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    海藻酸鹽/絲素基復(fù)合水凝膠的制備及性能研究

    2025-03-27 00:00:00李奉原段宇航張石陽張宏陽陳重鉛
    現(xiàn)代鹽化工 2025年1期

    摘要:以海藻酸鈉和絲素蛋白為原料,通過化學(xué)交聯(lián)技術(shù)制備了不同比例的海藻酸鹽聚乙烯醇/絲素蛋白羧甲基殼聚糖復(fù)合水凝膠。研究重點(diǎn)在于觀察凝膠化前后材料結(jié)構(gòu)的變化,以及不同絲素蛋白比例對復(fù)合水凝膠溶脹性能和透氣性能的影響。實驗結(jié)果表明,復(fù)合水凝膠具有良好的機(jī)械性能和較高的溶脹度,最高可達(dá)5 658.3%。此外,研究還發(fā)現(xiàn),當(dāng)SF/CMCS比例為6/4,且SA/PVA厚度為1 mm時,復(fù)合水凝膠具有最高的透氣率和溶脹率。為水凝膠材料的設(shè)計和應(yīng)用提供了有價值的指導(dǎo),并為未來的生物醫(yī)學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。

    關(guān)鍵詞:海藻酸鹽;絲素基復(fù)合水凝膠;化學(xué)交聯(lián)

    水凝膠作為一種具有高吸水性和良好生物相容性的生物材料,在組織工程、藥物釋放和傷口愈合等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景[1]。為了進(jìn)一步提高水凝膠的性能,本研究以海藻酸鈉和絲素蛋白為主要原料,采用化學(xué)交聯(lián)技術(shù)制備了不同比例的海藻酸鹽聚乙烯醇/絲素蛋白羧甲基殼聚糖的復(fù)合水凝膠。通過對凝膠化前后材料結(jié)構(gòu)的變化進(jìn)行觀察,以及不同絲素蛋白比例對復(fù)合水凝膠溶脹性能和透氣性能的影響進(jìn)行研究,為水凝膠材料的設(shè)計和應(yīng)用提供理論依據(jù)。

    1研究方法

    1.1海藻酸鹽/絲素基復(fù)合水凝膠的制備設(shè)備

    1.1.1實驗儀器

    實驗儀器包括:水浴鍋、高速離心機(jī)、電子計量秤、紫外可見分光光度計、磁力攪拌器和鼓風(fēng)干燥箱等。

    1.1.2實驗試劑

    實驗試劑包括:蠶繭(絲素)、透析袋、無水碳酸鈉、無水氯化鈣、無水乙醇、羧甲基殼聚糖粉末、海藻酸鹽、碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC)、聚乙烯醇(PVA)和乳酸鈣等。

    1.2海藻酸鹽/絲素基復(fù)合水凝膠的制備方法

    1.2.1絲素蛋白提取

    1.2.1.1蠶繭脫膠

    將1 L去離子水加熱至沸騰,加入5 g無水碳酸鈉粉末,待其完全溶解后,將預(yù)先用精密天平稱取的50 g蠶繭殼用剪刀剪成塊狀,撕去內(nèi)壁,放入0.5% Na2CO3溶液中,邊煮邊攪拌30 min。隨后取出絲并用去離子水清洗2~3次,重復(fù)脫膠3次。置于60 ℃的烘箱中烘干得到純絲素纖維。

    1.2.1.2SF的制備

    取11.1 g CaCl2、9.214 g CH3CH2OH和14.4 g去離子水混合均勻配制成三元溶液。將物質(zhì)的量比為1∶2∶8的三元溶劑(CaCl2、CH3CH2OH、H2O)在(70±5 ℃)的水浴下溶解絲素(質(zhì)量比為1∶10):將烘干的10 g絲素纖維放入100 g物質(zhì)的量比為1∶2∶8的三元溶劑中,在65 ℃的水浴下溶解2 h,直至絲素纖維完全溶解(攪拌時無纖維撕扯感)。將溶解的絲素裝入透析袋中密封,用去離子水透析2天,每4 h換一次水,以除去小分子物質(zhì)。用硝酸銀和碳酸鈉檢驗鈣氯離子,再用高速離心機(jī)在9 000 r/min下離心20 min,得到淺黃色透明的再生SF溶液。采用聚乙二醇進(jìn)行濃縮后,利用比重法測量質(zhì)量分?jǐn)?shù),稱取含4 g的絲素蛋白溶液定容于100 mL容量瓶配制質(zhì)量濃度為4%的SF溶液,置于4 ℃?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.1.3SF蛋白電泳檢測

