大豆卵磷脂和低密度脂蛋白在山羊精液冷凍保存中的應(yīng)用研究進(jìn)展

摘要" 精液冷凍保存技術(shù)是現(xiàn)代畜牧業(yè)中用于遺傳資源保護(hù)和繁殖管理的重要手段。本文從山羊精液冷凍保存技術(shù)及其保存過(guò)程中的冷凍損傷和冷凍保護(hù)劑的應(yīng)用，大豆卵磷脂（SL）和低密度脂蛋白（LDL）在精液冷凍保存中的作用機(jī)理及應(yīng)用，以及兩者的聯(lián)合應(yīng)用等方面，探討了SL和LDL在山羊精液冷凍保存中的研究進(jìn)展。山羊精液冷凍保存技術(shù)是指通過(guò)構(gòu)建極低溫環(huán)境使山羊精液中的精子生理活動(dòng)處于靜止?fàn)顟B(tài)。精液在保存過(guò)程中受低溫環(huán)境的影響導(dǎo)致細(xì)胞受損，活性氧積累導(dǎo)致精子質(zhì)量下降，而冷凍保護(hù)劑的使用如甘油和卵黃可以減少精液冷凍保存過(guò)程中冰晶的形成，保護(hù)精子細(xì)胞膜免受冰晶的刺破。SL作為一種天然磷脂，在山羊精液冷凍保存過(guò)程中，能夠減少冰晶形成，減輕活性氧對(duì)精子的傷害，從而降低對(duì)精子的損傷；LDL作為一種存在于雞蛋黃中的脂蛋白，可與精液中的有害陽(yáng)離子肽競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，保護(hù)精子免受有害蛋白的損傷；兩者具有協(xié)同效應(yīng)，LDL增強(qiáng)了SL的冷凍保護(hù)作用，而SL提供額外的抗氧化保護(hù)，共同提高精子在冷凍和解凍過(guò)程中的存活率，提高冷凍保護(hù)劑的整體效果。本文為山羊精液冷凍保存提供思路和參考。

關(guān)鍵詞" 大豆卵磷脂；低密度脂蛋白；精液冷凍保存；山羊；精液質(zhì)量

中圖分類號(hào)" S827.3" " " "文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼" A" " " "文章編號(hào)" 1007-7731（2025）02-0051-07

DOI號(hào)" 10.16377/j.cnki.issn1007-7731.2025.02.010

Advances in the application of soy lecithin and low-density lipoprotein in the cryopreservation of goat semen

MENG Kangcheng" " WANG Ru" " PANG Rui" " CHENG Xiao" " REN Chunhuan

（College of Animal Science and Technology， Anhui Agricultural University， Hefei 230036， China）

Abstract" Semen cryopreservation technology is an important means for the protection of genetic resources and breeding management in modern animal husbandry. In this paper， the research progress of soy lecithin （SL） and low- density lipoprotein （LDL） in cryopreservation of goat semen was discussed from the aspects of cryopreservation technology， cryopreservation damage in semen cryopreservation， and application of cryoprotectants， the mechanism and application of SL and LDL in cryopreservation of semen， and their combined application. The cryopreservation technology of goat semen is to make the physiological activity of sperm in goat semen static by constructing an extremely low temperature environment. Semen is affected by low temperature environment during storage， resulting in cell damage and accumulation of reactive oxygen species leading to sperm quality decline. The use of cryopprotectants such as glycerin and yolk can reduce the formation of ice crystals during cryopreservation of semen and protect sperm cell membrane from the punctured ice crystals. SL as a natural phospholipid， can reduce the formation of ice crystals and the damage of reactive oxygen species to sperm during cryopreservation of goat semen， thus reducing the damage of sperm by cryopreservation. LDL as a lipoprotein in egg yolk， can competitively bind with harmful cationic peptides in semen to protect sperm from harmful protein damage. The two have a synergistic effect， LDL enhances the cryoprotective effect of SL， while SL provides additional antioxidant protection， which together improves the survival rate of sperm during freezing and thawing， improving the overall effect of the cryoprotectants. This paper provides ideas and references for cryopreservation of goat semen.

