靈芝孢子粉指紋圖譜建立及靈芝孢子油抗炎活性研究

［摘" 要］" 目的" 建立靈芝孢子粉的指紋圖譜檢測方法，探討靈芝孢子油對炎癥因子白細胞介素（IL）-1β、IL-6、腫瘤壞死因子（TNF）-α的影響。方法" 采用高效液相色譜法（HPLC）和高效薄層色譜法（HPTLC）分析不同產(chǎn)地靈芝孢子粉的化學成分；采用MTT法測定細胞活力；ELISA法測定RAW264.7細胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的表達水平。結果" HPLC指紋圖譜標定共有峰12個，其中峰1～5號分別為靈芝酸C2、靈芝酸G、靈芝酸B、靈芝酸A、靈芝酸D；HPTLC現(xiàn)行版藥典法顯示10批樣品均符合規(guī)定，采用三氯甲烷-乙腈-甲醇-甲酸（26∶4 ∶1∶1）為展開劑進行2次展開后，不同產(chǎn)地的原料質(zhì)量斑點差異顯著，與HPLC指紋圖譜相似。靈芝孢子油濃度≤180 μg/mL時，對RAW264.7細胞活性無明顯影響；對LPS誘導的RAW264.7細胞的保護作用呈劑量依賴性；與模型組相比，中劑量組（90 μg/mL）顯著降低IL-1β表達（P＜0.05），高劑量組（180" μg/mL）顯著降低IL-6和TNF-α的表達（P＜0.05），輕微降低IL-1β的表達，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結論" 靈芝孢子油是通過抑制炎癥因子的釋放來減輕機體的炎癥，達到對免疫細胞的保護作用。通過HPTLC可初步鑒定孢子粉的質(zhì)量，HPLC指紋圖譜可精準控制原料質(zhì)量，保障靈芝孢子油功效。

［關鍵詞］" 靈芝孢子油；高效液相指紋圖譜；高效薄層色譜法；白細胞介素-1β；白細胞介素-6；腫瘤壞死因子-α

doi：10.3969/j.issn.1674-7593.2025.01.016

收稿日期：2024-03-18" 修回日期：2024-04-16" 錄用日期：2024-04-30

*吉林省科技發(fā)展計劃項目（20210401097YY）

**通信作者：高" 穎，電子郵箱1012420479@qq.com；于秀華，電子郵箱yu0316chen@163.com

Establishment of the fingerprint of ganoderma lucidum spore powder and study

on the anti-inflammatory activity of ganoderma lucidum spore oil

Zhang Yu1， Hou Lihui 1，Wang Le 1， Si Yunshan 2， Wen Hongjuan 3， Gao Ying 4**， Yu Xiuhua 5

**

1School of Pharmacy， Changchun University of Traditional Chinese Medicine， Changchun" 130117; 2Jilin Academy of Chinese Medicine Sciences， Changchun" 130000;

3 School of Health Management， Changchun University of Traditional Chinese Medicine， Changchun" 130000;

4The 964th Hospital of the Joint Logistics Support Force of the Peopleｓ Liberation Army of China，Changchun" 130012; 5 Affiliated Hospital of

Changchun University of Traditional Chinese Medicine， Changchun" 130021**Corresponding author：Gao Ying，email：1012420479@qq.com;Yu Xiuhua， email：yu0316chen@163.com

