線粒體翻譯起始因子（MTIF2）基因甲基化的特征及其與肝細(xì)胞癌發(fā)生的相關(guān)性分析

摘要：目的結(jié)合生物信息學(xué)分析方法對(duì)線粒體翻譯起始因子（MTIF2）基因的甲基化特征進(jìn)行分析，并探討其與肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。方法應(yīng)用MethSurv、EWAS Data Hub軟件對(duì)MTIF2甲基化樣本進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化分析和聚類(lèi)分析，內(nèi)容包括生存曲線分析、甲基化特征分析、腫瘤信號(hào)通路相關(guān)性及泛癌數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)分析。計(jì)量資料兩組間比較采用成組t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。使用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型基于患者CpG部位的甲基化水平執(zhí)行單變量和多變量生存分析。通過(guò)Kaplan-Meier圖標(biāo)識(shí)較低和較高甲基化患者組之間的生存差異。Log-likelihood ratio法用于組間生存差異分析。結(jié)果MTIF2甲基化整體聚類(lèi)表明在種族、人種、BMI、年齡等特征間MTIF2基因甲基化水平?jīng)]有明顯差異。Kaplan-Meier生存曲線分析發(fā)現(xiàn)，MTIF2基因N-Shore高甲基化的患者預(yù)后明顯好于低甲基化患者（HR=0.492，Plt;0.001），而CpG island和S-Shore甲基化的高低與生存率無(wú)明顯差異（P值均gt;0.05）?；诓煌挲g、性別、BMI、人種、種族、臨床分期繪制MTIF2基因甲基化譜發(fā)現(xiàn)，隨年齡增長(zhǎng)會(huì)降低MTIF2基因N-Shore和CpG island的甲基化水平，白種人的MTIF2基因N-Shore的甲基化水平明顯低于亞洲人（Plt;0.05），臨床分期Ⅳ期患者M(jìn)TIF2基因N-Shore和CpG island的甲基化水平明顯低于Ⅰ/Ⅱ期患者（P值均lt;0.05）。臨床驗(yàn)證試驗(yàn)表明，Ⅲ/Ⅳ期肝細(xì)胞癌患者M(jìn)TIF2甲基化水平明顯低于Ⅰ/Ⅱ期患者（Plt;0.05），且低于健康人群（Plt;0.05）。結(jié)論MTIF2基因N-Shore低甲基化是肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的危險(xiǎn)因素。

關(guān)鍵詞：線粒體翻譯起始因子；甲基化；癌，肝細(xì)胞；計(jì)算生物學(xué)

基金項(xiàng)目：四川省自然科學(xué)基金（2022NSFSC1415）；西部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院應(yīng)用基礎(chǔ)研究項(xiàng)目（2021-XZYG-C22）

Characteristics of mitochondrial translational initiation factor 2 gene methylation and its association with the development of hepatocellular carcinoma

XIE Huajie1，CHANG Kai1，WANG Yanyan1，NA Wanlin1，CAI Huan1，LIU Xia1，JIANG Zhongyong2，HU Zonghai1，LIU Yuan1

1.Department of Clinical Laboratory，The General Hospital of Western Theater Command，Chengdu 610083，China；2.Department of Clinical Laboratory，Affiliated Cancer Hospital of Chengdu Medical College，Chengdu Seventh People’s Hospital，Chengdu 610041，China