Keywords" soy lecithin; low-density lipoprotein; semen cryopreservation; goat; semen quality

中國(guó)有悠久的山羊養(yǎng)殖歷史，養(yǎng)殖數(shù)量和品種多樣性均較高，隨著城鄉(xiāng)居民收入水平的不斷提高，國(guó)內(nèi)人均羊肉消費(fèi)量持續(xù)增長(zhǎng)。然而，在山羊養(yǎng)殖方面存在許多問(wèn)題，如小規(guī)模分散養(yǎng)殖、養(yǎng)殖技術(shù)和品種性能有待提高，以及疾病防治能力有待加強(qiáng)等。精液冷凍保存技術(shù)的發(fā)展對(duì)于遺傳資源的長(zhǎng)期保存和優(yōu)良品種的快速繁殖具有重要意義。改善山羊精液冷凍保存技術(shù)對(duì)于提高優(yōu)良種公羊利用率、擴(kuò)大遺傳影響范圍至關(guān)重要。然而，山羊精液對(duì)冷凍保存的敏感性較高，冷凍過(guò)程中易受到損傷，導(dǎo)致解凍后的精子活力下降。因此，研究有效的冷凍保護(hù)劑對(duì)于提高山羊精液冷凍保存效果具有重要意義。目前，許多學(xué)者對(duì)精液冷凍保存技術(shù)進(jìn)行了深入研究。這些研究主要集中在開(kāi)發(fā)新型稀釋劑、優(yōu)化冷凍程序以及探索植物源性保護(hù)劑等方面。Ugur等[1]指出，改進(jìn)冷凍保護(hù)程序，開(kāi)發(fā)新型拓展劑可以有效減少公牛精液冷凍后的細(xì)胞損傷，提高解凍后的精子質(zhì)量，證明了優(yōu)化冷凍過(guò)程對(duì)于提高精子質(zhì)量具有重要作用。Zhang等[2]研究了過(guò)量活性氧（Reactive oxygen species，ROS）引起的氧化應(yīng)激對(duì)奶山羊精液的影響，并通過(guò)添加黃芪多糖來(lái)改善精液冷凍保存效果，結(jié)果表明，0.2 g/L黃芪多糖處理能有效提高精子線粒體膜電位和三磷酸腺苷含量，并通過(guò)調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白降低了精子的凋亡率。針對(duì)奶山羊精漿中含有磷脂酶和卵黃凝集酶的情況，Zou等[3]利用牛精漿代替奶山羊精漿進(jìn)行山羊精液冷凍保存，結(jié)果顯示，牛精漿加用牛稀釋液，可以提高奶山羊精子的冷凍質(zhì)量。這些研究證明了選擇替代性冷凍保護(hù)劑的重要性。已有大量研究致力于改善精液冷凍保存技術(shù)，但在冷凍保護(hù)劑開(kāi)發(fā)與應(yīng)用方面仍存在較多不足。因此，本文綜述了大豆卵磷脂（Soybean lecithin，SL）和低密度脂蛋白（Low-density lipoprotein，LDL）在山羊精液冷凍保存中的應(yīng)用效果及其作用機(jī)理，為進(jìn)一步提高山羊精液冷凍保存技術(shù)提供參考。

1 山羊精液冷凍保存技術(shù)