［Abstract］" Objective" Establishment of a fingerprinting assay for Ganoderma lucidum spore powder and investigation of the effects of Ganoderma lucidum spore oil on the inflammatory factors IL-1β， IL-6， and TNF-α. Methods" High Performance Liquid Chromatography and High Performance Thin-layer Chromatography techniques were used to analyze the chemical composition of Ganoderma lucidum spore powder from different origins; MTT method was used to determine the cell viability; ELISA was used to determine the RAW264.7 IL-1β， IL-6 and TNF-α levels in cell supernatant. Results" The HPLC fingerprints were calibrated with a total of 12 peaks， of which peaks 1-5 were ganoderic acid C2， ganoderic acid G， ganoderic acid B， ganoderic acid A， ganoderic acid D， respectively; the current version of the Pharmacopoeia method of HPTLC showed that 10 batches of samples complied with the regulations， and the quality of raw materials of different origins was found to be similar to that of the HPLC fingerprints after 2 unfoldings by using trichloromethane-acetonitrile-methanol-formic acid （26∶4 ∶1∶1） as the unfolding agent. The differences of the spots were significant and similar to the HPLC fingerprints. Ganoderma lucidum spore oil concentration less than or equal to 180 μg/mL had no significant effect on the activity of RAW264.7 cells; the protective effect on LPS-induced RAW264.7 cells was dose-dependent; compared with the model group， the medium-dose group （90 μg/mL） significantly decreased the expression of IL-1β （Plt;0.05）， and the high-dose group （180 μg/mL） significantly decreased the expression of IL-6 and TNF-α release （Plt;0.05）， slightly reduced IL-1β release， but not significant （Pgt;0.05）. Conclusion" Ganoderma lucidum spore oil is used to reduce the inflammation of the body by inhibiting the release of inflammatory factors to achieve the protective effect on immune cells. The quality of spore powder can be initially identified by HPTLC， and HPLC fingerprinting can accurately control the quality of raw materials and guarantee the efficacy of Ganoderma lucidum spore oil.

［Key words］" Ganoderma lucidum spore oil; HPLC fingerprinting; HPTLC; IL-1β; IL-6; TNF-α

炎癥反應是宿主在內(nèi)外因素刺激下產(chǎn)生的一種防御反應。在炎癥反應過程中，激活的炎癥相關信號誘導一系列促炎因子的轉錄和翻譯，包括腫瘤壞死因子（Tumor necrosis factor，TNF）-α、白細胞介素（Interleukin，IL）-1β等［1］。IL-6是啟動全身炎癥反應最強的內(nèi)源性炎癥因子，是體現(xiàn)機體炎癥程度與病情輕重的一個重要指標。IL-1β可調(diào)控炎癥介質(zhì)的分泌和釋放，在自然免疫中起著關鍵作用。TNF-α是機體發(fā)生炎癥反應后分泌最早，對全身或局部炎癥反應起重要作用的細胞因子，由激活的單核/巨噬細胞產(chǎn)生，參與人體多種生理和病理過程的調(diào)節(jié)。有研究發(fā)現(xiàn)，過度的炎癥反應與機體多種疾病密切相關，如癌癥、神經(jīng)退行性疾病、心血管疾病、代謝綜合征、炎癥性腸病、關節(jié)炎等［2］。

靈芝（Ganoderma lucidum）為擔子菌門傘菌綱多孔菌科靈芝屬真菌，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品，性味甘平，歸心、肺、肝、腎經(jīng)，具有滋補強壯、扶正固本的功效，是亞洲國家歷史悠久的著名中草藥和食用菌。據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學研究，多糖和三萜類化合物是靈芝的主要活性成分，具有抗炎、抗菌、保肝、免疫調(diào)節(jié)等作用［3］。靈芝孢子是靈芝在成熟后的生殖細胞，由于其體積微小，易堆積成粉末狀，也被稱為靈芝孢子粉，它通過調(diào)節(jié)TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10等炎癥因子的水平，抑制促炎因子的產(chǎn)生和表達可減少炎癥反應，可治療肝炎、動脈粥樣硬化、克羅恩病、神經(jīng)炎癥等多種疾病［4］。靈芝孢子油是通過超臨界二氧化碳萃取技術從破壁靈芝孢子中提取得到的脂溶性活性物質(zhì)，集靈芝精華，富含靈芝孢子的有效成分，易被人體吸收利用，其保健功效已成為一個研究熱點?，F(xiàn)代研究表明，靈芝孢子油富含三萜類化合物、甾醇和不飽和脂肪酸，具有良好的抗氧化作用及增強免疫功能［5-6］。目前關于靈芝抗炎作用的相關研究主要集中在靈芝子實體上，而對靈芝孢子油的抗炎作用研究鮮少有人報道。為了分析靈芝孢子油在抗炎方面的物質(zhì)基礎及其作用機制，本課題組擬通過高效液相色譜法（High performance liquid chromatography，HPLC）和高效薄層色譜法（High performance thin-layer chromatography，HPTLC）確定靈芝孢子油原料的質(zhì)量，探究靈芝孢子油對脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）誘導的RAW264.7細胞是否產(chǎn)生影響，為其臨床應用提供科學依據(jù)。

