SENPs 調(diào)控腫瘤放射敏感性的機制及其抑制劑的研究進展

羅 娜 勾文峰 吳紅英 李祎亮

中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院放射醫(yī)學研究所，天津市放射醫(yī)學與分子核醫(yī)學重點實驗室 300192

放療作為治療腫瘤最主要的方法之一，目前已能實現(xiàn)精準定位的高劑量輻射傳送，但是放療后的腫瘤患者仍有很大概率復發(fā)。腫瘤細胞自身產(chǎn)生的放射抵抗性是導致放療失敗的主要原因，因此，如何提高腫瘤細胞的放射敏感性成為當下的研究熱點。小類泛素修飾因子（small ubiquitin-like modifier，SUMO）特異性蛋白酶（SUMO specific proteases，SENPs）的本質(zhì)是肽酶，能水解SUMO 羧基端甘氨酸殘基與靶蛋白賴氨酸殘基之間形成的異肽鍵，還具有加工SUMO 前體蛋白的功能。近年來，關(guān)于SENPs參與調(diào)控腫瘤放射敏感性的研究越來越多，我們總結(jié)了SENPs 調(diào)控腫瘤放射敏感性的機制及其抑制劑的研究進展，旨在為后續(xù)開發(fā)SENPs 抑制劑作為放射增敏藥物奠定理論基礎(chǔ)。

1 SENPs 與小類泛素化修飾（稱為SUMOylation）

翻譯后修飾是一種可逆性的修飾過程，能夠使被修飾的蛋白質(zhì)發(fā)生構(gòu)象和功能上的改變，對信號轉(zhuǎn)導和生理穩(wěn)態(tài)具有重要意義。經(jīng)典的翻譯后修飾主要包括磷酸化、乙?；头核鼗?，SUMOylation（SUMO 共價結(jié)合到底物上的過程）[1]是近年來發(fā)現(xiàn)的另一種重要的蛋白翻譯后修飾類型。

SUMO 與泛素蛋白有18%的同源性[2]，兩者結(jié)構(gòu)相似但是功能有所不同，泛素化通常會導致底物被蛋白酶體降解，而SUMOylation則是通過影響底物的活性、穩(wěn)定性、蛋白-蛋白相互作用和核易位等間接發(fā)揮其生理功能[3]。在人體中已發(fā)現(xiàn)5 種SUMO，包括SUMO1～5，其中SUMO1～3 廣泛存在于各種組織中，然而，SUMO4 和SUMO5 有組織特異性，SUMO4 主要位于腎臟、淋巴結(jié)和脾臟中[4]，SUMO5 目前僅在睪丸和血細胞中被發(fā)現(xiàn)[5]。另外，SUMO2 和SUMO3 具有95%以上的同源性，可以在底物蛋白上形成多聚鏈狀SUMO2/3 修飾標簽，這些多聚鏈狀SUMO2/3 修飾標簽是一種募集泛素連接酶E3 的信號，可導致底物蛋白被修飾蛋白的泛素化和降解；而SUMO1 與SUMO2/3僅有不足50%的序列同源，通常只形成單個SUMO1修飾或聚鏈狀SUMO2/3 修飾標簽的末端修飾[6]。

SUMO 是蛋白質(zhì)的修飾因子，其前體蛋白需要經(jīng)過加工水解掉羧基末端的蛋白暴露出二甘氨酸序列之后才能修飾底物，這個過程由SENPs 催化完成。成熟的SUMO 再經(jīng)由SUMO 激活酶E1、結(jié)合酶E2 和連接酶E3 的級聯(lián)催化共價結(jié)合到底物上。SENPs 是半胱氨酸蛋白酶家族的成員，它還能催化SUMO 與底物之間的異肽鍵斷裂導致其與底物分離，這個過程被稱為去SUMOylation（deSUMOylation）。目前研究者在哺乳動物中發(fā)現(xiàn)了7 種SENP 肽酶，包括SENP1、SENP2、SENP3、SENP5、SENP6、SENP7 和SENP8，它們在細胞中的定位不同，而且對蛋白的親和性也不同。SENP1和SENP2 可以在細胞核和細胞質(zhì)之間穿梭，對SUMO1、SUMO2 和SUMO3 均有較高的親和性；SENP3 和SENP5 主要位于核仁；而SENP6 和SENP7位于核質(zhì)。SENP5、SENP6 和SENP7 對SUMO2 和SUMO3 的親和性高于SUMO1。目前有研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在所有的SENPs 中，只有SENP1、SENP2 和SENP5 具有催化SUMO 前體成熟的作用，而SENP8 比較特殊，它的底物是泛素樣蛋白NEDD8而不是SUMO[7]。