山羊精液冷凍保存技術(shù)是指通過(guò)使用氮?dú)鈽?gòu)建極低溫環(huán)境使山羊精液中的精子生理活動(dòng)處于靜止?fàn)顟B(tài)。在母山羊發(fā)情需要交配時(shí)，將儲(chǔ)存的精子解凍，使其恢復(fù)正?；盍?，并通過(guò)人工授精的方式將精子注射入母羊體內(nèi)，確保母山羊能夠正常受孕[4]。但山羊精子在冷凍—解凍過(guò)程中會(huì)受到氧化應(yīng)激、冷應(yīng)激等不利因素帶來(lái)的損傷，導(dǎo)致精子解凍后質(zhì)量較低，限制了山羊凍精的應(yīng)用。此外，山羊精液冷凍保存效果也受精液的稀釋比、冷凍保護(hù)劑類型、抗氧化劑和稀釋劑種類等影響[5]。稀釋液的稀釋倍數(shù)對(duì)山羊精液的受胎率有顯著影響，劉孝德等[6]研究表明，山羊精液常溫稀釋液的稀釋倍數(shù)比為1∶10（v∶v）和1∶50（v∶v）時(shí)，母羊的第一情期受胎率最高。一般用于精液冷凍保存的擴(kuò)展劑含有冷凍保護(hù)劑（如甘油或卵黃）[7]、維持滲透壓的物質(zhì)[8]、能量來(lái)源（如葡萄糖或果糖）以及酶和抗生素等[9]。目前，山羊精液冷凍保存稀釋液中通常使用Tris作為緩沖液，并在其中添加無(wú)機(jī)鹽（如檸檬酸鈉，檸檬酸）、糖類（如葡萄糖，果糖和乳糖）、冷凍保護(hù)劑（如卵黃和甘油）以及抗氧化劑等物質(zhì)。這些物質(zhì)在冷卻、冷凍和解凍期間對(duì)于維持精子的活力至關(guān)重要，而各物質(zhì)的添加量也會(huì)對(duì)精液冷凍造成較大影響[10]。近年來(lái)大量研究對(duì)部分傳統(tǒng)配制原料進(jìn)行代替或補(bǔ)充，Thiangthientham等[11]評(píng)估了用芝麻油替代卵黃對(duì)山羊精子質(zhì)量的影響，結(jié)果表明，8.75%卵黃和1.25%芝麻油組成的稀釋劑相比于10%卵黃，其保存的精子質(zhì)量更高。Alcay等[12]研究表明，將8%虹鱒精漿添加進(jìn)基于卵磷脂的補(bǔ)充劑中，對(duì)山羊精子保存具有有益的作用。

2 山羊精液冷凍保存中的冷凍損傷

在精液冷凍保存和升溫解凍過(guò)程中，精子細(xì)胞因外界環(huán)境變化而受到一定的損傷，再加上山羊精子質(zhì)膜較薄，抗冷打擊能力較弱，其在低溫環(huán)境下容易受損，導(dǎo)致冷凍保存效果不佳[13]。在冷凍過(guò)程中，精子細(xì)胞外的水會(huì)形成冰晶，導(dǎo)致細(xì)胞外溶液濃度升高，細(xì)胞脫水，細(xì)胞內(nèi)溶質(zhì)濃度增加，冰點(diǎn)降低，從而損傷精子細(xì)胞；另一方面，形成的冰晶可能會(huì)刺破精子細(xì)胞膜，損害其正常生理功能[14]。山羊精子細(xì)胞含有大量的多不飽和脂肪酸（Polyunsaturated fatty acid， PUFA），這使得精子膜更容易受到ROS引起的氧化損傷[15]。另外，在精液冷凍保存過(guò)程中，精子因遭受冷打擊，可能導(dǎo)致ROS過(guò)量積累并與精子質(zhì)膜發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，造成精子活力降低、線粒體功能受損、質(zhì)膜完整性破壞和精子凋亡，使精子喪失正常的生理功能和授精能力[16]。

3 山羊精液冷凍保存中冷凍保護(hù)劑的應(yīng)用

精液冷凍保護(hù)劑在精子冷凍保存中起著至關(guān)重要的作用，其可以有效降低極低溫環(huán)境對(duì)精子的損傷，保證精子在解凍后仍能保持正?；盍?。精液冷凍保護(hù)劑可以分為滲透性保護(hù)劑和非滲透性保護(hù)劑[17]。滲透性保護(hù)劑的作用是降低冰核溫度和縮小冰晶尺寸，滲入精子細(xì)胞內(nèi)部，提高精子細(xì)胞內(nèi)的溶液濃度，從而防止精子細(xì)胞因嚴(yán)重脫水而受損[18]。常見(jiàn)的滲透性保護(hù)劑包括甘油、乙二醇等，但其具有一定毒性，某些試劑滲透到精子細(xì)胞內(nèi)部，易造成細(xì)胞損傷[19]，因此需要使用非滲透性冷凍保護(hù)劑來(lái)保護(hù)冷凍的精子細(xì)胞。非滲透性冷凍保護(hù)劑通常是大分子物質(zhì)，無(wú)法穿透精子細(xì)胞內(nèi)部，不會(huì)破壞細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)。常見(jiàn)的非滲透性保護(hù)劑包括卵黃和脫脂乳等[20]。本文介紹了滲透性保護(hù)劑甘油和非滲透性保護(hù)劑卵黃在精液冷凍保存中的應(yīng)用。