1" 材料與方法

1.1" 材料與試劑

1.1.1" 材料" 甲醇、95%乙醇、乙腈、二甲基亞砜（Dimethyl sulfoxide，DMSO）購自廣東光華科技股份有限公司；對照品靈芝酸A、靈芝酸C2、靈芝酸D、靈芝酸B、靈芝酸G、靈芝醛A購自成都普思生物科技股份有限公司；純水、超純水由長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院實驗中心提供；小白鼠單核巨噬細胞白血病細胞RAW264.7購自中科院上海細胞所細胞庫；DMEM培養(yǎng)液、胰蛋白酶-EDTA（0.25%）、磷酸鹽緩沖液購自cytiva公司；胎牛血清（Fetal bovine serum，F(xiàn)BS）購自內(nèi)蒙古奧普賽生物科技有限公司；LPS購自Sigma公司；噻唑藍（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）購自Biosharp公司；IL-1β、IL-6、TNF-α試劑盒購自Sinobestbio公司。

1.1.2" 儀器與設備" 高效液相色譜儀（日本島津有限公司，型號LC-2030plus UV檢測器）、分析天平（上海精密儀器科技有限公司，型號BT125D）、臺式離心機（Eppendorf公司，型號Centrifuge 5804 R）、超純水機（上?？道變x器分析有限公司，型號Smart-P-UV）、研究級生物顯微鏡（日本Olympus公司，型號IX-73）、數(shù)顯式水浴鍋（常州普天儀器設備制造有限公司，HH-8）、CO2恒溫箱（Thermo Fisher Scientific，型號3121）、細胞計數(shù)儀（江蘇卓微生物科技有限公司，型號TC20）、X-30R超低溫離心機（上海躍進醫(yī)療器械有公司，型號TGL-20000-cR）、酶標儀（美國博騰儀器有限公司，型號Epoch2）。

1.1.3" 靈芝藥材產(chǎn)地批次" D1（對照藥材）購自中國食品藥品檢定研究院（批號120968-202111）；靈芝孢子粉：S1靈芝孢子粉產(chǎn)地四川（吉林安國藥業(yè)有限公司，批號220629）、S2靈芝孢子粉產(chǎn)地吉林（吉林安國藥業(yè)有限公司，批號20211201）、S3靈芝孢子粉產(chǎn)地吉林（吉林安國藥業(yè)有限公司，批號20211202）、S4靈芝孢子粉產(chǎn)地吉林（吉林安國藥業(yè)有限公司，批號20220101）、S5靈芝孢子粉產(chǎn)地吉林（吉林安國藥業(yè)有限公司，批號20220102）、S6靈芝孢子粉產(chǎn)地吉林（吉林安國藥業(yè)有限公司，批號20220103）、S7靈芝孢子粉產(chǎn)地山東（吉林安國藥業(yè)有限公司，批號20220106）、S8靈芝孢子粉產(chǎn)地山東（吉林安國藥業(yè)有限公司，批號20220107）、S9靈芝孢子粉產(chǎn)地江蘇（吉林安國藥業(yè)有限公司，批號20220104）、S10靈芝孢子粉產(chǎn)地江蘇（吉林安國藥業(yè)有限公司，批號20220105）。

1.2" HPLC指紋圖譜建立

1.2.1" 供試品溶液制備" 取錐形瓶，分別加入精密稱定的靈芝孢子樣品10.0 g，精密量取50 mL濃度為90%的乙醇溶液回流提取1 h，過濾，第一次濾完后將濾渣及濾紙復入錐形瓶中，第二次精密加入60 mL濃度為90 %乙醇溶液，繼續(xù)回流1 h，合并兩次濾液，于40 ℃水浴鍋上濃縮至約2 mL，用90%乙醇定容于5 mL量瓶中，上清液用0.22 μm微孔濾膜過濾，即得。

