牛人工輸精技術(shù)的規(guī)范流程與操作中的注意事項(xiàng)總結(jié)

牛人工輸精技術(shù)已在畜牧業(yè)中得到廣泛應(yīng)用。該技術(shù)的優(yōu)勢(shì)顯著，能夠迅速冷凍適宜配種的種牛精液，有效降低疾病傳播風(fēng)險(xiǎn)，極大地提高優(yōu)良種牛的利用率。同時(shí)，它還能為牛場(chǎng)解決在繁育過(guò)程中飼養(yǎng)種牛所帶來(lái)的諸多不便，降低相關(guān)費(fèi)用。盡管母牛人工輸精技術(shù)已為眾多畜牧工作者所熟知并應(yīng)用，但在實(shí)際操作過(guò)程中，仍存在不少細(xì)節(jié)問(wèn)題。具體表現(xiàn)為操作存在隨意性和不規(guī)范性。許多技術(shù)人員在進(jìn)行人工授精操作時(shí)，未能?chē)?yán)格依照規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。比如，人工授精設(shè)備較為簡(jiǎn)陋；輸精前，未充分做好嚴(yán)格的衛(wèi)生消毒工作；精液解凍存在問(wèn)題，要么解凍不完全，要么解凍時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，且精液在戶(hù)外暴露時(shí)間過(guò)久。上述這些不符合規(guī)范的操作流程，嚴(yán)重影響了配種受胎率。為了切實(shí)提升牛人工輸精的效果，保障畜牧業(yè)的健康發(fā)展，針對(duì)上述問(wèn)題，必須采取一系列行之有效的改進(jìn)措施。

一、母牛人工輸精前母牛發(fā)情鑒定

1、母牛發(fā)情鑒定的前期準(zhǔn)備

當(dāng)飼養(yǎng)者觀(guān)察到母牛出現(xiàn)發(fā)情跡象，如陰部發(fā)紅、持續(xù)鳴叫、試圖爬跨其助手牛只或被其助手牛只爬跨時(shí)，應(yīng)立即通知配種員。通常情況下，母牛會(huì)在上午表現(xiàn)出發(fā)情行為，在下午進(jìn)行交配；若在下午發(fā)情，則應(yīng)在第二天早晨進(jìn)行配種。然而，大多數(shù)母牛傾向于在夜間發(fā)情，因此配種員會(huì)綜合考慮母牛的行為表現(xiàn)、年齡及胎次，以決定是否進(jìn)行配種。

配種員在進(jìn)行配種工作前，必須穿著整潔的制服和皮靴，并確保指甲剪短、磨平。徹底清潔并消毒雙手，或者使用免洗消毒液進(jìn)行手部清潔，確保干燥。佩戴一次性塑膠手套。

2、母牛發(fā)情鑒定的外部觀(guān)察

配種員用肉眼將母牛的陰門(mén)打開(kāi)，結(jié)合外陰顏色，陰道黏膜和黏液狀況來(lái)判定是否發(fā)情。一般來(lái)說(shuō)，在發(fā)情期的最后階段交配，成功率較高。這個(gè)時(shí)候，母牛平靜，食欲恢復(fù)正常，躲開(kāi)了其他牛爬跨；外陰腫脹不顯著，橫紋逐漸恢復(fù)；陰道黏膜充血、變淡、變暗；陰道內(nèi)有少量的黏液，顏色渾濁，不透明。

3、母牛發(fā)情鑒定的直腸檢查

對(duì)于卵泡囊腫、子宮炎癥，或妊娠期不超過(guò)2個(gè)月的母牛時(shí)，可能會(huì)表現(xiàn)出發(fā)情的跡象。因此，進(jìn)行直腸檢查是必要的，以避免誤配。

配種員在遵循個(gè)人工作習(xí)慣的同時(shí)，應(yīng)徹底清洗、消毒并干燥雙手，隨后佩戴一次性或長(zhǎng)臂式塑膠手套，并在手套外均勻涂抹潤(rùn)滑油。

母牛在檢查過(guò)程中通常會(huì)向兩側(cè)蹬腿。因此，配種員應(yīng)站在母牛后方，雙腿分開(kāi)，膝蓋向前彎曲，以便在緊急情況下迅速后退，確保自身安全。