2 SENPs 與腫瘤放射敏感性

近年來，關(guān)于SENPs 參與調(diào)控腫瘤放射敏感性的相關(guān)研究越來越多。Eschrich 等[8]利用數(shù)據(jù)庫對48 種腫瘤細胞系的數(shù)據(jù)進行擬合，建立了一個放射敏感性的信號網(wǎng)絡(luò)模型，研究結(jié)果表明SUMO是其中的關(guān)鍵樞紐，這提示SUMOylation 循環(huán)可能與腫瘤放射敏感性密切相關(guān)。Wang 等[9]用小干擾RNA 沉默肺癌細胞的SENP1，顯著增強了照射引起的細胞周期阻滯和細胞凋亡。Yang 等[10]的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在肺癌細胞中上調(diào)微小RNA-138 能抑制SENP1 的表達，進而產(chǎn)生放射增敏的效果。Qian 等[11]的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肝癌細胞沉默SENP6以后，其增殖能力下降，而放射敏感性增強。上述證據(jù)均表明，SENPs 在腫瘤放療抵抗的過程中發(fā)揮著重要作用，是潛在的放射增敏靶點。

3 SENPs 與腫瘤放射敏感性的作用機制

3.1 SENPs 與DNA 損傷修復

放療通過直接或間接地損傷腫瘤細胞的DNA從而達到抑制其復制、誘導腫瘤細胞凋亡或壞死的目的，但是腫瘤細胞本身存在著DNA 損傷修復機制，放射誘導的DNA 損傷修復機制是腫瘤細胞產(chǎn)生放射抵抗的主要原因之一。在DNA 損傷修復的過程中，有許多蛋白通過發(fā)生SUMOylation 而改變自身的活性或功能。比如參與DNA 雙鏈修復的Rad52 發(fā)生SUMOylation 能改變自身構(gòu)象從而抑制其與DNA 的結(jié)合和退火，影響DNA 修復的效率[12]；此外，復制蛋白A70 的SUMOylation 在同源重組介導的DNA 雙鏈斷裂修復中必不可少，其SUMOylation 有助于Rad51 募集到DNA 的損傷位點，以啟動DNA 損傷修復[13]；胸腺嘧啶DNA 糖基化酶（TDG）是堿基切除修復過程中的關(guān)鍵酶，它通過轉(zhuǎn)移胸腺嘧啶和尿嘧啶來啟動錯配的G/T和G/U 修復，研究結(jié)果表明SUMOylation 可以調(diào)控TDG 的釋放[14]。

總體來看，SUMOylation 的發(fā)生對DNA 損傷修復有促進作用[15]，由于SENPs 可對SUMO 進行修飾從而改變其表型或者影響SUMO 從結(jié)合的底物上游離出來，所以SENPs 的功能失調(diào)也會阻礙DNA損傷的修復作用。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，敲除除了SENP3以外的任意SENP，對同源重組修復和非同源末端連接都會產(chǎn)生不同程度的影響。比如SENP6 的缺失會大大增加SUMO2/3 修飾標簽的比重，并增加早幼粒細胞白血病蛋白核體的SUMOylation，這表明其具有編輯SUMO2/3 修飾標簽的功能[16]；沉默SENP6 阻礙DNA 損傷修復的效應(yīng)，可以通過加入外源的SUMO 蛋白而恢復，這又提示SENP6 在DNA 損傷修復的過程中能增加SUMO 的表達從而發(fā)揮作用；然而，沉默SENP7 對同源重組修復的影響卻不能通過加入外源的SUMO 恢復，但SENP7能通過調(diào)控KRAB 相關(guān)蛋白1 發(fā)揮促進染色質(zhì)松弛的作用，這也有利于DNA 損傷修復的進行[17]。Jin等[18]的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SENP5 對共濟失調(diào)毛細血管擴張突變基因rad3 相關(guān)（ataxia telangiectasia and rad3-related，ATR）激酶的deSUMOylation 作用在ATR 信號通路應(yīng)答DNA損傷修復中扮演著重要角色，突變ATR 相互作用蛋白的SUMOylation 位點會抑制ATR 信號通路的激活，SENP5 缺失的細胞DNA 損傷修復作用減弱。