1.2.2" 對照品溶液制備" 精密稱取靈芝酸A、靈芝酸C2、靈芝酸B、靈芝酸D、靈芝酸G對照品，用甲醇溶解并制成濃度為0.5 mg/mL的對照品溶液母液，置-20 ℃冰箱保存，備用。精密吸取各對照品儲備液適量，制備成混合系列對照品溶液。

1.2.3" HPLC色譜條件" 色譜柱Waters Symmetry C18（5 μm，4.6×250 mm Column），梯度洗脫條件見表1，流量為1.0 mL/min，檢測波長為254 nm；進樣量為20 μL，柱溫為30" ℃。

1.2.4" 方法學考察" ①精密度試驗：精密吸取上述混合對照品溶液1份，按照1.2.3中色譜條件連續(xù)進樣6次，以靈芝酸A為參照峰，計算各峰的相對保留時間及相對峰面積的相對標準偏差（Relative standard deviation，RSD）值。②重復性試驗：按上述供試品溶液制備方法同時制備供試品溶液6份，進樣色譜條件按照1.2.3中內(nèi)容，以靈芝酸A為參照峰，計算得各峰的相對保留時間及相對峰面積的RSD值。③穩(wěn)定性試驗：供試品溶液制備方法按1.2.1，分別在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h按照1.2.3中色譜條件進樣，以靈芝酸A為參照峰，計算得各峰的相對保留時間及相對峰面積的RSD值。④相似度評價：按照1.2.1中方法制備10批不同產(chǎn)地的靈芝孢子供試品溶液，按1.2.3中的方法進行測定，采用“藥典委員會2012A版中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)”對數(shù)據(jù)進行分析。

1.3" HPTLC圖譜構建供試品制備

按照1.2.1中方法制備10批不同產(chǎn)地的靈芝孢子的供試品溶液。對照藥材制備按照1.2.1中方法制備。色譜條件1見表2，色譜條件2見表3。

1.4" 靈芝孢子油對LPS誘導的RAW264.7細胞的影響

1.4.1" 靈芝孢子油樣品的制備" 取本品內(nèi)容物500 mg，使用0.5 mL DMSO溶解，制成1 000 mg/mL的母液置于-20 ℃冰箱保存，使用前放置常溫后稀釋1 000倍，待用。

1.4.2" 細胞培養(yǎng)" 使用完全DMEM培養(yǎng)基（含10%FBS和1%雙抗的DMEM高糖培養(yǎng)基）對RAW264.7細胞進行換液、傳代后再放置于5％ CO2的37 ℃培養(yǎng)箱中，待細胞處于對數(shù)生長期時可進行所需的細胞實驗。

1.4.3" MTT法篩選最佳濃度" 對細胞消化并進行計數(shù)，將密度為7×104個/孔的細胞鋪至96孔板中，每孔加入100 μL，貼壁培養(yǎng)24 h后給予不同濃度的樣品溶液，濃度分別為11.25 μg/mL、22.50 μg/mL、45.00 μg/mL、90.00 μg/mL、180.00 μg/mL，設空白對照組。37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后加入5 mg/mL 的MTT溶液10 μL讓其和細胞生成藍紫色結晶，于培養(yǎng)箱中孵育4 h后棄去上清，加入150 μL DMSO讓藍色結晶溶解，震搖后設置酶標儀波長為490 nm讀取OD值。按照公式計算出細胞存活率。

1.4.4" 對LPS誘導的RAW264.7細胞的保護作用" 取對數(shù)生長密度為7×104個/孔的細胞鋪至96孔板中，每孔100 μL，培養(yǎng)24 h后棄去培養(yǎng)基，空白對照孔和模型孔分別加入培養(yǎng)液100 μL，靈芝孢子油低、中、高劑量組分別加入濃度為45.00 μg/mL、90.00 μg/mL、180.00 μg/mL的溶液各100 μL，培養(yǎng)24 h后，空白對照孔加入100 μL完全培養(yǎng)液，模型組和實驗組加入LPS溶液，使LPS終濃度為1 μg/mL，培養(yǎng)24 h，加5 mg/mL MTT溶液10 μL，方法同1.4.3測定OD值，計算細胞存活率。