配種員將母牛尾巴拉向一側(cè)，輕觸陰門(mén)后移至肛門(mén)處。母牛放松后，手指插入直腸檢查。若直腸內(nèi)有宿便，先清除。檢查時(shí)觸摸子宮頸口，檢查子宮體、子宮頸、輸卵管及卵巢。發(fā)情晚期，卵泡可增至約2.0cm，突出于卵巢表面，壁薄膨脹，觸摸有起伏感，易于破裂，此時(shí)人工授精成功率高。直腸檢查可發(fā)現(xiàn)卵泡壁薄、張力高、波動(dòng)明顯的囊泡，建議每隔2～3d復(fù)查。確認(rèn)母牛發(fā)情后，應(yīng)立即人工授精。

二、母牛人工輸精的操作方法

1、不同類(lèi)型凍精解凍操作方法

（1）顆粒凍精解凍操作方法

①解凍液的配制方法有3種可供選擇：第1種，將2.9g檸檬酸鈉溶解于100mL的雙蒸餾水中；第2種，混合3g葡萄糖和1.4g檸檬酸鈉，并加入100mL雙蒸餾水。制備這兩種成分的溶液后，需經(jīng)過(guò)3次過(guò)濾，并通過(guò)高壓蒸汽或沸騰滅菌3h。隨后每100mL溶液中加入5000～10000單位的青鏈霉素。將處理好的溶液分裝至玻璃瓶中，存放在4℃的冰箱或陰涼處備用；第3種，使用鮮牛奶。首先，用四層紗布過(guò)濾鮮牛奶，然后將其倒入消毒過(guò)的燒杯中，并通過(guò)隔水煮沸3次。每次煮沸后待冷卻并去除奶皮。在每100mL冷卻后的牛奶中加入100萬(wàn)單位的青霉素，并與配制的溶液同時(shí)使用，以防止變質(zhì)。

②解凍方法：采用35～40℃的高溫?zé)崴》ㄒ詫?shí)現(xiàn)快速解凍。首先，對(duì)試管進(jìn)行消毒和清洗，然后加入1～1.5mL的解凍液。將試管放入已加熱至35～40℃的水浴杯（壺）中。待水溫穩(wěn)定后，使用預(yù)先冷卻的長(zhǎng)柄鑷子迅速取出1～2顆冷凍精液，投入試管中，并輕輕搖動(dòng)。當(dāng)冷凍精液溶解至1/2或1/3時(shí)，立即從水中取出試管，并繼續(xù)輕搖直至完全溶解。之后進(jìn)行鏡檢，確認(rèn)無(wú)誤后即可使用。為避免2次冷凍對(duì)精液活力造成損害，請(qǐng)注意防止冷擊。

（2）細(xì)管凍精解凍操作方法

使用預(yù)先冷卻的長(zhǎng)柄鉗從容器中取出細(xì)管凍精，隨后立即將其置于38±2℃的溫水中進(jìn)行直接浸泡和解凍。大約10～15s后，取出細(xì)管凍精，用無(wú)菌紗布輕輕擦拭其表面水分。接著，使用專(zhuān)用的消毒剪刀剪去超聲波熱合封口端，進(jìn)行鏡檢，以備后續(xù)使用。

2、凍精質(zhì)量的鏡檢操作

凍精需經(jīng)歷采集、貯存、運(yùn)輸、配送和解凍等環(huán)節(jié)，品質(zhì)不易保證。常規(guī)檢測(cè)僅需少量樣本。解凍后，精液應(yīng)在38～40℃的顯微培養(yǎng)箱中進(jìn)行活力檢測(cè)。精子存活率的精確評(píng)估需要定期使用血細(xì)胞計(jì)算器。檢測(cè)方法包括用生理鹽水稀釋后計(jì)算死精子數(shù)量，再稀釋殺死所有精子后計(jì)算總數(shù)，兩者的差值即為活精子數(shù)。精子活率需大于0.30，向前運(yùn)動(dòng)精子數(shù)需超過(guò)1000萬(wàn)才能輸精。輸精器的滅菌效果需通過(guò)顯微鏡檢查確認(rèn)，解凍后活度無(wú)變化方可輸精。輸精后，還需檢查輸精器中剩余精液，若精液已死，則需重新輸精。