3.2 SENPs 與細胞周期

細胞周期檢查點是細胞周期中的一種保證DNA 復制和染色體分配質(zhì)量的負反饋檢查機制，研究結(jié)果表明，細胞在G0/G1 期及S 期對輻射的敏感性較低，而在G2/M 期對輻射的敏感性較高[19]。據(jù)報道，SENPs 家族的一些成員有調(diào)控細胞周期進程的功能，比如，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，酵母中SENPs的同源物Ubl 特異性蛋白酶1 是參與細胞周期調(diào)控的重要因子[20]。Kuo 等[21]的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SENP3通過對核磷蛋白等細胞周期蛋白的deSUMOylation作用抑制了原癌基因的產(chǎn)生。Klein 等[22]的實驗結(jié)果表明，SENP3 和結(jié)合酶E2 RanBP2 在有絲分裂過程中參與染色體的排列和紡錘體的形成。Wei等[23]的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SENP3 的磷酸化抑制其對拓撲異構(gòu)酶Ⅱ等蛋白的deSUMOylation 活性，導致細胞周期阻滯，同時也降低了染色體的穩(wěn)定性。Di Bacco 等[24]的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，敲降SENP5 會導致細胞核形態(tài)缺陷，阻礙細胞增殖。Wang 等[9]用小干擾RNA 沉默人肺癌細胞A549 中的SENP1，使細胞發(fā)生了G0/G1 期阻滯。Xu 等[25]在人結(jié)直腸腺癌細胞DLD1 中敲降SENP1，使周期蛋白依賴性激酶抑制因子p16、p19、p21 和p27 的表達增加，這些抑制因子進一步促使細胞發(fā)生G1 期阻滯。這些證據(jù)均表明，SENPs 參與腫瘤細胞的放射敏感性調(diào)控可能與其改變細胞周期的分布有關(guān)。

3.3 SENPs 與乏氧誘導因子（hypoxia induced factor，HIF）1 蛋白

細胞對輻射的敏感性與其氧含量密切相關(guān)，乏氧條件下培養(yǎng)的細胞與常氧條件下培養(yǎng)的細胞相比放射抵抗性提高了3 倍。乏氧誘導因子HIF 是促進腫瘤在乏氧微環(huán)境下維持自身生長、代謝、浸潤和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子[26]，其誘導細胞產(chǎn)生放射抵抗性已有多篇文獻報道，研究結(jié)果表明，HIF1 可通過促進細胞增殖[27]、增強細胞干性[28]以及提高細胞對活性氧的耐受力等多種途徑減弱腫瘤的放射敏感性[29]。

乏氧條件下SENP1 是HIF1 表達的關(guān)鍵調(diào)控分子。Cheng 等[30]的研究結(jié)果表明，SENP1 通過deSUMOylation 作用穩(wěn)定HIF1α 的表達，敲除小鼠的SENP1 基因使HIF1 下游基因的表達減少。Ao等[31]的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SENP1 通過上調(diào)HIF1α 使卵巢癌細胞對順鉑產(chǎn)生耐藥性。Wang 等[32]的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SENP1 和HIF1α 之間的正反饋循環(huán)有利于骨肉瘤細胞在乏氧狀態(tài)下的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)化。Cui 等[33]的研究結(jié)果表明，HIF1α 高表達將增強肝癌細胞的細胞干性及其遷移能力，SENP1 與HIF1α 之間形成正反饋循環(huán)，抑制SENP1 能有效減弱肝癌細胞的細胞干性。這些研究結(jié)果為SENP1調(diào)控腫瘤細胞的放射敏感性提供了有力的理論依據(jù)。