1.4.5" 對LPS誘導的RAW264.7細胞釋放IL-1β、IL-6、TNF-α的影響" 將密度為1×105個/孔的RAW264.7細胞鋪至6孔板中，培養(yǎng)24 h，分組為空白對照組、模型組（LPS終濃度為1 μg/mL）、靈芝孢子油低、中、高劑量組，空白對照組100 μL完全培養(yǎng)基、模型組和實驗組加入1 μg/mL的LPS溶液，培養(yǎng)24 h后棄去上清液，空白對照組加入100 μL完全培養(yǎng)基，模型組繼續(xù)加LPS溶液，實驗組加入不同濃度（45.00 μg/mL、90.00 μg/mL、180.00 μg/mL）的樣品溶液培養(yǎng)24 h后進行IL-1β、IL-6和TNF-α測定，采用ELISA試劑盒測定上述炎癥因子含量。

1.5" 統(tǒng)計學方法

采用GraphPad Prism 8.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，正態(tài)分布計量資料采用單因素方差分析，任意兩組比較采用Turkey法，檢驗水準α=0.05。

2" 結果

2.1" 靈芝孢子的HPLC指紋圖譜結果分析

2.1.1" 精密度試驗" 以靈芝酸A色譜峰為參照峰，計算各峰的相對保留時間范圍為0.00%～0.38%，相對峰面積的RSD值范圍為0.00%～1.05%，均小于3%，表明該儀器精密度良好。

2.1.2" 重復性試驗" 各峰的相對保留時間范圍為0.00%～0.13%，相對峰面積的RSD值范圍為0.00%～4.69%，均小于5%，表明該方法重復性良好。

2.1.3" 穩(wěn)定性試驗" 供試品溶液在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h各峰的相對保留時間范圍為0.00%～0.20%，相對峰面積的RSD值范圍為0.00%～4.61%，均小于5%，表明在12 h內(nèi)靈芝孢子供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.1.4" 相似度評價" 采用“藥典委員會2012A版中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)”對數(shù)據(jù)進行分析。以S1樣品為參照圖譜，通過分析共標定出共有峰12個，見圖1；與標準品比對后共出現(xiàn)5個特征峰，依次為靈芝酸C2、靈芝酸G、靈芝酸B、靈芝酸A、靈芝酸D，見圖2；結果如表4所示，10批靈芝孢子樣品的相似度結果均在0.949以上，樣品相似度較好，但不同批次樣品間存在差異。如圖1所示，90～100 min時，S1所檢出成分峰面積普遍偏高，其次便是吉林產(chǎn)地的（S2～S6）。10批不同產(chǎn)地的靈芝孢子樣品指紋圖譜疊加圖及其對照指紋圖譜（R）見圖1。

2.2" 靈芝孢子粉的HPTLC鑒別及指紋圖譜分析

根據(jù)色譜條件1得到的靈芝孢子HPTLC圖譜，見圖3。根據(jù)色譜條件2得到的靈芝孢子HPTLC圖譜，見圖4、圖5。不同來源的靈芝提取物很容易被鑒別，而且根據(jù)其熒光強弱，也能定性地反應出藥材優(yōu)劣。由圖3可見，S1～S10這10個產(chǎn)地均符合藥典標準，且S1藥材質(zhì)量優(yōu)于其他產(chǎn)地。由圖4、圖5可見，根據(jù)色譜條件2得到的靈芝孢

注：D1為對照藥材；S1為四川產(chǎn)靈芝孢子粉；S2～S6為吉林產(chǎn)靈芝孢子粉；S7、S8為山東產(chǎn)靈芝孢子粉；S9、S10為江蘇產(chǎn)靈芝孢子粉

子粉的HPTLC色譜圖斑點更多，可檢出成分比現(xiàn)行版藥典法多，但某些斑點分離度小。不同產(chǎn)地來源及批號的靈芝孢子粉色譜圖同樣具有較大的差異，靈芝酸A及靈芝酸C在樣品中具有顯著性差異，可作為藥材質(zhì)量鑒定的標志物，間接鑒定藥材質(zhì)量。

