離子對-HPLC法測定磷霉素鈣分散片主藥含量

摘要：為了采用離子對-HPLC方法測定出磷霉素鈣分散片中的藥物物質(zhì)含量，先進行物質(zhì)試劑和要素測定試劑的制備，構(gòu)建色譜測定條件，同時進行藥物質(zhì)量分數(shù)標準曲線的繪制，采用重復性實驗的方式測算出磷霉素鈣分散片中藥物物質(zhì)的檢測限和定量限，與設定的基礎指標對比，檢測其準確度和穩(wěn)定度，最終獲取對應的主藥物含量。結(jié)果表明：在相同的測定環(huán)境下，分析出主藥種類分別為磷霉素鈣、磷霉素鈣二醇物以及相關藥物，占比分別為85.2%、9.3%和5.5%。該方法的溶出分析重現(xiàn)性好，最大程度避免出現(xiàn)含量測定的偏差，標示量與準確度較高，具有實際的應用價值。

關鍵詞：離子對；離子對-HPLC法；磷霉素；鈣分散片；藥量檢測

中圖分類號：R917.4文獻標志碼：A 文章編號：1004-0935（2025）02-0352-04

磷霉素是一種通過防止肽聚糖定向合成來達到抗菌、抑菌效果的抗生素，其化學結(jié)構(gòu)及抑菌機制較為特殊[1]。市面上最常見的磷霉素藥物就是磷霉素鈣分散片。為了測定分析出磷霉素分散片內(nèi)部的藥物含量，綜合實際的測定需求及標準，采用離子對-HPLC法完成測定，并進行定向驗證與分析。所謂離子對-HPLC法通常指的是一種定向的單目標色譜測定方式，在實際測定的過程中可利用檢測裝置對溶液中的離子數(shù)量及濃度進行分離研究[2]。將其應用在磷霉素鈣分散片主藥含量的測定之中，可一定程度上提升測定數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性。

1實驗準備

1.1材料準備

根據(jù)實際的測試需求及標準，首先進行基礎測試材料的準備，并搭建基礎的測試環(huán)境。準備實驗用蒸餾水、磷霉素氨丁三醇對照品（確保質(zhì)量分數(shù)在99.56%以上）、冰乙酸、正辛胺乙腈（確保自身的純度，可以提升實驗結(jié)果的精準與穩(wěn)定）、磷霉素二醇物對照品、三氟乙酸以及磷霉素鈣分散片測試樣本[3]。

完成材料準備之后，接下來需要搭接、安裝專業(yè)的處理儀器。先選取多環(huán)境高效液相色譜儀、實驗用蒸餾裝置、光度轉(zhuǎn)換檢測裝置和檢測器，在同等的環(huán)境下設置一個Synergi 4 μm Fusion-RP 80A色譜柱作為測定的比照標準[4]，至此完成對測試材料及儀器的準備。

1.2實驗布置

根據(jù)色譜柱的變化情況，進行基礎性的實驗布置。首先需要設定具體的色譜條件[5]。色譜柱設定為PrevailC18，配制出對應的輔助溶液，設定對應的吸收峰值標準，同時設定最大波長的檢測值，測定出具體的響應值。在輔助溶液中增加正辛胺，振搖使其溶解，隨后采用冰醋酸調(diào)節(jié)溶液的pH[6]。此時，依據(jù)實際的測定需求及標準，設定色譜的檢測條件，同時測算出具體的質(zhì)量分數(shù)檢測偏差，如公式（1）所示。

（1）

式中：H—質(zhì)量分數(shù)檢測偏差；

α—溶解總量；

—pH溶出度；

i—檢測次數(shù)；

δ—色譜變動值；

σ—定向波長。

根據(jù)上述測定，完成對質(zhì)量分數(shù)檢測偏差的測算。將獲取的質(zhì)量分數(shù)檢測偏差設定為基礎的藥量質(zhì)量分數(shù)檢測標準，同時根據(jù)離子對-HPLC法設定對應的線性測定范圍[7]。

將測試所用樣本藥物搗碎，加入適量蒸餾水，在特定的環(huán)境下，將溶出介質(zhì)逐漸稀釋為每1 mL含30 mg的測試樣本，分置于10 mL測試量瓶中，二次稀釋后搖勻，注入色譜儀[8]。測定出此時的定向藥物標準質(zhì)量濃度，完成基礎性的實驗布置，接下來，綜合測定需求及標準，進行具體的測驗分析。