4 SENPs 抑制劑的研究進展

綜上所述，SENPs 作為放射增敏的新靶點，其抑制劑經(jīng)過改良和優(yōu)化后可作為新型放射增敏藥物。目前SENPs 抑制劑，尤其是SENP1 抑制劑，已經(jīng)有一部分正處于臨床研究階段。根據(jù)結(jié)構(gòu)特征和發(fā)現(xiàn)來源可以把SENP 的抑制劑分為如下幾類：短發(fā)卡RNA（short hairpin RNA，shRNA）類、肽類和擬肽類、合成小分子類、虛擬篩選類及天然產(chǎn)物來源類。

4.1 shRNA

shRNA 中含有兩個短反向重復序列，通過中間莖環(huán)序列分隔，組成發(fā)卡結(jié)構(gòu)。王立生等[34]設(shè)計并制備了靶向SENP1 mRNA 的shRNA，該shRNA（ 5 ′-CCGGGCGCCAGAUUGAAGAACAGAACUC GAGUUCUGUUCUUCAAUCUGGCGCUUUUU-3′）能夠從轉(zhuǎn)錄水平上抑制SENP1 的表達。

4.2 肽類和擬肽類

對SUMO 結(jié)構(gòu)進行模擬構(gòu)建得到的擬肽分子能與SUMO 競爭性地結(jié)合SENPs，這種肽類和擬肽類抑制劑是研究最早的抑制劑類型。Hemelaar等[35]將乙烯基砜引入SUMO1 蛋白的羧基末端，得到修飾后的SUMO1 蛋白（表1 中序號1），SENP2（靶點為cSENP2）催化中心的半胱氨酸的巰基可與其發(fā)生邁克爾加成反應(yīng)，實現(xiàn)不可逆的抑制效果。Dobrot?等[36]合成了靶向SENP1（靶點為rSENP1）和SENP2（靶點為rSENP2）肽基活性位點的探針（表1中序號2），該化合物的7 殘基肽段結(jié)構(gòu)[F（A）QQQTGG]能被SENP1 和SENP2 識別。

Ponder 等[37]以惡性瘧原蟲SENP1 為靶點對半胱氨酸蛋白酶抑制劑庫進行篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，一類含有環(huán)氧基團的小分子擬肽化合物JCP-666（表1中序號3）有著較好的抑制效果（半抑制濃度IC50=17.9 μmoL），但穩(wěn)定性較差；去除化合物JCP-666結(jié)構(gòu)中天冬氨酸殘基側(cè)鏈的羧基基團后得到化合物VEA-260（表1 中序號4），該化合物的穩(wěn)定性顯著提高，并且保留了原有的抑制活性（IC50=16.2 μmoL）；進一步研究結(jié)果表明，兩種化合物對重組人SENP1（rhSENP1）和SENP2（rhSENP2）表現(xiàn)出優(yōu)異的抑制活性，JCP-666 對人SENP1 和SENP2的IC50分別為9.0 μmoL 和4.7 μmoL，VEA-260 對人SENP1 和SENP2 的IC50則分別為7.1 μmoL 和3.7 μmoL。Albrow 等[38]在VEA-260 的基礎(chǔ)上繼續(xù)進行改造，得到芳酰氧基甲酮類化合物VEA-499（表1 中序號5），其對人SENP1 和SENP2 的IC50則分別為3.6 μmoL 和0.25 μmoL，這與其對SENP6（IC50＞60 μmoL）和SENP7（IC50＞100 μmoL）的抑制效果相比有著較高的選擇性，該類化合物作為活性位點探針在復雜的蛋白質(zhì)組中表現(xiàn)出高度特異性?；衔?（表1 中序號6）含有泛素序列，對人SENP6和SENP7 表現(xiàn)出了明顯的抑制活性，IC50分別為4.2 μmoL 和4.3 μmoL[38]。

