柑橘黑點病研究進展

摘" " 要：柑橘黑點病是由柑橘間座殼菌（Diaporthe citri）引起的一種重要柑橘病害，在全球柑橘主產區(qū)均有發(fā)生，主要危害葉片、枝梢和果實，嚴重影響柑橘的品質和鮮銷商品價值。柑橘間座殼菌可以侵染所有當前栽培的柑橘品種，其中以葡萄柚和檸檬最易感病。噴施代森錳鋅和銅制劑等殺菌劑是防控柑橘黑點病的重要方法，但柑橘間座殼菌在自然條件下有性生殖頻繁，具有豐富的遺傳多樣性，需加強監(jiān)測柑橘間座殼菌種群對代森錳鋅等藥劑的敏感性變化。近年來，關于柑橘間座殼菌的基因組信息、快速檢測技術、遺傳分化、致病機制以及防治方法等方面的研究取得較為顯著的進展。就國內外近年來柑橘黑點病的危害癥狀與分布、病原種類、遺傳多樣性、生物學特性、侵染過程、致病機制、發(fā)生規(guī)律以及防治方法等方面的最新研究進展進行綜述，并對柑橘黑點病的未來重點研究方向進行展望，以期為柑橘黑點病的防控策略提供科學依據。

關鍵詞：柑橘黑點??；柑橘間座殼菌；遺傳多樣性；致病機制；發(fā)生規(guī)律；病害防治

中圖分類號：S666.6" S436.661 文獻標志碼：A 文章編號：1009-9980（2024）10-2106-11

Research progress in citrus melanose

LU Songmao， LIN Xiuxiang

（Fujian Institute of Tropic Crops， Zhangzhou 363001， Fujian， China）

Abstract： Citrus （Citrus spp.） is the world’s largest category of fruit， including many species， such as C. reticulata， C. sinensis， C. grandis， C. limon and C. paradisi， etc.. They are deeply popular with consumers， because of their rich nutrition （vitamins， polysaccharides， organic acids， proteins， dietary fiber and antioxidants） and delicious flavor. The global citrus production for 2019 was estimated at almost 144 million metric tons. In China， the citrus production for 2021 was 55.96 million metric tons， and its annual value of production was more than 200 billion yuan. Therefore， it is the vital major industry of agriculture in China. However， in recent years， the citrus melanose has seriously occurred in major citrus production regions all over the world， including China， India， Brazil， Spain and Mexico， etc.. In China， the citrus melanose was widely distributed in Guangxi， Hunan， Hubei， Zhejiang， Jiangxi， Fujian， Yunnan provinces and other major citrus production areas， and the disease incidences in some orchards were up to 100%. The typical disease symptoms including melanose， gummosis and stem-end rot form on leaves， shoots or fruits. The diseased fruits usually show many black to reddish-brown raised spots on the fruit surface or stem-end rot， which seriously affects the appearance and economic value of fresh fruit， causing major economic losses. Diaporthe citri （anamorph： Phomopsis citri） is the dominant species of citrus melanose pathogen all over the world， which could infect all citrus cultivars. At present， the genome information of D. citri has been sequenced and annotated， which provides an important reference for studying its infection mechanism and population genetic evolution， etc.. The genomes of D. citri （MAT1-1 and MAT1-2 strains） contains 15 977-16 622 genes， including 1231-1287 putative pathogenicity genes， 1837-1885 secretion proteins， and many carbohydrate-active enzymes （CAZymes）， which may be associated with the pathogenicity of D. citri. The populations of D. citris are abundant in genetic diversity， due to its frequent sexual reproduction in nature. And the genetic differentiation of D. citris is closely related to geographic separation， whereas it has weak correlation with its host. The species-specific primers have been designed for the PCR method to distinguish D. citri from related Diaporthe species， based on the sequences of rDNA internal transcribed spacer， translation elongation factor 1-alpha， beta-tubulin， histone H3， and calmodulin gene， which contribute to monitoring and forecasting the citrus melanose in the field. It has been reported that the successful infection host by D. citris is related to its pectinase secretion， and the infection of leaves can cause an increase in the population of antagonistic microorganisms in the citrus leaves. The RNA-Seq analysis results performed by Li et al. profiled the defense response pattern of citrus leaves against D. citri infection， including high induction expression of plant cell wall biogenesis-related genes at 3 days post infection （dpi）， and high upregulation expression of the CYP83B1 genes， pectin methylesterase gene， and phytoalexin coumarin synthesis-related genes at 14 dpi. After the infected shoots became withered， a large number of alpha conidia （non-septate）， beta conidia （long， slender） and a small number of ascospores （ellipsoid to cylindrical， septate） were produced on dead wood， using as the source of infection. Conidia were carried by raindrops and dispersed to nearby citrus， which contributed obviously to the citrus melanose severity in an orchard， whereas the ascospores were carried by the wind for a long distance spread. Under high humidity and warm climatic conditions （at 25 ℃）， the young leaves， shoots and young fruits （within 12 weeks after flowering） were seriously infected by D. citri， however the mature citrus tissues were more resistant to this pathogen attack. Therefore， these phenological periods of citrus are also a critical stage for the prevention and control of citrus melanose. The copper fungicide can act as a good preventative against citrus melanose， but it is susceptible to rain erosion， and is phytotoxic to citrus plant when it is used in hot weather. The other pesticides such as mancozeb and strobilurin etc.