3.1 甘油在精液冷凍保存中的應(yīng)用

甘油作為一種小分子物質(zhì)，可以通過(guò)精子細(xì)胞膜進(jìn)入精子內(nèi)部，改變細(xì)胞內(nèi)溶液濃度和物質(zhì)組成，并通過(guò)降低細(xì)胞內(nèi)溶液的冰點(diǎn)，減少精液冷凍保存過(guò)程中冰晶的形成，從而保護(hù)精子[21]。姜璐瑤等[22]研究表明，在冷凍稀釋液中添加6%甘油作為冷凍保護(hù)劑，搭配-100～-10 ℃溫區(qū)內(nèi)以-40 ℃/min的速率進(jìn)行降溫的精液冷凍程序，更適合東佛里生奶綿羊精液的冷凍保存。在公羊精液冷凍保護(hù)劑中添加3%甘油+3%二甲基乙酰胺或4%甘油+二甲基乙酰胺，其冷凍保護(hù)效果較好[23]。席利萌等[18]評(píng)估了滲透性冷凍保護(hù)劑對(duì)山羊精子的抗冷凍保護(hù)作用，結(jié)果證明，以Tris卵黃為基礎(chǔ)，稀釋添加6%的甘油對(duì)山羊精液起到較好的保存效果。以上研究表明，甘油作為滲透性冷凍保護(hù)劑對(duì)精液冷凍保存具有積極作用。

3.2 卵黃在精液冷凍保存中的應(yīng)用

卵黃是一種應(yīng)用較廣泛的非滲透性冷凍保護(hù)劑，具有豐富的卵磷脂和脂蛋白，可以保護(hù)精子細(xì)胞膜免受冰晶的刺破，防止精子冷休克[24]。然而，卵黃的使用可能會(huì)導(dǎo)致潛在的有害代謝產(chǎn)物和毒素生成，且卵黃成分具有顯著的個(gè)體差異，不同禽類卵黃對(duì)山羊精液的冷凍效果影響也有不同。Swelum等[25]比較了各種禽類卵黃對(duì)山羊精液冷凍保存效果的影響，結(jié)果表明，在曲線速度、直線速度和漸進(jìn)性運(yùn)動(dòng)等方面，相比于其他禽類卵黃稀釋液，雞卵黃稀釋液在改善解凍后山羊的精子質(zhì)量上有更好的效果。山羊精漿中的卵黃凝固酶能夠?qū)⒙腰S中的卵磷脂水解為脂肪酸和溶血卵磷脂，而溶血卵磷脂會(huì)對(duì)山羊精子的活力和頂體產(chǎn)生不利影響[26]，且卵黃作為動(dòng)物源成分之一，易在冷凍過(guò)程和體外受精過(guò)程中受到微生物或其他物質(zhì)的污染，所以研究者傾向使用植物源性冷凍保護(hù)劑代替卵黃，SL是其中一種代表性物質(zhì)，范文華等[27]通過(guò)添加SL降低了卵黃的使用濃度，有效減少了溶血卵磷脂的生成量，降低了對(duì)精子的毒害作用。

綜上，傳統(tǒng)的山羊冷凍保護(hù)劑以卵黃為主，但其作為動(dòng)物源成分，存在一定的生物安全性風(fēng)險(xiǎn)，且成分復(fù)雜，不易制備標(biāo)準(zhǔn)濃度的冷凍保護(hù)劑。因此選擇替代卵黃的物質(zhì)非常有必要。本文分析了SL和LDL在精液冷凍保存中的作用機(jī)理及應(yīng)用，為改良山羊精液冷凍稀釋液配方提供參考。