Corresponding author：CHANG Kai，ck8148@126.com（ORCID：0000-0001-6013-9256）

Abstract：Objective To investigate the characteristics of mitochondrial translational initiation factor 2（MTIF2）gene methylation and its association with the development and progression of hepatocellular carcinoma（HCC）.Methods MethSurv and EWAS Data Hub were used to perform the standardized analysis and the cluster analysis of MTIF2 methylation samples，including survival curve analysis，methylation signature analysis，the association of tumor signaling pathways，and a comparative analysis based on pan-cancer database.The independent-samples t test was used for comparison between two groups；a one-way analysis of variance was used for comparison between multiple groups，and the least significant difference t-test was used for further comparison between two groups.The Cox proportional hazards model was used to perform the univariate and multivariate survival"analyses of methylation level at the CpG site.The Kaplan-Meier method was used to investigate the survival differences between the patients with low methylation level and those with high methylation level，and the Log-likelihood ratio method was used for survival difference analysis.Results Global clustering of MTIF2 methylation showed that there was no significant difference in MTIF2 gene methylation level between different races，ethnicities，BMI levels，and ages.The Kaplan-Meier survival curve analysis showed that the patients with N-Shore hypermethylation of the MTIF2 gene had a significantly better prognosis than those with hypomethylation（hazard ratio［HR］=0.492，Plt;0.001），while there was no significant difference in survival rate between the patients with different CpG island and S-Shore methylation levels（Pgt;0.05）.The methylation profile of the MTIF2 gene based on different ages，sexes，BMI levels，races，ethnicities，and clinical stages showed that the N-Shore and CpG island methylation levels of the MTIF2 gene decreased with the increase in age，and the Caucasian population had significantly lower N-Shore methylation levels of the MTIF2 gene than the Asian population（Plt;0.05）；the patients with clinical stageⅣhad significantly lower N-Shore and CpG island methylation levels of the MTIF2 gene than those with stageⅠ/Ⅱ（Plt;0.05）.Clinical validation showed that the patients with stageⅢ/ⅣHCC had a significantly lower methylation level of the MTIF2 gene than those with stageⅠ/ⅡHCC and the normal population（Plt;0.05）.Conclusion N-Shore hypomethylation of the MTIF2 gene is a risk factor for the development and progression of HCC.

Key words：Mitochondrial Translation Initiation Factor；Methylation；Carcinoma，Hepatocellular；Computational Biology

Research funding：Natural Science Foundation of Sichuan Province（2022NSFSC1415）；Management Project of General Hospital of Western Theater Command（2021-XZYG-C22）

肝細(xì)胞癌（HCC）是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤，其死亡率逐年升高。HCC的發(fā)生發(fā)展受一系列遺傳因素和環(huán)境因素的共同作用，其致病機(jī)制復(fù)雜多樣［1］。目前手術(shù)切除仍然是HCC最有效的治療方法，但術(shù)后的高復(fù)發(fā)率使得患者的預(yù)后并不理想［2］。已知在HCC組織存在全基因組低DNA甲基化和高DNA甲基化區(qū)域，DNA甲基化介導(dǎo)的腫瘤抑制基因啟動(dòng)子失活是HCC發(fā)展的重要機(jī)制。但HCC中異常表達(dá)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA的DNA甲基化研究仍處于初始階段。研究發(fā)現(xiàn)關(guān)鍵基因DNA甲基化大量參與生命活動(dòng)調(diào)節(jié)、細(xì)胞增殖、腫瘤發(fā)生等生物進(jìn)程［3］，并在HCC的發(fā)生與術(shù)后復(fù)發(fā)機(jī)制中扮演重要角色［4］。研究表明線粒體翻譯起始因子2（mitochondrial translation initiation factor 2，MTIF2）可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、遷移和凋亡、肝炎病毒激活等過(guò)程影響HCC的發(fā)生發(fā)展，并認(rèn)為MTIF2在HCC診療過(guò)程中有充當(dāng)生物標(biāo)志物的潛質(zhì)，然而其具體的參與機(jī)制并不明確［5］。本課題組前期數(shù)據(jù)表明，MTIF2的蛋白質(zhì)表達(dá)水平與腫瘤的復(fù)發(fā)具有顯著相關(guān)性，同時(shí)發(fā)現(xiàn)HCC復(fù)發(fā)與MTIF2的甲基化水平同樣具有相關(guān)性。為了進(jìn)一步分析MTIF2甲基化與HCC的關(guān)系，本研究擬通過(guò)對(duì)已有的關(guān)于MTIF2的甲基化研究進(jìn)行梳理，結(jié)合生物信息學(xué)分析方法對(duì)MTIF2進(jìn)行分析，探討其參與HCC發(fā)生發(fā)展的可能機(jī)制，以期為今后HCC發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1數(shù)據(jù)庫(kù)收集收集TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)癌癥數(shù)據(jù)集25個(gè)（LAML、ACC、BCLA、LGG、BRCA、CESC、COAD、ESCA、GBM、HNSC、KICH、KIRC、KIRP、LIHC、LUSD、LUSC、MESO、PAAD、READ、SARC、SKCM、STAD、UCS、UCEC、UVM）。應(yīng)用MethSurv軟件、EWAS Data Hub軟件對(duì)MTIF2甲基化樣本進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化分析和聚類(lèi)分析［6］。參考數(shù)據(jù)庫(kù)包括GEO、ArrayExpress和Encode數(shù)據(jù)庫(kù)。