    (1) 凝膠裝板

    將垂直板型電泳裝置內(nèi)的板狀凝膠模子取出,用蒸餾水沖洗干凈,放在干燥箱(50 ℃)干燥后取出。使玻璃板形成一個“夾心”凝膠腔,用封口膜將下方、左右兩側(cè)封住從而避免出現(xiàn)漏膠。把裝好的凝膠腔置于仰放的電極上槽,將電泳槽、凝膠模子組成的垂直板型電泳裝置垂直放置在水平臺面上,灌注膠液。

    (2) 凝膠制備

    按配方將各工作液混合,將分離膠緩慢注入膠液槽中,上面留出2 cm為以后灌濃縮膠用。在上面均勻緩慢注入蒸餾水,使分離膠表面平直,排除氣泡隔絕空氣隨后放在干燥箱(50 ℃,30 min)待膠凝固后棄水,并用濾紙吸干水分,避免觸碰分離膠。緩慢注入濃縮膠,將梳子插入濃縮膠中,放在干燥箱(50 ℃,30 min)待聚合,緩慢拔出樣梳。

    (3) 含DTT蛋白上樣緩沖液和不含DTT上樣緩沖液的制備

    取60 μL蛋白樣品,分別加入20 μL 5×含DTT上樣緩沖液和不含DTT的上樣緩沖液。

    1 mol/L DTT溶液配制方法:用20 mL 0.01 mol/L乙酸鈉溶液(pH 5.2)溶解3.09 g DTT;1.0 mol/L TrisHCl(pH 6.8) 2 mL,1.0 mol/L DTT 4 mL,SDS 0.8 g,溴芬藍(lán)0.04 g,甘油4 mL,加蒸餾水定容至20 mL。

    4×蛋白上樣緩沖液的配制:2.0 mL 1 mol/L TrisHCl(pH 6.8),0.8 g SDS,4.0 mL甘油,1.0 mL 0.5 mol/L EDTA,8 mg溴酚藍(lán);0.5 mol/L EDTA配制:稱取1.861 g Na2EDTA2H2O,加入約8 mL的去離子水,充分?jǐn)嚢韬笥?0 g NaOH顆粒加去離子水定容至10 mL,pH約至8.0。第一個樣孔加入5 μL蛋白marker,后面各孔加入10 μL標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶解液進(jìn)行上樣,依次為樣品1含DTT、樣品1不含DTT、樣品2含DTT、樣品2不含DTT。

    (4) 電泳

    第一個樣孔加入5 μL蛋白marker,后面各孔加入10 μL標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶解液進(jìn)行上樣,依次為樣品1含DTT、樣品1不含DTT、樣品2含DTT、樣品2不含DTT。加入1×電泳緩沖液(pH 8.3的Tris甘氨酸緩沖液和蒸餾水以4∶1混合),加入上下槽電極液(1×電泳緩沖液),上槽接負(fù)極,下槽接正極,起始電壓為80 V、電流為44 mA,樣品進(jìn)入分離膠后,電壓為150 V、電流在84 mA到94 mA上下浮動。待前沿指示劑到達(dá)分離膠下沿2 cm處(約2 h)停止電泳,結(jié)束后將濃縮膠部分去掉。

    1.2.2PVASA內(nèi)膜水凝膠制備

    1.2.2.1SAPVA水凝膠制備

    各稱取12.5 g氯化鈣和乳酸鈣溶解于2 L的去離子水中,配制復(fù)合鈣溶液。稱取4 g SA溶于100 mL去離子水中,配制質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為4%的SA溶液。稱取20 g PVA放置在200 mL去離子水中,70 ℃溶脹30 min,100 ℃攪拌2 h,配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的PVA溶液。將PVASA以質(zhì)量比2∶1混合,攪拌1 h,靜置脫泡,得到其共混液。

    1.2.2.2SA-PVA水凝膠制備

    將SA-PVA溶液倒入培養(yǎng)皿中,并將內(nèi)膜厚度分別控制在1.0 mm、2.5 mm、4.0 mm。將其浸入復(fù)合鈣溶液中交聯(lián)4 h形成內(nèi)膜凝膠。

    2結(jié)果與分析

    2.1復(fù)合水凝膠的形成與結(jié)構(gòu)變化

    在生物醫(yī)學(xué)材料領(lǐng)域,水凝膠作為一種重要的生物兼容性材料,其制備技術(shù)一直是研究的熱點(diǎn)。EDC[1乙基3(3二甲基氨基丙基)碳二亞胺]化學(xué)交聯(lián)方法,是構(gòu)建水凝膠網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的常用手段之一。以下是對該方法的深入分析:

    首先,EDC化學(xué)交聯(lián)機(jī)制涉及在絲素(Fibroin)與羧甲基殼聚糖(Carboxymethyl Chitosan, CMC)之間形成酰胺鍵,從而構(gòu)筑一個穩(wěn)定的交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)。在此過程中,絲素作為一種源于蠶絲的天然蛋白質(zhì),不僅具有出色的生物相容性和生物降解性,而且其二級結(jié)構(gòu)的改變對水凝膠的最終性能至關(guān)重要。具體而言,絲素二級結(jié)構(gòu)的調(diào)整,如β折疊結(jié)構(gòu)的形成,能夠顯著影響水凝膠的機(jī)械強(qiáng)度和彈性。研究結(jié)果表明,這種復(fù)合水凝膠具有較高的彈性,說明其在承受應(yīng)力時具有良好的形變恢復(fù)能力。這種優(yōu)良的機(jī)械性能對于水凝膠在生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用中的可行性至關(guān)重要,尤其是在組織工程、藥物遞送和生物傳感器等領(lǐng)域[2]。

    2.2溶脹度與透氣性的研究

    溶脹度是水凝膠的關(guān)鍵物理特性之一,它定義為水凝膠在吸水后體積增加的百分比。溶脹度對于水凝膠的應(yīng)用至關(guān)重要,因為它決定了水凝膠在生理環(huán)境中的水分保持能力,進(jìn)而影響其力學(xué)性能和生物學(xué)性能。在當(dāng)前研究中,SAPVA/SFCMCS復(fù)合水凝膠展現(xiàn)出高達(dá)5 658.3%的溶脹度,這一顯著特征表明該水凝膠具有極高的吸水能力,這一特性對于其在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的潛在應(yīng)用具有重要價值[3]。

    高值溶脹度歸因于以下因素:

    (1) 交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)的靈活性:水凝膠的高溶脹度源于其交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)的靈活性。當(dāng)交聯(lián)點(diǎn)之間的距離足夠大時,網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)能夠在水合作用下伸展,允許更多的水分子進(jìn)入并填充網(wǎng)絡(luò)空隙。

    (2) 多孔結(jié)構(gòu):水凝膠的多孔結(jié)構(gòu)提供了大量的孔隙,這些空間在水溶脹時被水分占據(jù),從而增加了溶脹度。

    研究結(jié)果表明,在SF/CMCS的質(zhì)量比為6/4時,以及SA/PVA的厚度為1 mm的條件下,制備的復(fù)合水凝膠展現(xiàn)出最高的透氣率和溶脹率。這一結(jié)果可以解釋如下:在水凝膠制備過程中,SF/CMCS的質(zhì)量比決定了交聯(lián)密度。在6/4的比例下,交聯(lián)密度達(dá)到了一個最佳的平衡點(diǎn),既保證了水凝膠的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性,又保持了足夠的孔隙度以支持高溶脹度;孔隙結(jié)構(gòu)是由水凝膠中交聯(lián)點(diǎn)的分布和密度決定的。在最佳比例下,水凝膠的孔隙結(jié)構(gòu)最有利于水分和氣體的傳輸。

    3結(jié)語

    成功制備了不同比例的SAPVA/SFCMCS復(fù)合水凝膠,并通過實驗觀察了凝膠化前后材料結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果表明,復(fù)合水凝膠具有良好的機(jī)械性能和較高的溶脹度。此外,通過探討不同絲素蛋白比例對復(fù)合水凝膠溶脹性能和透氣性能的影響,發(fā)現(xiàn)SF/CMCS比例為6/4,且SA/PVA厚度為1 mm的復(fù)合水凝膠具有最高的透氣率和溶脹率。本研究為水凝膠材料的設(shè)計和應(yīng)用提供了有價值的指導(dǎo),并為未來的生物醫(yī)學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。

    參考文獻(xiàn):

    [1]V·M·金泰爾,M·西蒙內(nèi)蒂,F(xiàn)·內(nèi)羅蒂,等.海藻酸鹽膨潤土生物復(fù)合水凝膠制備的水蒸氣捕獲用熱質(zhì)交換器及其制造方法:202180062389.0[P].2024-07-17.

    [2]賈新宇,戰(zhàn)藝偉,邢雅成,等.應(yīng)變響應(yīng)抗凍保水海藻酸鈣/聚乙烯醇導(dǎo)電水凝膠[J].山東化工,2023,52(7):12-14.

    [3]宋文山,王園園,杜芬,等.魚皮膠原蛋白殼聚糖復(fù)合海藻酸鹽水凝膠敷料對燒燙傷創(chuàng)面的促愈合作用[J].中國海洋藥物,2018,38(3):46.

    作者簡介:李奉原,男,河南輝縣人,本科在讀,研究方向:絲素蛋白、水凝膠天然再生材料。

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