4 SL在精液冷凍保存中的作用機(jī)理及應(yīng)用

SL是一種天然磷脂，含有豐富的磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺等成分。磷脂酰膽堿是細(xì)胞膜的重要組成部分，在精子冷凍保存過(guò)程中，可以維持精子細(xì)胞膜的流動(dòng)性和穩(wěn)定性，防止細(xì)胞膜在低溫條件下發(fā)生硬化或損傷[28]。在精液冷凍保存中，SL能夠模擬精子膜的脂質(zhì)環(huán)境，減少冰晶形成，降低對(duì)精子的損傷。還可以通過(guò)減少ROS對(duì)精子的損傷，保護(hù)精子細(xì)胞膜的完整性和功能，維持細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，從而使其在冷凍和解凍過(guò)程中保持結(jié)構(gòu)完整性[28]。此外，SL無(wú)法通過(guò)精子細(xì)胞膜，使得細(xì)胞外溶液濃度增加，精子細(xì)胞脫水，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而降低精子在冷凍保存過(guò)程中受到機(jī)械損傷的可能[29]。SL還能提高細(xì)胞外溶液的滲透壓，增強(qiáng)精子對(duì)不同滲透壓的抵抗能力，有助于減少精子質(zhì)膜和頂體外膜的損傷[30]。Fukui等[31]使用以SL為基礎(chǔ)的稀釋液和含有卵黃的Tris稀釋液進(jìn)行人工授精，并比較了母羊的生育能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SL在動(dòng)物精子冷凍保存中表現(xiàn)出比卵黃更強(qiáng)的安全性能。

近年來(lái)，SL已廣泛應(yīng)用于豬、牛和雞等動(dòng)物的精液冷凍保存中。汪俊躍等[32]研究發(fā)現(xiàn)，利用5%高壓均質(zhì)SL替代卵黃對(duì)豬精液冷凍保存具有良好的效果，能有效提高精子質(zhì)量，研究結(jié)果證明了SL替代卵黃的可行性和優(yōu)勢(shì)。Abdel-ghani等[33]研究表明，在0.125%卵磷脂納米粒子的作用下，荷斯坦公牛的冷凍精子在平衡和解凍后顯示出更出色的性能。Sun等[34]在稀釋液中添加1.0%納米SL可顯著提高公雞精液活力，改善質(zhì)膜和頂體完整性，提高解凍后精子的線粒體活性，并增強(qiáng)了總抗氧化能力與超氧化物歧化酶活性，有效提升了公雞精液解凍后的質(zhì)量和生育能力，這一結(jié)果證明了SL在家禽精液冷凍保存程序中的應(yīng)用價(jià)值。SL的優(yōu)勢(shì)還體現(xiàn)在山羊精液冷凍保存中，含有不同濃度SL的稀釋劑能夠有效保持精子的活力和功能，起到較好的冷凍保護(hù)效果[28]。Kasimanickam等[35]比較了不同稀釋液對(duì)綿羊精子在液體儲(chǔ)存期間的DNA碎片指數(shù)、線粒體膜電位和精子運(yùn)動(dòng)性的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在綿羊精液冷凍保存中添加11%的SL精液保存效果良好，且精子的一些運(yùn)動(dòng)參數(shù)顯著優(yōu)于使用卵黃，揭示了SL作為動(dòng)物源稀釋液替代品的巨大潛力。王震[36]在絨山羊精液冷凍稀釋液中聯(lián)合添加LDL和SL代替卵黃，結(jié)果表明，該處理明顯提高解凍后山羊精液的質(zhì)量。Salmani等[37]研究結(jié)果顯示，添加1.5% SL相較于卵黃，解凍后精子的活力和質(zhì)膜完整性雖沒(méi)有顯著差異，但精子運(yùn)動(dòng)能力有所提升。