1.2 MTIF2基因單個(gè)CpG聚類(lèi)分析以LIHC TCGA癌癥數(shù)據(jù)集為基礎(chǔ)，MTIF2為目標(biāo)基因單個(gè)CpG進(jìn)行聚類(lèi)分析，將甲基化水平與可用的患者特征和基因亞區(qū)域相關(guān)聯(lián)。繪制熱圖，甲基化水平顯示為從藍(lán)色到紅色的連續(xù)變量。

1.3 MTIF2基因甲基化生存曲線分析以LIHC TCGA數(shù)據(jù)集為基礎(chǔ)數(shù)據(jù)集，分別查詢(xún)基因N-Shore、island和S-Shore，CpG位點(diǎn)選用已知的11個(gè)探針（cg27478579、cg15024566、cg18482098、cg05986680、cg27235690、cg20497627、cg22645636、cg05319060、cg18752448、cg00704126、cg10455676）進(jìn)行匹配［7］。分割點(diǎn)為中線進(jìn)行高低甲基化分組分析。

1.4 MTIF2基因甲基化特征分析基于不同患者特征（年齡、性別、BMI、人種、種族、臨床分期）分析MTIF2基因N-Shore甲基化譜。納入數(shù)據(jù)庫(kù)檢索人群共377例，繪制小提琴圖用于表示不同樣本組間甲基化差異，用以查詢(xún)MTIF2基因CpG位點(diǎn)的甲基化分布、中位數(shù)和四分位數(shù)范圍與患者特征，包含年齡、性別、BMI、人種、種族、臨床分期。甲基化水平按中值線（Median值）進(jìn)行劃分，高于該值為高甲基化，反之為低甲基化。

1.5 MTIF2基因甲基化的All Cancer數(shù)據(jù)庫(kù)分析應(yīng)用MethSurv軟件、EWAS Data Hub軟件分析MTIF2基因CpG位點(diǎn)在其他癌型中的甲基化情況，對(duì)癌癥類(lèi)型、相關(guān)性、95%CI、P值進(jìn)行分析。并以P值大小排序，剔除非顯著性數(shù)據(jù)（Pgt;0.01）。

1.6 MTIF2基因甲基化臨床樣本驗(yàn)證選取西部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院2024年5月—6月的HCCⅢ/Ⅳ期患者10例，Ⅰ/Ⅱ期患者10例，無(wú)合并其他腫瘤，無(wú)免疫系統(tǒng)疾病，無(wú)糖尿病、高血壓；另選取正常健康者10例作為對(duì)照組。采集外周血用于甲基化水平檢測(cè)，樣本檢測(cè)依托成都元極生物科技公司。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料采用±s表示，兩組間比較采用成組t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。使用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型基于患者CpG部位的甲基化水平執(zhí)行單變量和多變量生存分析，變量包含患者CpG部位的甲基化水平，死亡事件（使用Forward：LR法）。通過(guò)Kaplan-Meier圖標(biāo)識(shí)較低和較高甲基化患者之間的生存差異。Log-likelihood ratio法用于組間生存差異分析。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 MTIF2基因單個(gè)CpG聚類(lèi)分析LIHC TCGA癌癥數(shù)據(jù)集為基礎(chǔ)，設(shè)置目標(biāo)基因?yàn)镸TIF2，應(yīng)用已知的11個(gè)探針對(duì)單個(gè)CpG進(jìn)行聚類(lèi)分析，將甲基化水平與患者特征和基因亞區(qū)域相關(guān)聯(lián)。結(jié)果表明：在種族、人種、BMI、年齡等方面MTIF2基因甲基化水平?jīng)]有明顯差異（圖1）。