2實驗方法與過程

根據(jù)上述搭建的測試環(huán)境以及測定需求，綜合實際的目標，采用離子對-HPLC法對磷霉素鈣分散片的主藥質(zhì)量分數(shù)進行測試驗證。首先，需要配制質(zhì)量分數(shù)測定試劑和要素測定試劑[9]。采用專業(yè)的設備及裝置，稱取適量的磷霉素氨丁三醇對照品，并在內(nèi)部加入適量的蒸餾水，靜置1 h后，加入10 mmol·L-1的正辛胺-乙腈，在反應的過程中需要采用冰乙酸進行合理調(diào)節(jié)，確保后續(xù)應用測試的穩(wěn)定性和安全性。測定出此時試劑的pH，如果達到3.0以上，便表明試劑溶液被較好地溶解并稀釋成含磷霉素鈣元素的儲備液。此時，將儲備液分別置于不同的量瓶中，根據(jù)實際測定需求及標準的變化，向量瓶中增加溶劑稀釋，靜置0.5 h后，采用霧化處理的方式檢測溶液的定向質(zhì)量濃度，作為測試的溶液。此外，以此為基礎還需要將供試品溶液加入三氟乙酸，促使其質(zhì)量濃度可以達到預設水平，一般控制在0.5～1.0 mg·mL-1即可。

在此基礎之上，進行要素測定試劑的配制。這部分主要是為了分離磷霉素鈣分散片中藥物物質(zhì)所設計的環(huán)節(jié)。首先，根據(jù)實際的測定分解需求，綜合離子對-HPLC法，先測定出樣本試劑中磷霉素二醇物對照品的質(zhì)量分數(shù)，在其中增加適量的正辛胺乙腈，測定其此時的質(zhì)量濃度，形成混合試劑之后，加入適量蒸餾水，完成基礎性測試試劑的制備。此時，在不同的溫度環(huán)境作用下，測算出磷霉素鈣質(zhì)量濃度，如公式（2）所示。

（2）

式中：P—磷霉素鈣質(zhì)量濃度；

g—預設定位偏差；

t—對照標準；

φ—吸收峰值；

e—定位次數(shù)；

—溶解量。

根據(jù)測算得出的磷霉素鈣質(zhì)量濃度值，設定對應的藥物物質(zhì)分離標準。綜合離子對-HPLC法，進行色譜條件的調(diào)節(jié)，色譜條件調(diào)節(jié)設定表如表1所示。

根據(jù)表1完成對色譜條件的調(diào)節(jié)與設定。此時，利用冰乙酸將溶液中的pH逐步調(diào)節(jié)到靠近4.8的程度，同時對此時的溶液進行霧化處理，設定霧化的氣流量為1.5 L·min-1。但是這部分需要注意的是，色譜條件的設置并不是固定的，可以依據(jù)測定需求及標準的變化進行調(diào)整，具有較強的靈活性。因此，在不同的溫度狀態(tài)下，利用離子對-HPLC法，對試劑溶液中的藥物物質(zhì)測定，同時與初始設定的色譜進行對比研究，結(jié)果如圖1所示。

根據(jù)圖1完成對磷霉素鈣藥物HPLC譜的測定分析。隨后，綜合設計的色譜變化狀態(tài)，設定對應的藥物物質(zhì)檢測標準。利用離子對-HPLC法，測定計算出此時磷霉素鈣分散片的磷霉素氨丁三醇的具體質(zhì)量分數(shù)及質(zhì)量濃度，依據(jù)色譜圖的記錄，對峰面積（ A ）與質(zhì)量濃度（c）進行定向線性測定，最終繪制出標準的藥物質(zhì)量分數(shù)曲線。

此時，可以采用重復性實驗的方式對磷霉素鈣分散片中的主藥質(zhì)量分數(shù)進行測定驗證。將磷霉素鈣分散片的溶液實際以每一份10 mL分裝在量瓶中，共分為4份進行測定?；A測定指標數(shù)值設定表如表2所示。

根據(jù)表2完成對基礎測定指標數(shù)值的設定。接下來，根據(jù)上述設定對基礎的測試環(huán)境作出調(diào)整，與此同時有針對性地設定相關的藥物質(zhì)量分數(shù)測定標準，測定出定量限。此時，磷霉素鈣分散片中的正辛胺質(zhì)量濃度為23 mg·mL-1，與初始設定的標準相對比，進行測定偏差的計算。在上述的測試環(huán)境下，進行藥物質(zhì)量分數(shù)測定準確度的測試。這部分可以先對測定的樣本溶液進行合理稀釋，測定出內(nèi)部的藥物種類及具體的質(zhì)量分數(shù)，為（96.8±0.5）%和（0.25±0.003）%（n= 6）。與基礎測定方式所獲取的測試結(jié)果保持一致。

在制備的藥品溶劑中加入適量的三氟乙酸，靜置2 h，并將保持的溫度調(diào)整至30 ℃。最終獲得以下的結(jié)果磷霉素鈣主藥物質(zhì)總量的RSD分別為0.6%和1.1%（n=4），且質(zhì)量濃度為0.8、25 mg·mL-1。此時，分別測算得出磷霉素鈣分散片中磷霉素鈣、磷霉素鈣二醇物以及有關物質(zhì)總量的質(zhì)量分數(shù)，如公式（3）所示。