以上研究結(jié)果表明，SL不僅能夠替代卵黃，而且在某些方面還具有更優(yōu)的效果。此外，SL價(jià)格相對(duì)較低，更適合應(yīng)用于大規(guī)模冷凍精液生產(chǎn)，并且不含蛋黃和奶粉等動(dòng)物源性病毒和支原體，對(duì)于提高精液冷凍保存的安全性和可持續(xù)性具有重要意義。同時(shí)，使用SL作為冷凍保護(hù)劑，有助于減少對(duì)動(dòng)物資源的依賴，符合當(dāng)前對(duì)環(huán)境友好和可持續(xù)發(fā)展的要求。在精液冷凍過(guò)程中，通過(guò)調(diào)整SL濃度和與其他成分（如甘油、糖類等）的組合，可以優(yōu)化山羊精液冷凍程序，提高精子的冷凍存活率和解凍后的人工授精效率。

5 LDL在精液冷凍保存中的作用機(jī)理及應(yīng)用

LDL作為一種存在于雞蛋黃中的脂蛋白，在膽固醇代謝和類固醇激素合成中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[38]。在精液冷凍保存過(guò)程中，精子可能會(huì)遭受物理和化學(xué)損傷，導(dǎo)致結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變。LDL可與精液中的有害陽(yáng)離子肽競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，防止有害物質(zhì)與精子細(xì)胞膜結(jié)合，保護(hù)精子免受有害蛋白的損傷[39]。其通過(guò)保護(hù)細(xì)胞膜減少冰晶的形成，維持細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，從而降低冷凍損傷。另外，LDL可以隔離精漿中的骨唾液酸蛋白，防止其與精子表面結(jié)合，減少膽固醇在精子膜中的流失，從而最大限度地減少膜損傷和冷凍損傷[40]。單獨(dú)添加LDL可以減輕甘油在精液冷凍保存中產(chǎn)生的毒性[41]。在哺乳動(dòng)物的精液冷凍保存過(guò)程中，脂質(zhì)過(guò)氧化是一種常見(jiàn)的問(wèn)題，精子細(xì)胞膜膜中的PUFA受到氧化應(yīng)激的影響，發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，導(dǎo)致其受到損傷，影響精子的活力和功能。LDL中的抗氧化成分可以幫助減少這種氧化損傷，保護(hù)精子的DNA和膜結(jié)構(gòu)，使用含有LDL的冷凍稀釋液可以顯著提高解凍后精子的活力，維持精子膜的完整性，保持精子的運(yùn)動(dòng)能力和授精潛力[42-43]。此外，LDL可以改善精子的運(yùn)動(dòng)特性，如直線速度、曲線速度和平均路徑速度等，這對(duì)于精子的運(yùn)動(dòng)和授精過(guò)程至關(guān)重要[44]，且與卵黃相比，使用LDL作為冷凍保護(hù)劑不會(huì)影響動(dòng)物的生育能力[45]。

近年來(lái)，在犬[46]、牛[47]和馬[48]等動(dòng)物的精液冷凍保存中，LDL已被廣泛研究并應(yīng)用于實(shí)踐，顯示出顯著的保護(hù)效果。狄和雙等[49]研究表明，在犬精液稀釋液中添加8%或10%的LDL，能有效改善解凍后精子的活力。在山羊精液冷凍保存中LDL同樣發(fā)揮優(yōu)良效益，在冷凍稀釋液中添加0.09 g/mL LDL時(shí)，可以有效冷凍保存絨山羊精液，冷凍保存效果優(yōu)于使用卵黃 [36]。但LDL在山羊精液冷凍保存中的具體效果及原理還需大量實(shí)驗(yàn)證明，相關(guān)研究有待進(jìn)一步深入。因此，對(duì)于不同品種的山羊，LDL的具體濃度仍需通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。在實(shí)際應(yīng)用中，研究人員需根據(jù)物種特性和冷凍保存的具體要求，優(yōu)化LDL的濃度和配方，以達(dá)到較佳的保護(hù)效果。