2.2 MTIF2基因N-Shore甲基化生存曲線分析依照MTIF2的甲基化密度圖進(jìn)行分組，中值線（Median=0.056）左側(cè)為低甲基化（n=189），右側(cè)為高甲基化（n=188）（圖2a）。使用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型基于患者CpG部位的N-Shore甲基化水平進(jìn)行單變量和多變量生存分析。Kaplan-Meier生存分析曲線結(jié)果顯示，高甲基化患者的預(yù)后明顯好于低甲基化患者（HR=0.492，Plt;0.001）（圖2b）。

2.3 MTIF2基因N-Shore甲基化不同特征間的差異隨著年齡增長(zhǎng)，患者的甲基化水平逐漸降低（Plt;0.05）；白種人的甲基化水平低于亞洲人（Plt;0.05）；臨床分期Ⅳ期患者的甲基化水平明顯低于Ⅰ/Ⅱ期患者（P值均lt;0.05）。不同性別、BMI和種族人群的MTIF2基因N-Shore甲基化水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均gt;0.05）（圖3）。

2.4 MTIF2基因CpG island甲基化生存曲線分析依照MTIF2的甲基化密度圖進(jìn)行分組，中值線（Median=0.027）左側(cè)為低甲基化（n=189），右側(cè)為高甲基化（n=188）（圖4a）。使用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型基于患者CpG island甲基化水平進(jìn)行單變量和多變量生存分析。通過(guò)Kaplan-Meier生存分析曲線可以看出，MTIF2基因CpG island甲基化的高低與生存率無(wú)直接關(guān)系（HR=1.016，P=0.93）（圖4b）。

2.5 MTIF2基因CpG island甲基化不同特征間的差異隨著年齡增長(zhǎng)，患者的甲基化水平降低（Plt;0.05）；黑人或非洲裔美國(guó)人的甲基化水平低于亞洲人和白種人（P值均lt;0.05）；臨床分期Ⅳ期患者的甲基化水平明顯低于Ⅰ/Ⅱ期患者（P值均lt;0.05）。不同性別、BMI和種族MTIF2基因CpG island甲基化水平不存在明顯差異（P值均gt;0.05）（圖5）。

2.6 MTIF2基因S-Shore甲基化生存曲線分析依照MTIF2的甲基化密度圖進(jìn)行分組，中值線（Median=0.756）左側(cè)為低甲基化（n=189），右側(cè)為高甲基化（n=188）（圖6a）。使用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型基于患者S-Shore甲基化水平執(zhí)行單變量和多變量生存分析。通過(guò)Kaplan-Meier生存分析曲線可以看出，MTIF2基因S-Shore甲基化的高低與生存率無(wú)直接關(guān)系（HR=0.906，P=0.57）（圖6b）。

2.7 MTIF2基因S-Shore甲基化不同特征間的差異BMI在21.7～24.3 kg/m2時(shí)甲基化水平較高；黑人或非洲裔美國(guó)人的甲基化水平低于亞洲人和白種人（P值均lt;0.05）。不同年齡、性別、種族和臨床分期的MTIF2基因S-Shore甲基化水平不存在明顯差異（P值均gt;0.05）（圖7）。

2.8 MTIF2基因甲基化的All Cancer數(shù)據(jù)庫(kù)分析對(duì)MTIF2基因甲基化的所有探針進(jìn)行All Cancer數(shù)據(jù)庫(kù)分析，得到294個(gè)比對(duì)項(xiàng)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行篩選后得到20個(gè)符合項(xiàng)（表1）。其中4個(gè)數(shù)據(jù)子集與HCC具有相關(guān)性（P值均lt;0.05）。

2.9 MTIF2基因甲基化的驗(yàn)證分析經(jīng)MTIF2甲基化檢測(cè)，應(yīng)用單因素方差分析進(jìn)行差異顯著性分析，結(jié)果表明HCCⅢ/Ⅳ期患者M(jìn)TIF2甲基化水平明顯低于Ⅰ/Ⅱ期患者（32.66±3.38 vs 37.96±1.36，P=0.001），Ⅰ/Ⅱ期患者M(jìn)TIF2甲基化水平明顯低于正常人群（37.96±1.36 vs 41.75±2.41，P=0.010），HCCⅢ/Ⅳ期患者M(jìn)TIF2甲基化水平明顯低于正常人群（32.66±3.38 vs 41.75±2.41，Plt;0.05）。