（3）

式中：M—測定藥物質(zhì)量分數(shù)；

—試劑總量，

z—溶液偏差；

s1、s2—預設質(zhì)量濃度值和實際質(zhì)量濃度值。

依據(jù)此，逐步測算出主藥物質(zhì)的對應質(zhì)量分數(shù)，如表3所示。

由表3可以看出，磷霉素鈣分散片內(nèi)部的主藥物質(zhì)基本可以判定為磷霉素鈣、磷霉素鈣二醇物以及相關藥物，占比分別為85.2%、9.3%和5.5%。依據(jù)獲取的數(shù)值信息，對測試得出的結(jié)果比照分析。

3討 論

利用離子對-HPLC法，對磷霉素鈣分散片中的主藥質(zhì)量分數(shù)進行測定，得知該藥物由磷霉素鈣、磷霉素鈣二醇物以及相關藥物構(gòu)成，占比分別為85.2%、9.3%和5.5%。采用色譜比照的方式驗證測定，對藥物進行溶出分析，整個測定過程環(huán)節(jié)十分精準簡單，重現(xiàn)性好，利用標準曲線的限制，最大程度避免出現(xiàn)質(zhì)量分數(shù)測定的偏差。得出的質(zhì)量分數(shù)與設定的標準基本保持一致，說明對磷霉素鈣分散片主藥質(zhì)量分數(shù)的標示量與準確度較高，具有實際的應用價值。

4結(jié) 論

與傳統(tǒng)的測定方法相對比，離子對-HPLC法的測定范圍以及精度相對較高，同時測定過程較為簡單，可以加強對測定誤差的控制，確保最終測試結(jié)果的真實性與可靠性。與此同時，離子對-HPLC法的測定環(huán)節(jié)以及測定結(jié)構(gòu)也更為科學、合理，對磷霉素鈣分散片內(nèi)部藥物的提取、分離也更加明確，對于內(nèi)置物質(zhì)不會造成過多的損壞，建立更為穩(wěn)定、靈活的測定結(jié)構(gòu)，為后續(xù)的測定分析工作奠定基礎環(huán)境。

參考文獻：

[1] 王磊，左楊，柳景政，等.磷霉素鈣分散片的關鍵性工藝研究[J].遼寧化工，2022，51（1）：22-24.

[2] 朱倩云，白娟，李成網(wǎng).離子對反向高壓液相色譜法測定消毒產(chǎn)品中苯扎氯銨同系物[J].中國消毒學雜志，2021，38（11）：818-820.

[3] 何匯洋，李瑞瑞，高磊，等.反相離子對色譜法測定雙氯芬酸二乙胺中的雜質(zhì)[J].沈陽藥科大學學報，2020，37（10）：918-926.

[4] 葉劍，徐衛(wèi)城，陳歡歡，等.共存離子對DNS法測定纖維素酶活性的影響[J].中華紙業(yè)，2021，42（18）：7-12.

[5] 陳曉麗，夏思辰，王麗雅，等.離子對HPLC法測定煙酰胺核糖[J].廣東化工，2020，47（13）：260-262.

[6] 劉佳，孫聚魁.高效液相色譜法測定磷霉素氨丁三醇散中磷霉素氨丁三醇的含量[J].中國藥物評價，2015，32（3）：139-141.

[7] 羅蓓，黃凱文，李勁.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定磷霉素鈣膠囊的含量[J].中國藥業(yè)，2009，18（11）：29.

[8] 楊美成，劉浩，陳桂良，等.用離子對-HPLC法測定磷霉素鈣及其有關物質(zhì)的含量[J].藥學服務與研究，2007（5）：343-346.

[9] 衷紅梅，宋燕玲，席志芳.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定磷霉素鈣膠囊含量[J].中國抗生素雜志，2006（4）：257-258.

Determination of Main Drug Content of Fosfomycin Calcium Dispersible Tablet by Ion-Pair HPLC

HAO Peina， LIAN Weiwei， MA Zhihuan

（Zhengzhou University of Industry Technology， Zhengzhou Henan 451100， China）

Abstract： In order to determine the content of fosfomycin calcium dispersible tablets by ion-pair HPLC， substance reagent and element determination reagent were prepared， chromatographic determination conditions were established， and the standard curve of drug content was drawn. The detection limit and quantitation limit of drug substances in fosfomycin calcium dispersible tablets were calculated by means of repetitive experiments. The accuracy and stability of the detector were compared with the set basic indicators， and the corresponding main drug content value was finally obtained. The results showed that under the same determination environment， the main drug types were fosfomycin calcium， fosfomycin calcium glycols and related drugs， accounting for 85.2%， 9.3% and 5.5% respectively. This method had good reproducibility and avoided the deviation of content determination to the greatest extent. The labeling quantity and accuracy were high， having practical application value.

Key words： Ion pair; Ion pair HPLC method; Fosfomycin; Calcium dispersible tablets; Dosage detection