2.2.1" 靈芝孢子油對RAW264.7細胞存活率的影響

與空白對照組相比，細胞存活率越高的藥物濃度越適宜作為給藥濃度。結果顯示，當溶液濃度為11.25～180.00 μg/mL時，無細胞毒性，且細胞處于增殖狀態(tài)，濃度越大，促增殖作用越強，見圖6。故分別選擇45.00 μg/mL、90.00 μg/mL、180.00 μg/mL作為低、中、高劑量組濃度。

2.2.2" 靈芝孢子油對LPS誘導的RAW264.7細胞活性的影響

當細胞在與不同濃度的樣品溶液共同孵育24 h后，加入LPS（1 μg/mL），繼續(xù)培養(yǎng)24 h，靈芝孢子油溶液對細胞具有明顯的保護作用，且隨濃度增大而增強，見圖7。

2.2.3" 靈芝孢子油對LPS誘導的RAW264.7細胞釋放的炎癥因子的影響

與模型組相比，不同濃度的靈芝孢子油溶液實驗組的IL-1β表達量均有所降低，中劑量組IL-1β表達量低于模型組（P＜0.05），見圖8A。與模型組比，各不同濃度的靈芝孢子油實驗組的IL-6、TNF-α釋放量均降低，其中高劑量組IL-6、TNF-α水平低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見圖8B、圖8C。

3" 討論

目前人口老齡化已成為一種全球現(xiàn)象，老年人健康問題是老齡化社會中最突出的問題。衰弱是老年常見病，炎癥在衰弱中起到了重要作用。炎癥是保護人體免受外源病原體侵害的重要防御機制之一，但是過度或異常的炎癥反應會導致各種疾病的發(fā)生［7］。因此，調(diào)節(jié)炎癥反應對于治療相關疾病和保持健康具有重要意義。靈芝在《本草綱目》中記載“久食輕身不老，延年神仙”［8］。自古為延年益壽，抗衰老，增強免疫力良藥。主要含有多糖類、甾醇、靈芝酸A、C等成分。本實驗建立了靈芝孢子粉的HPLC指紋圖譜，結果顯示10批樣品特征圖譜相似度均大于0.9，可確保孢子粉質(zhì)量是可控的。有研究表明，當提取溫度為40 ℃時，靈芝孢子總三萜的得率達到峰值，升高提取溫度得率反而下降［9］。本實驗在提取過程中也進行了探究，結果顯示40 ℃水浴蒸干提取效果好，峰數(shù)量多且面積大，故選擇了40 ℃水浴蒸干。

通過HPTLC色譜鑒別方法，本研究前期對不同展開體系、不同顯色條件、不同展開次數(shù)、不同薄層板及其穩(wěn)定性進行考察，結果表明，在對照品色譜、對照藥材色譜相應位置上，供試品的色譜斑點顏色大小相同，且各考察因素下結果差異不大，薄層板對薄層鑒別方法的影響較小。

靈芝多糖具有抗氧化應激的作用和抗衰老、抗氧化作用［10］。β-谷甾醇在提高免疫力上發(fā)揮著重要的作用，它可通過抑制一氧化氮（Nitric oxide，NO）合成、減少IL-1β等炎癥因子分泌從而發(fā)揮抗炎作用［11-12］。炎癥通常是伴隨多種疾病狀態(tài)的一種共有的病理現(xiàn)象，巨噬細胞是主要的炎癥細胞，有研究發(fā)現(xiàn)巨噬細胞受到外界LPS等抗原刺激后會發(fā)生形態(tài)改變，具體表現(xiàn)為體積增大，細胞出現(xiàn)多形性，胞質(zhì)中出現(xiàn)空泡，并伴隨一系列重要炎癥細胞因子如NO、IL-6、TNF-α的釋放，它們均會促進炎癥反應［13］。本實驗采用RAW264.7小鼠單核巨噬細胞模擬體內(nèi)巨噬細胞參與抗炎的過程，應用MTT法檢測細胞活性，結果表明不同濃度的靈芝孢子油作用于LPS誘導的細胞損傷實驗中，靈芝孢子油對RAW264.7細胞具有保護作用。通過對細胞中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α的研究，表明靈芝孢子油能減輕細胞炎癥反應。

