮與加工，2021，21（4）：35-40.

[19]李共國(guó)，何禮濤，孫志棟.影響腌制芥菜貯藏品質(zhì)的非熱加工因素通徑分析[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2022，22（11）：318-325.

[20]PLESOIANU A M， TUTULESCU F， NOUR V. Postharvest antimicrobial treatments with organic acids to improve the shelf life of fresh blueberries[J].Notulae Botanicae Horti Agrobotanici Cluj-Napoca，2020，48（1）：90-101.

[21]HOMA F S， HADI P S， JAMALEDDIN P S， et al. Properties and application of multifunctional composite polypropylene-based films incorporating a combination of BHT， BHA and sorbic acid in extending donut shelf-life[J].Molecules，2020，25（21）：5197.

[22]胡春紅，陳龍，李季平，等.苯甲酸鈉和山梨酸鉀的復(fù)配抑菌效果研究[J].中國(guó)調(diào)味品，2012，37（3）：46-49.

[23]周德慶.微生物學(xué)教程（第3版）[M].北京：高等教育出版社，2011：336-338.

[24]GUO L D， HYDE K D， LIEW E C Y. Detection and taxonomic placement of endophytic fungi within frond tissues of Livistona chinensis based on rDNA sequences[J].Molecular Phylogenetics and Evolution，2001（20）：1-13.

[25]連鑫，楊錫洪，解萬翠，等.中國(guó)傳統(tǒng)蝦醬中產(chǎn)香酵母的分離鑒定及其耐鹽性分析[J].現(xiàn)代食品科技，2014，30（7）：92-97.

[26]熊建，胡靖，彭穎，等.耐酸性酵母提取物成分分析及其在米醋中的應(yīng)用[J].中國(guó)調(diào)味品，2021，46（4）：86-89.

[27]盧曉.三株鼠李糖乳桿菌生化特性分析及其在沙拉醬中的應(yīng)用研究[D].廣州：華南理工大學(xué)，2023.

[28]國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).多肽抗菌性測(cè)定 抑菌圈法：GB/T 39101—2020[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2020.

[29]蔡高磊，張凡，歐陽(yáng)友香，等.貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis）研究進(jìn)展[J].北方園藝，2018（12）：162-167.

[30]袁先鈴，周鶯茹，鄭連強(qiáng)，等.酸菜中乳酸菌生長(zhǎng)曲線、產(chǎn)酸性能及抑菌性能探究[J].食品研究與開發(fā)，2022，43（14）：199-203.

[31]滕征輝，崔玉新，李繼，等.防腐劑種類、特點(diǎn)及在食品中的應(yīng)用[J].食品安全導(dǎo)刊，2018（18）：35.

[32]田靜，儀慧蘭.焦亞硫酸鈉溶液處理對(duì)采后玫瑰香葡萄貯藏效果的影響[J].食品科技，2018，43（11）：44-49.

[33]于倩男.山梨酸的抑菌性、抗氧化性及其在烘焙產(chǎn)品中的應(yīng)用[D].無錫：江南大學(xué)，2023.

[34]SOFOS J N， BUSTA F F. Antimicrobial activity of sorbate[J].Journal of Food Protection，1981，44（8）：614-622.

[35]RAZAVI-ROHANI S M， GRIFFITHS M W.Antifungal effects of sorbic acid and propionic acid at different pH and NaCl conditions[J].Journal of Food Safety，1999，19（2）：109.

[36]DAVIES E A， FALAHEE M B， ADAMS M R. Involvement of the cell envelope of Listeria monocytogenes in the acquisition of Nisin resistance[J].The Journal of Applied Bacteriology，2010，81（2）：139-146.