4.3 合成小分子類

雖然肽類和擬肽類表現(xiàn)出較好的抑制活性，但是該類化合物往往藥代動力學性質(zhì)較差，因此研究更具有成藥性的小分子抑制劑是另一個研發(fā)方向。Qiao 等[39]設(shè)計并合成了一系列苯并二氮雜卓類SENP1 抑制劑，其中化合物7（表1 中序號7）和8（表1 中序號8）抑制SENP1 的IC50分別為15.5 μmoL和9.2 μmoL，抑制前列腺癌細胞PC3 生長的IC50分別為13.0 μmoL 和35.7 μmoL，構(gòu)效關(guān)系研究結(jié)果表明，苯甲?；鶄?cè)鏈的取代基種類和位置對化合物的活性影響很大，C（3′）位引入芐氧基甲酰胺基（-NHCbz）時活性最佳，如果轉(zhuǎn)移到C（4′）位或者替換成叔丁氧基甲酰胺基（-NHBoc）和乙酰氨基（-NHAc）時，化合物活性顯著降低；進一步研究結(jié)果表明，4 位的甲?；鶎衔锘钚酝瑯语@著，分子對接實驗結(jié)果表明，4 位甲酰基能夠與SENP1催化中心的Cys603 殘基發(fā)生共價結(jié)合，這可能是該類化合物產(chǎn)生SENP1 抑制活性的原因。Uno 等[40]合成的二苯基脲類化合物GN6767（表1 中序號9）能夠有效降低HIF1α 的轉(zhuǎn)錄活性，經(jīng)生物素標記后發(fā)現(xiàn)，該化合物的作用靶點為SENP1（cSENP1），其IC50＞100 μmoL。在化合物GN6767 的基礎(chǔ)上小幅度修改后得到化合物GN6860（表1 中序號10）和GN6958（表1 中序號11），兩者均展現(xiàn)出較好的SENP1（cSENP1）抑制活性，其IC50分別為39.5 μmoL 和29.6 μmoL。

4.4 虛擬篩選類

近年來，計算機虛擬篩選在小分子抑制劑的鑒定和優(yōu)化中發(fā)揮了越來越重要的作用。Chen 等[41]將來自SPECS 化合物文庫的18 萬種化合物與SENP1-SUMO2-RanGAP1 晶體結(jié)構(gòu)中的SENP1 進行分子對接，發(fā)現(xiàn)苯甲酰氨基苯鉀酸酯類化合物12（表1 中序號12）的抑制活性最佳，IC50為2.39 μmoL，對該化合物進行結(jié)構(gòu)修飾得到化合物13 和14（表1 中 序 號13 和14），其IC50分 別 為1.18 μmoL 和1.08 μmoL。分子對接結(jié)果表明，該類化合物的酰胺氮原子和4-氯苯甲酰甲氧基上的羰基氧原子分別與SENP1 催化中心的His529 和Gln597 殘基形成氫鍵，使化合物分子能夠穩(wěn)定占據(jù)SENP1 的催化位點。Zhao 等[42]采用類似的方法將SPECS 化合物文庫中的化合物與SENP1-preSUMO2晶體結(jié)構(gòu)中的SENP1 進行虛擬篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)11 個化合物的IC50＜50 μmoL，其中的化合物15（表1 中序號15）的IC50為15.0 μmoL，化合物16（表1 中序號16）的IC50為17.6 μmoL，選取它們作為先導化合物進行改造，得到化合物17 和18（表1 中序號17、18），對SENP1 的IC50分別為4.9 μmoL 和3.5 μmoL，分子對接結(jié)果表明，SENP1疏水腔中的His529、Val532、Leu466 和Gln597 殘基參與相關(guān)氫鍵的形成。

表 1 SENPs 抑制劑Table 1 Inhibitors of small ubiquitin-like modifier specific proteases inhibitors

續(xù)表 1 SENPs 抑制劑Table (continued) 1 Inhibitors of small ubiquitin-like modifier specific proteases inhibitors

續(xù)表 1 SENPs 抑制劑Table (continued) 1 Inhibitors of small ubiquitin-like modifier specific proteases inhibitors

Madu 等[43]使用GLIDE 程序?qū)?5 萬種化合物進行虛擬篩選，得到了40 種對SENP1、SENP2 和SENP7 表現(xiàn)出抑制活性的候選化合物，并提出了基于磺酰苯基的新型SENPs 抑制劑，其中化合物19（表1 中序號19）的抑制效果最優(yōu)，對SENP1、SENP2 和SENP7 的IC50分別為2.1、 2.0、 2.7 μmoL，進一步的核磁共振和定量酶動力學實驗結(jié)果證實了這些化合物的抑制作用屬于可逆的非競爭性抑制。