， play a good control effect on citrus melanose， but they are also facing the risk of increasing resistance to D. citris， because of long-term use of the same fungicides. Some antagonistic microorganisms such as Burkholderia gladioli， Pseudomonas pudia， P. fluorescens， Bacillus subtilis， B. velezensis， B. amyloliquefaciens， Trichoderma asperellum， and T. asperelloides etc.， all play a strong inhibitory effect on the mycelial growth or conidia germination of D. citrus， which could provide a reference for commercial application on management approaches of citrus melanose in the field. The above results indicate that， in recent years， some progresses such as species identification and detection， genetic diversity， genomic information， infection cycle， pathogenic mechanism， occurrence patterns， prevention and control measures of D. citris have been made by many researchers at home and abroad， but the following issues still need to be further explored. （1） Whether the D. citris forms a special infection structure to successfully penetrate the leaves and peels of citrus with a waxy layer. （2） The pectinase secreted by D. citris is an important virulence factor， but the types， encoding genes and functions of pectinase still need to be clarified. In addition， the presence of other important virulence factors such as toxins， effector proteins etc.， needs to be further analyzed. （3） The propagules of D. citris only form on dead wood， but not on non-dead branches， so the molecular regulation mechanism of asexual spores and ascospores development needs to be studied in D. citris. （4） The community of antagonistic microorganisms increases in the citrus leaves， when they are attacked by D. citris. So， how the citrus plant recognizes the molecular signals of D. citris to regulate autoimmunity， and the molecular interactions between citrus and D. citris remain to be understood. In conclusion， an in-depth understanding of the infection structure， virulence factors， molecular mechanisms of sporogenesis of D. citris， and the molecular signaling pathway of the recognition of D. citris by host will help to provide resources for citrus disease resistance-breeding， and also provide new targets for accelerating the development and application of fungicides for the prevention and control of citrus melanose. At the same time， the population of D. citris is abundant， and it is a heterogeneous fungus， with frequent sexual reproduction. So it is necessary to strengthen the monitoring of its sensitivity to pesticides such as mancozeb， etc.. And these measurements such as mixing pesticides scientifically and reasonably， using biocontrol agents and plant resistance inducers， will reduce the case of fungicide resistance against D. citris， and improve the comprehensive prevention and control ability of citrus melanose.

Key words： Citrus melanose; Diaporthe citri; Genetic diversity; Pathogenic mechanism; Occurrence regularity; Disease control

柑橘（Citrus）是全球第一大類水果，富含維生素、多糖、有機酸、蛋白質、膳食纖維以及抗氧化物等成分，深受廣大消費者喜愛[1-4]。2019年世界柑橘產量為1.4億t[5]。在中國，2021年柑橘產量達5 595.6萬t，年產值超2000億元，是中國農業(yè)的重要支柱產業(yè)[6]。近年來，隨著柑橘栽培面積的不斷擴大以及栽培生態(tài)環(huán)境變化等因素的影響，柑橘黑點?。–itrus melanose）的發(fā)生和流行等問題越來越突出，在中國的柑橘主產區(qū)，包括廣西、湖南、湖北、浙江、江西、福建、云南等地普遍發(fā)生，發(fā)病嚴重的地區(qū)病果率達100%，影響柑橘鮮果外觀和商品價格，嚴重制約中國柑橘產業(yè)的健康發(fā)展[7-9]。

柑橘黑點病也稱柑橘砂皮病，由間座殼菌屬Diaporthe引起，其病原菌也會引起柑橘樹脂病或柑橘褐色蒂腐病。其中柑橘間座殼菌Diaporthe citri為優(yōu)勢種，無性態(tài)為柑橘擬莖點霉Phomopsis citri[10]。柑橘間座殼菌可侵染所有柑橘栽培品種，其中檸檬和葡萄柚易感病[11]，目前尚未發(fā)現對其完全免疫的柑橘品種。近年來，已有多個柑橘品種以及柑橘間座殼菌的基因組信息被成功測序和注釋[12-17]，為進一步分析柑橘間座殼菌的侵染機制以及挖掘柑橘抗病基因提供了重要參考。針對柑橘黑點病發(fā)生流行的嚴重性以及其對柑橘產業(yè)健康發(fā)展的影響，筆者就國內外近年來柑橘黑點病的危害癥狀與分布、病原種類、遺傳多樣性、生物學特性、侵染過程、致病機制、流行規(guī)律以及防治措施等方面的研究進展進行綜述，并對未來柑橘黑點病的研究方向及防控策略進行展望。