3討論

研究發(fā)現(xiàn)MTIF2的甲基化與子宮頸癌的生存率顯著相關(guān)，在宮頸上皮內(nèi)瘤變和子宮頸癌中，甲基化或羥甲基化水平與體細(xì)胞拷貝數(shù)變化之間沒(méi)有任何相關(guān)性［8-9］。本研究發(fā)現(xiàn)MTIF2的甲基化與HCC的生存率同樣具有顯著相關(guān)性。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，MTIF2基因N-Shore的低甲基化（βlt;0.056）會(huì)降低HCC的生存率。MTIF2基因CpG island和S-Shore甲基化沒(méi)有表現(xiàn)出生存率的明顯差異。

進(jìn)一步分析不同患者年齡、性別、BMI、人種、種族、臨床分期等特征繪制MTIF2基因甲基化譜發(fā)現(xiàn)，年齡因素是甲基化水平高低的重要因素，隨年齡增長(zhǎng)會(huì)降低MTIF2基因N-Shore和CpG island的甲基化水平。并且臨床分期Ⅳ期患者的甲基化水平明顯低于Ⅰ/Ⅱ期患者。臨床驗(yàn)證結(jié)果表明：HCCⅢ/Ⅳ期患者M(jìn)TIF2甲基化水平明顯低于Ⅰ/Ⅱ期患者和正常人群，驗(yàn)證結(jié)果與前期統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果一致。但受樣本數(shù)量影響，未發(fā)現(xiàn)Ⅰ期與Ⅱ期之間、Ⅲ期與Ⅳ期患者之間是否存在差異，后期有待進(jìn)一步探討。

隨著分子診斷方法的進(jìn)步，DNA甲基化用于評(píng)估癌前病變到早期HCC轉(zhuǎn)變的過(guò)程具有重要作用，并具有對(duì)肝硬化患者預(yù)后評(píng)估及預(yù)測(cè)的潛力［10］。例如RASSF1A、GSTP1、p14、CDH1、APC等基因的DNA高甲基化研究的較為深入，且部分已作為臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目開(kāi)展，而有關(guān)低甲基化的相關(guān)研究較少。一項(xiàng)宮頸脫落細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，MTIF2基因的低甲基化會(huì)導(dǎo)致總體生存率顯著降低（HR=0.48，P=0.048）［11］。HCC中MTIF2的相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)：（1）HCC組織中高表達(dá)的MTIF2來(lái)源于上皮細(xì)胞和肝細(xì)胞，MTIF2可能作用于超氧化物歧化酶2，調(diào)控活性氧通路，從而影響HCC的進(jìn)展［12］；（2）MTIF2可抑制HCC細(xì)胞中藥物誘導(dǎo)的免疫原性細(xì)胞死亡，這些機(jī)制可能與MTIF2低甲基化影響HCC發(fā)生有關(guān)［13］。泛癌數(shù)據(jù)對(duì)比分析表明，MTIF2甲基化與12種腫瘤存在關(guān)聯(lián)，與HCC關(guān)系最為密切。

綜上，MTIF2的低甲基化是HCC發(fā)生發(fā)展的危險(xiǎn)因素。但值得注意的是，在人類(lèi)癌癥中，MTIF2在遺傳或表觀遺傳水平上的作用尚不清楚，值得進(jìn)一步地探索。

倫理學(xué)聲明：本研究方案于2024年1月15日經(jīng)由中國(guó)人民解放軍西部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，批號(hào)：2023EC5-ky055。

利益沖突聲明：本文不存在任何利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：謝華杰、常凱、王艷艷負(fù)責(zé)課題設(shè)計(jì)，資料分析，撰寫(xiě)論文；謝華杰、那琬琳、蔡歡、劉霞、江忠勇、胡宗海、劉媛參與收集數(shù)據(jù)，修改論文；謝華杰、常凱負(fù)責(zé)擬定寫(xiě)作思路，指導(dǎo)撰寫(xiě)文章并最后定稿。

參考文獻(xiàn)：

[1]PANNEERSELVAM S，WILSON C，KUMAR P，et al.Overview of he?patocellular carcinoma：From molecular aspects to future therapeutic options[J].Cell Adh Migr，2023，17（1）：1-21.DOI：10.1080/19336918.2023.2258539.