3、母牛人工輸精的最佳時(shí)機(jī)及輸精方法

母牛的排卵通常發(fā)生在發(fā)情周期的最后三個(gè)階段，即在發(fā)情結(jié)束后的1～1.5d內(nèi)。在大多數(shù)情況下，發(fā)情結(jié)束后的8～12h內(nèi)進(jìn)行人工授精是最為適宜的。因此，在使用凍精進(jìn)行配種時(shí)，最佳時(shí)機(jī)是在排卵期即將來(lái)臨時(shí)。另外，觀(guān)察母牛陰道黏液的情況，理想的操作時(shí)間是在黏液量增多且變得渾濁的時(shí)期。

（1）母牛人工授精最佳時(shí)間

①發(fā)情期內(nèi)一次授精

在母牛不再表現(xiàn)出發(fā)情跡象后的12h內(nèi)，尤其是3～5h內(nèi)進(jìn)行授精，可獲得最高授精成功率。年輕或營(yíng)養(yǎng)良好的母牛，發(fā)情后即可授精。發(fā)情期內(nèi)兩次授精，首次在母牛發(fā)情后8～12h進(jìn)行，第2次在8～12h后。例如，若母牛早晨發(fā)情，首次授精在早晨，第2次在次日早晨，隨后在次日下午再次授精。使用直觸法時(shí)，選擇壁薄、體積大、彈性好且波動(dòng)明顯的卵泡，在排卵前授精。若8～12h內(nèi)卵泡未破裂，可再次授精直至排卵。新發(fā)現(xiàn)或剛排出的卵泡也可再次授精，正常情況下受孕概率約3%。

②母牛人工輸精方法

首先要把發(fā)情母牛圈在繁殖架上，不能有任何限制的就把牛拴在牛欄或樹(shù)墩上。配種員先檢查陰道是否有炎癥性分泌物，如果發(fā)現(xiàn)有疾病，就停止輸精，并做好記錄，留待日后進(jìn)一步治療。配種員用一副一次性的塑膠長(zhǎng)臂手套，在其外部噴灑一些潤(rùn)滑劑。例如肥皂，石蠟等，然后側(cè)著身子站在牛的背部，首先用手觸摸肛門(mén)，然后將手指握成錐形，然后慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)，將里面的糞便排出。在這個(gè)過(guò)程中，配種員用一次性的吸水巾將陰部清洗干凈，或者是用75%的酒精來(lái)進(jìn)行消毒，同時(shí)，助手開(kāi)始對(duì)精子的解凍和裝槍?zhuān)?dāng)助手把槍裝好之后，站在牛的身體的一側(cè)，用大拇指和食指分別捏住陰唇，往上一提，讓配種員能更好地看見(jiàn)陰道口。配種員用右手拿著引精器，以30°的水平面從陰唇插入陰道，在接觸到陰道上壁后，以水平角度輕輕、緩慢地插入陰道，避開(kāi)尿道口，然后左手探入直腸，沿著前下緣輕輕觸碰，尋找宮頸，握住宮頸陰道端（小心不能用力過(guò)猛，導(dǎo)致宮頸游離下垂，使得引精器難以插入），此時(shí)，雙手同時(shí)用力，右手把輸精器的頂端推到左手按壓的位置，雙手同時(shí)用力擺動(dòng)，防止輸精器滯留陰道穹窿，輸精器的前端伸進(jìn)宮頸口，有時(shí)陰道壁會(huì)阻礙輸精器的插入，可以用后移輸精器或?qū)⒆訉m前移后慢慢插入，左手不斷前進(jìn)，改變宮頸方向，輸精器穿過(guò)褶壁輪，槍頭插入宮頸深處5～8 cm處，但不能盲目插入過(guò)深，否則會(huì)把子宮內(nèi)膜刺破，引起子宮出血，通常要達(dá)到有卵泡的子宮角基部或深層。此時(shí)，可由第一位助手用右手慢慢地將輸精器中的精液排出，然后慢慢地退出輸精器。如排精困難，可將引精器往后移一點(diǎn)，然后注射精液。如果輸精槍內(nèi)仍有較多的精液，應(yīng)再次輸精。拔精后，取精時(shí)，用左手在直腸中稍作停頓，按摩宮頸，可預(yù)防精液回流。如果母牛宮頸很難插進(jìn)去，可以先用消毒過(guò)的擴(kuò)宮棒將其擴(kuò)張，再輸精。切勿讓一頭母牛久待，如果15min以上仍很難插入，則應(yīng)該放棄，否則會(huì)對(duì)母牛的子宮造成傷害。