6 SL和LDL聯(lián)合應(yīng)用的研究進(jìn)展及前景

SL和LDL在精液冷凍保存過(guò)程中具有重要作用，兩者均有望代替卵黃，作為精液稀釋液冷凍保護(hù)劑應(yīng)用于畜禽精液保存[50]。相比于單獨(dú)使用SL或LDL，聯(lián)合添加這兩者也能顯著改善解凍后精子的存活時(shí)間和運(yùn)動(dòng)參數(shù)。王震[36]比較了在山羊精液冷凍稀釋液中單獨(dú)添加與聯(lián)合添加LDL和SL的冷凍保存效果，結(jié)果表明，聯(lián)合添加0.04 g/mL LDL和1.5% SL顯著提高了解凍后精子的運(yùn)動(dòng)參數(shù)和細(xì)胞膜完整性，說(shuō)明LDL和SL具有良好的協(xié)同作用，能有效提高山羊精液的冷凍保存效果。這種聯(lián)合作用可能是因?yàn)長(zhǎng)DL在超低溫冷凍時(shí)釋放出磷脂和脂質(zhì)，磷脂是構(gòu)成細(xì)胞膜的生物活性物質(zhì)之一，有利于促進(jìn)細(xì)胞代謝和維持膜結(jié)構(gòu)。SL作為卵黃中卵磷脂的替代物，在冷凍過(guò)程中可以補(bǔ)充受損的磷脂結(jié)構(gòu)；降低細(xì)胞液冰點(diǎn)，減少冰晶形成，從而減少冰晶對(duì)精子的損傷[51]。也可能是LDL和SL均含有抗氧化成分，SL可以通過(guò)減少ROS的損傷保護(hù)精子細(xì)胞膜的完整性和功能[28]，而LDL中的抗氧化成分可以幫助減少脂質(zhì)過(guò)氧化造成的損傷[43]，兩者互補(bǔ)優(yōu)勢(shì)為精子提供更優(yōu)的冷凍保護(hù)液。同時(shí)SL作為非滲透性冷凍保護(hù)劑，可以通過(guò)增加細(xì)胞外液的滲透壓，促使細(xì)胞在冷凍時(shí)脫水，減少冰晶的形成[30]。LDL的加入可以進(jìn)一步增強(qiáng)這種效果，提高精子的抗凍能力。因此，LDL和SL的結(jié)合使用可能產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，LDL增強(qiáng)了SL的冷凍保護(hù)作用，而SL提供了額外的抗氧化保護(hù)，共同提高精子在冷凍和解凍過(guò)程中的存活率，提高冷凍保護(hù)劑的整體效果。這種策略為提高不同動(dòng)物精液冷凍保存的成功率提供新的視角。

綜上，本文介紹了山羊精液冷凍保存技術(shù)及冷凍保存過(guò)程中的冷凍損傷和冷凍保護(hù)劑的應(yīng)用，探討了SL和LDL以及兩者聯(lián)用在山羊精液冷凍保存中的應(yīng)用。LDL和SL在山羊精液冷凍保存中可以通過(guò)減少冰晶形成，減輕活性氧對(duì)精子的傷害等作用提高冷凍保存中精子的活力，且兩者具備一定的聯(lián)合效應(yīng)。LDL和SL在精液冷凍保存中的應(yīng)用前景廣闊，但仍存在許多不足，如LDL和SL在山羊冷凍精液保存中的具體作用機(jī)制尚未完全明確，不同濃度和配比對(duì)精子冷凍保存效果的影響也需進(jìn)一步研究。此外，針對(duì)不同物種的特定需求，開(kāi)發(fā)定制化的冷凍保護(hù)劑也是未來(lái)研究的重要方向之一。LDL和SL作為冷凍保護(hù)劑，在山羊精液冷凍保存中展現(xiàn)出較大的潛力，能夠提高精子在冷凍和解凍過(guò)程中的存活率。因此，充分挖掘LDL和SL在精液冷凍保存中的應(yīng)用，對(duì)于遺傳資源保護(hù)和優(yōu)良品種推廣具有重要意義。

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（責(zé)任編輯：胡立萍）