[2]ZENG YY，F(xiàn)U J，LIN KY，et al.Current status and prospects of post?operative adjuvant therapy for hepatocellular carcinoma[J].Chin J Dig Surg，2024，23（2）：221-227.DOI：10.3760/cma.j.cn115610-20231128-00220.

曾永毅，傅俊，林孔英，等.肝細(xì)胞癌術(shù)后輔助治療的現(xiàn)狀與展望[J].中華消化外科雜志，2024，23（2）：221-227.DOI：10.3760/cma.j.cn115610-20231128-00220.

[3]CHANG K，NA WL，LIU CX，et al.A study on the mechanism of Avila?mycin intervention MTIF2 regulating ribosomal translation process to inhibit hepatitis B virus replication[J].Acta Univ Med Anhui，2022，57（2）：203-207.DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2022.02.008.

常凱，那琬琳，劉晨霞，等.阿維霉素干預(yù)MTIF2調(diào)控核糖體翻譯進(jìn)程抑制乙型肝炎病毒復(fù)制的機(jī)制研究[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2022，57（2）：203-207.DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2022.02.008.

[4]WU DQ，LI YJ.Application of adoptive cell therapy in hepatocellular carcinoma[J].Immunology，2023，170（4）：453-469.DOI：10.1111/imm.13677.

[5]WANG J，WANG FF，WANG N，et al.Diagnostic and prognostic value of protein post-translational modifications in hepatocellular carci?noma[J].J Clin Transl Hepatol，2023，11（5）：1192-1200.DOI：10.14218/JCTH.2022.00006S.

[6]GRASSO DG，CHRISTIAN BE，SPENCER A，et al.Overexpression and purification of mammalian mitochondrial translational initiation factor 2 and initiation factor 3[J].Methods Enzymol，2007，430：59-78.DOI：10.1016/S0076-6879（07）30004-9.

[7]LI XD，CHEN JL，MENG J.Comprehensive analysis of the prognos?tic values and immune implication of ESYT3 in lung adenocarcinoma[J].Medicine（Baltimore），2023，102（35）：e34557.DOI：10.1097/MD.0000000000034557.

[8]XIE ZH，HUANG JP，LI YJ，et al.Single-cell RNA sequencing re?vealed potential targets for immunotherapy studies in hepatocellularcarcinoma[J].Sci Rep，2023，13（1）：18799.DOI：10.1038/s41598-023-46132-w.

[9]HAN YX，JI LY，GUAN YF，et al.An epigenomic landscape of cervi?cal intraepithelial neoplasia and cervical cancer using single-base resolution methylome and hydroxymethylome[J].Clin Transl Med，2021，11（7）：e498.DOI：10.1002/ctm2.498.

[10]XU RH，WEI W，KRAWCZYK M，et al.Circulating tumour DNA methyla?tion markers for diagnosis and prognosis of hepatocellular carcinoma[J].Nat Mater，2017，16（11）：1155-1161.DOI：10.1038/nmat4997.

[11]CHANG K，WANG YY，JIANG ZY，et al.Proteomic analysis and vali?dation of DNA repair regulation in the process of hepatocellular car?cinoma recurrence[J].J Clin Hepatol，2024，40（2）：319-326.DOI：10.12449/JCH240216.

常凱，王艷艷，江忠勇，等.肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)進(jìn)程中DNA修復(fù)調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)組學(xué)分析及驗(yàn)證[J].臨床肝膽病雜志，2024，40（2）：319-326.DOI：10.12449/JCH240216.

[12]WANG Y，ZHANG JQ，YANG Y，et al.Single-cell analysis revealed that MTIF2 could promote hepatocellular carcinoma progression through modulating the ROS pathway[J].Heliyon，2024，10（14）：e34438.DOI：10.1016/j.heliyon.2024.e34438.

[13]XU DF，WANG Y，WU JC，et al.MTIF2 impairs 5 fluorouracil-medi?ated immunogenic cell death in hepatocellular carcinoma in vivo：Molecular mechanisms and therapeutic significance[J].Pharmacol Res，2021，163：105265.DOI：10.1016/j.phrs.2020.105265.

收稿日期：2024-07-18；錄用日期：2024-10-19

本文編輯：王瑩