綜上所述，本研究中建立的HPLC、HPTLC實驗條件可為靈芝孢子粉的真?zhèn)舞b別和質(zhì)量評價提供參考，為靈芝孢子油的制備提供質(zhì)量保證。而不同濃度的靈芝孢子油作用于LPS誘導的細胞損傷實驗中，表明靈芝孢子油對RAW264.7細胞具有保護作用。通過對細胞中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α的研究，表明靈芝孢子油能減輕細胞的炎癥反應，為未來臨床應用靈芝孢子油的抗炎活性提供理論基礎。

參考文獻

［1］" Jiang S Q， Zhang J S， Feng J， et al. Anti-inflammatory activities and mechanism of Ganoderma lingzhi β-glucooligosaccharide in vitro［J］. Mycosystema， 2024，43（7）：104-113.

［2］" Tao Q，Li J Y. Advances in research on the relationship between inflammation and disease［J］. J Tradit Chin Veterin Med， 2023，42（5）：34-43.

［3］" Luo H J， Lin D M， Wang L F， et al. Research progress on active ingredient analysis and quality evaluation of Ganoderma lucidum［J］. Chin J Pharm Anal， 2023，43（1）：51-60.

［4］" Gao Y J， Luo S， Song Y， et al. Research progresson the anti-inflammatory mechanism of ganoderma lucidum［J］. Edible Fungi of China， 2021，40（9）：1-4，10.

［5］" Zhao Y X， Guo Y， Hu F， et al. Effect of Ganoderma lucidum spore oil on the antioxidative capacity of aged mice［J］. Acad Period Farm Prod Proc， 2020（3）：4-7.

［6］" Wu X， Cao J L， Li M X， et al. An integrated microbiome and metabolomic analysis identifies immunoenhancing features of Ganoderma lucidum spores oil in mice［J］. Pharmacol Res， 2020，158：104937.

［7］" Liu Y， Wang H H， Lv J L， et al. Inhibitory effect and mechanism of riligustilide from danggui（ angelica sinensis） on LPS - induced inflammatory response in RAW 264.7 cells［J］. Chin Arch Tradit Chin Med， 2024， 42（7）：140-146，284.

［8］" Wang D. Experimental study on Ganoderic Acid A de-laying the degeneration of lumbar intervertebral disc and its mechanism in rats［D］. Wuhan： Hubei University of Traditional Chinese Medicine， 2023.

［9］

Wen H P， Lei W M， Ke L Q， et al. Optimization of total triterpenoids extraction from Ganoderma lucidum spore powder and evaluations of their biological capacities in vitro［J］. Acta Agriculturae Zhejiangensis， 2020，32（4）：705-713.

［10］Liu C D， Yang N， Song Y， et al. Ganoderic acid C1 isolated from the anti-asthma formula， ASHMITM suppresses TNF-α production by mouse macrophages and peripheral blood mononuclear cells from asthma patients［J］. Int Immunopharmacol， 2015，27（2）：224-231.

［11］Liu W L， Ji Y， Huang A X. Research and development progress of β-sitosterol［J］. Acad Period Farm Prod Proc， 2019（1）：77-79，82.

［12］Choi J N， Choi Y H， Lee J M， et al. Anti-inflammatory effects of β-sitosterol-β-D-glucoside from trachelosper-mum jasminoides （Apocynaceae） in lipopolysaccharide-stimulated RAW 264.7 murine macrophages［J］. Nat Prod Res， 2012， 26（24）：2340-2343.

［13］Gao X J， Guo M Y， Zhang Z C， et al. Bergenin plays an antiinflammatory role via the modulation of MAPK and NF-κB signaling pathways in a mouse model of LPS-induced mastitis［J］. Inflammation， 2015，38（3）：1142-1150.

國際老年醫(yī)學雜志" 2025年1月" 第46卷第1期" Int J Geriatr，January" 2025，Vol.46 No.12025國際老年醫(yī)學雜志編輯部" 2025Editorial Office of International Journal of Geriatrics

國際老年醫(yī)學雜志" 2025年1月" 第46卷第1期" Int J Geriatr，January 2025，Vol.46 No.12025國際老年醫(yī)學雜志編輯部" 2025Editorial Office of International Journal of Geriatrics