在牛場(chǎng)選擇有責(zé)任心、有經(jīng)驗(yàn)的配種員，實(shí)行控凍精的輸精，不能頻繁更換配種員，要按照操作規(guī)范，做好配種記錄，避免近交。同時(shí)肌肉注射曲普瑞林 25g能明顯地提高母牛的受胎率。如果農(nóng)戶(hù)居住的地方比較分散，配種員應(yīng)該準(zhǔn)備一個(gè)小液氮罐，把性控精液裝入液氮罐中，然后帶到農(nóng)戶(hù)現(xiàn)場(chǎng)解凍，這樣可以防止性控精液解凍后在室外停留太久，導(dǎo)致精子活力降低。

三、牛人工授精操作中注意事項(xiàng)

1、人工授精站的設(shè)置

配種站（點(diǎn)）應(yīng)選址于母牛分布密集、便于集中管理且交通便捷的區(qū)域。操作間需朝向陽(yáng)光且保持干燥，精液處理室應(yīng)確保窗戶(hù)明亮、臺(tái)面潔凈，并配備頂棚，地面應(yīng)為硬化（如水泥）材質(zhì)。工作開(kāi)始前1h，使用75%酒精棉球進(jìn)行消毒處理，且每日工作前后均需徹底清潔。在室內(nèi)進(jìn)行作業(yè)時(shí)，必須穿戴白色工作服、拖鞋、白帽及口罩，禁止非本崗位人員進(jìn)入。在無(wú)菌環(huán)境中，需特別注意設(shè)備的清潔度，確保環(huán)境無(wú)塵、無(wú)煙、無(wú)蠅、無(wú)異味，并避免存放對(duì)精子有害的物品。對(duì)于參與配種的母牛，應(yīng)詳細(xì)記錄其繁殖和交配狀況。同時(shí)，對(duì)于配種牛的來(lái)源、所在村莊、主人姓名、品種、毛色及年齡等信息也應(yīng)有詳盡地記錄。

2、人工授精器械、用具的清洗和消毒

人工授精器械和藥品應(yīng)存放在干凈的柜子中，避免與獸藥混合。常規(guī)器械和藥物應(yīng)放在工作臺(tái)，用無(wú)菌布覆蓋。使用前后，用中性洗滌劑或2%碳酸氫鈉溶液清洗去除油漬，再用溫開(kāi)水或蒸餾水沖洗2～3次清除雜質(zhì)。清洗后，將容器倒置排干水分，用干凈紗布覆蓋防塵。玻璃和金屬器械干燥后，可高溫消毒或高壓蒸汽、沸騰法消毒30min。推薦使用75%酒精擦拭消毒。布料、清洗液、解凍液等應(yīng)用高壓蒸汽或沸騰法滅菌。玻璃輸精器和刻度吸管用70%乙醇消毒后，用無(wú)菌生理鹽水沖洗。注射器、輸精器、試管消毒后，用灌洗液沖洗3次，用酒精棉球消毒，無(wú)煙火焰烘干。為防疫病傳播，消毒輸精器僅限單一母牛使用，用后必須重新消毒。

3、牛外陰的消毒問(wèn)題及推薦方法

沒(méi)有清洗母牛的外陰，而直接將引精器插入陰道，從而使病菌，甚至是糞便進(jìn)入陰道。還有的配種員在使用清水或消毒液清潔外陰后，未經(jīng)干燥就將其插入引精器內(nèi)，使殘留在陰門(mén)內(nèi)的洗滌液進(jìn)入引精器內(nèi)，對(duì)精液的活性產(chǎn)生影響。有些配種員用毛巾擦拭，重復(fù)使用后就成了污染源。建議：用清潔的自來(lái)水或水壺沖洗，然后用刷或戴上手套的手搓洗，然后用粗而粗的紙巾把糞便擦干。刷牛陰門(mén)時(shí)，從陰門(mén)中間往外擦，用衛(wèi)生紙一面擦拭一遍，再用另一面擦拭。在飲水不便的情況下，可用干燥的紙巾擦拭，將污垢擦拭干凈。無(wú)論采取何種方式，其關(guān)鍵在于要樹(shù)立無(wú)菌、衛(wèi)生觀(guān)念，并在手術(shù)過(guò)程中注意防止污染。