Kumar 等[44]采用分層虛擬篩選和基于定量熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)相結(jié)合的方法發(fā)現(xiàn)了新型1,2,5-惡二唑類SENP1/2 抑制劑，即化合物20、21 和22（表1 中序號20、21、22），其抑制SENP1 的IC50分別為4.4、4.7、4.5 μmoL，同時對SENP2也表現(xiàn)出抑制活性。Wen 等[45]采用虛擬篩選的方法從化合物文庫中篩選得到117 個含有不同骨架類型的小分子化合物，其中化合物23（表1 中序號23）表現(xiàn)出對SENP1 顯著的抑制活性，其IC50為1.29 μmoL，分子對接實驗結(jié)果表明，化合物23 占據(jù)了SUMO 蛋白羧基端二甘氨酸序列在SENP1 催化區(qū)域的位置，丙烯酸酯部分的羰基氧原子能夠與SENP1 催化中心的His529 形成關(guān)鍵氫鍵，其芳香環(huán)能夠與疏水腔的多個氨基酸殘基形成π-π 相互作用，對化合物與SENP1 的結(jié)合起到穩(wěn)定作用。

4.5 天然產(chǎn)物來源類

Ambaye 等[46]通過二維核磁共振和分子對接等方法發(fā)現(xiàn)鏈黑菌素（表1 中序號24）能夠結(jié)合并抑制SENP1 的活性，而且對SENP1 的抑制選擇性（IC50=0.52 μmoL）明顯高于SENP2（IC50=6.92 μmoL）和SENP6（IC50=5.21 μmoL）。進一步的研究結(jié)果表明，鏈黑菌素能顯著降低HIF1α 蛋白水平，這說明SENP1 在HIF1α 相關(guān)通路中起到非常重要的作用。Vialinin A（表1 中序號25）及其類似物Thelephantin G（表1 中序號26）是兩種提取自可食用菌的對三聯(lián)苯多酚化合物，Yoshioka 等[47]分別用人SENP1 催化結(jié)構(gòu)域（cSENP1）和rhSENP1 對Vialinin A 和Thelephantin G 進行活性測試，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Vialinin A對cSENP1 和rhSENP1 的IC50分 別 為1.89 μmoL和1.64 μmoL，Thelephantin G 對cSENP1 和rhSENP1的IC50分別為1.52 μmoL 和2.48 μmoL。進一步研究結(jié)果表明，去掉結(jié)構(gòu)中的苯甲（乙）酸酯或者將酚羥基氧化成醌后，化合物的活性均明顯下降。Huang等[48]報道了天然產(chǎn)物雷公藤內(nèi)酯（表1 中序號27）能在mRNA 和蛋白質(zhì)水平上降低SENP1 表達。此外，Wu 等[49]確認地膚子皂苷Ic（表1 中序號28）能直接與SENP1 作用，對cSENP1 的IC50為15.37 μmoL，且能使前列腺癌PC3 細胞發(fā)生G2/M期阻滯，同時誘導其凋亡。

5 小結(jié)與展望

SENPs 影響著基因轉(zhuǎn)錄、細胞凋亡、細胞周期進程和DNA 修復等多個生理過程，且對腫瘤的放射敏感性具有調(diào)控作用。但SENPs 的下游靶點非常廣泛，其調(diào)控放射敏感性的機制尚未闡釋清楚，因此很有必要從分子生物學的角度對其開展深入研究。同時，開發(fā)SENPs 抑制劑或可為開發(fā)放射增敏藥物提供新的思路。雖然目前已有部分抑制劑處于研發(fā)中，但存在著藥代性質(zhì)不佳和選擇性差等問題，在諸多候選化合物中篩選出活性更高的SENPs 抑制劑并對其進行深入的構(gòu)效關(guān)系研究也值得關(guān)注和探索。

利益沖突本研究由署名作者按以下貢獻聲明獨立開展，不涉及任何利益沖突。

作者貢獻聲明羅娜負責綜述的撰寫；勾文峰、吳紅英負責綜述的審閱與修訂；李祎亮負責綜述命題的提出、綜述框架的構(gòu)建。