4、輸精槍?zhuān)娖鳎┑氖褂脝?wèn)題

在使用擦拭細(xì)管法或裝輸精槍?zhuān)ㄆ鳎r(shí)，必須確保手觸摸到細(xì)管法的前端（一些配種者可能會(huì)犯這個(gè)錯(cuò)誤），然后將輸精槍?zhuān)ㄆ鳎┎迦牍芸?。在使用顆粒凍精時(shí)，一些配種員在為一頭母牛輸精后，僅用酒精棉球擦拭輸精管外部，接著將精液輸送到另一頭母牛。此外，有些配種員在使用完未清潔消毒的引精器后，會(huì)在下一次使用前用酒精棉球擦拭，并用點(diǎn)燃的火焰對(duì)輸精管進(jìn)行消毒。然而，他們可能未意識(shí)到，這種做法會(huì)在輸精管內(nèi)壁形成一層蛋白質(zhì)變性焦煳，這會(huì)損害精子的活性并影響衛(wèi)生狀況。

5、液氮容器的保管、使用

（1）液氮罐的檢查

在對(duì)新購(gòu)置的容器進(jìn)行驗(yàn)收時(shí)，必須仔細(xì)檢查其外觀(guān)，確保無(wú)變形、異常情況、雜質(zhì)或污漬。若發(fā)現(xiàn)油罐外部出現(xiàn)結(jié)霜現(xiàn)象，或液氮蒸發(fā)量超過(guò)既定參考值，應(yīng)立即查明原因，并采取更換或維修措施。

（2）液氮的充填

在進(jìn)行注氮操作時(shí)，首先應(yīng)使用少量液氮對(duì)容器進(jìn)行預(yù)冷處理，這樣做是為了確保罐內(nèi)已經(jīng)氣化的氮?dú)饽軌蝽樌懦?。充氮過(guò)程應(yīng)僅限于頸管底端的范圍。若容器內(nèi)存放有冷凍精液，則應(yīng)在剩余體積的1/3處添加液氮。

（3）凍精的提取和轉(zhuǎn)移

儲(chǔ)存凍精的提桶應(yīng)根據(jù)編號(hào)準(zhǔn)確放置于定位槽內(nèi)，取用時(shí)嚴(yán)禁旋轉(zhuǎn)，提桶的提升高度不得超過(guò)頸管的1/3（即10cm），且操作時(shí)間應(yīng)控制在10s以?xún)?nèi)。若在10s內(nèi)未能成功取出提桶，請(qǐng)立即將桶或其他包裝物浸入液氮中，之后再行取出。精子的快速轉(zhuǎn)移，從一個(gè)容器到另一個(gè)容器，必須在5s內(nèi)完成；若計(jì)劃長(zhǎng)期使用，操作過(guò)程中應(yīng)確保精子始終處于液態(tài)氮的環(huán)境中。

（4）液氮容器的運(yùn)輸

在搬運(yùn)凍精容器時(shí)，必須避免碰撞、傾斜、顛倒或重疊放置。使用汽車(chē)運(yùn)輸凍精容器時(shí)，除了原有的保護(hù)罩外，應(yīng)額外使用木箱或其他防護(hù)設(shè)備進(jìn)行加固。確保墊子厚實(shí)柔軟，并采取適當(dāng)?shù)墓潭ù胧?，以防止在運(yùn)輸過(guò)程中發(fā)生沖擊和碰撞。在進(jìn)行長(zhǎng)距離運(yùn)輸時(shí)，需密切監(jiān)控液態(tài)氮的消耗情況，并及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)充。

（5）液氮罐的沖洗

配種完成后，務(wù)必對(duì)液氮罐進(jìn)行至少一次的清潔工作。對(duì)于長(zhǎng)期使用的液氮罐，除了清潔之外，還應(yīng)考慮更換。具體清潔步驟如下：首先旋開(kāi)蓋子，取出管筒，將凍精轉(zhuǎn)移到另一只液氮罐中，然后將剩余的液氮和其他殘留物傾倒干凈。接著，將液氮罐置于室溫下放置2d，以使罐內(nèi)溫度回升至0℃。接下來(lái)，使用40～50℃的熱水混合中性洗滌劑（或普通洗滌劑）倒入罐內(nèi)，用抹布徹底擦拭干凈，之后將污水倒出。之后需用清水反復(fù)沖洗，直至徹底清潔。清潔后，將容器倒置以自然風(fēng)干或使用熱風(fēng)烘干。

（作者單位：110400 遼寧省沈陽(yáng)市法庫(kù)縣鄉(xiāng)村振興發(fā)展中心）