1 柑橘黑點病的癥狀與分布

1.1 癥狀

柑橘黑點病的癥狀可能因地理位置、寄主品種、發(fā)生季節(jié)、生理因素和感染嚴重程度而異[18]。柑橘果實發(fā)病后，果面散生黑色至紅褐色小點（圖1-A），或黑點連成片，果實表皮細胞木栓化并開裂，形成堅硬的黑色裂紋區(qū)（圖1-B），與銹螨危害后引起果皮光滑的斑紋明顯不同[19]。儲藏期病果的果蒂及果肉等部位出現褐色腐爛[20]。柑橘新葉發(fā)病初期呈水浸狀褐色斑點，周圍呈半透明黃色暈圈，后期病葉表皮破裂并形成褐色或黑色堅硬的小粒點突起（圖1-C）。柑橘新梢發(fā)病后在表面形成黃褐色或黑褐色的粒點突起（圖1-D），柑橘主干發(fā)病后常引起流膠或干枯[21]，并且病原菌在枯死枝條上產生大量的分生孢子或少量的子囊孢子[11]。

1.2 分布

柑橘黑點病在世界各地柑橘產區(qū)均有發(fā)生[18]，包括中國、菲律賓、日本、韓國、泰國、緬甸、柬埔寨、斐濟、毛里求斯、美國、墨西哥、海地、古巴、多米尼加、巴拿馬、波多黎各、委內瑞拉、特立尼達和多巴哥、巴西、塞浦路斯、葡萄牙（亞速爾群島）、新西蘭、紐埃、薩摩亞、湯加、庫克群島、科特迪瓦和津巴布韋等國家[22-25]。在中國，柑橘黑點病在多個柑橘產區(qū)，包括廣西、湖南、湖北、浙江、江西、福建、云南、貴州、重慶、廣東、四川以及上海等地均普遍發(fā)生[7，9，11]。

2 病原種類、遺傳多樣性及生物學特性

2.1 病原種類

間座殼菌屬（Diaporthe）真菌具有豐富的物種多樣性，包含植物病原菌、內生菌和腐生菌[26]。寄主?；圆粡姡环N間座殼菌可寄生在多種寄主植物上，或在同一種寄主植物上也常被多種間座殼菌復合寄生[26-30]。截至目前，寄生在柑橘屬植物的間座殼菌屬真菌數量達33種[22]，包含內生菌和致病菌[18，22，31]。在中國，柑橘間座殼菌（Diaporthe citris）是引起柑橘黑點病的重要病原菌，致病力強，可以侵染所有栽培柑橘，包括寬皮柑橘（Citrus reticulata）、甜橙（C. sinensis）、柚子（C. grandis）、檸檬（C. limon）和葡萄柚（C. paradisi）等。柑橘間座殼菌（D. citris）也是引起國外柑橘黑點病的優(yōu)勢種[30]。此外，在中國柑橘產區(qū)還分布D. citriasiana和D. citrichinensis菌株，他們能引起柑橘果實的蒂腐病[30]。其中，D. citrichinensis與柑橘間座殼菌之間的基因組平均核苷酸同一性（average nucleotide identity，ANI）達91%，說明這兩個物種具有密切的親緣關系[16]，但D. citrichinensis的致病力較柑橘間座殼菌弱[22，30]，造成他們致病力分化的原因還有待進一步研究?；诙嗷蛭稽c包括核糖體內轉錄間隔區(qū)（rDNA internal transcribed spacer，ITS）、轉錄延伸因子1-α（translation elongation factor 1-alpha，TEF1-α）、β-微管蛋白（beta-tubulin，TUB）、組蛋白-H3（histone H3，HIS）、鈣調蛋白（calmodulin，CAL）和交配型MAT1基因等序列進行的系統發(fā)育分析，為柑橘間座殼菌的準確、快速鑒定以及檢測技術開發(fā)利用提供了重要參考[24，26，32-36]。

2.2 遺傳多樣性

目前，已對多個柑橘間座殼菌的菌株（包含MAT1-1和MAT1-2交配型菌株）以及近緣種的基因組信息進行測序和注釋[16-17]，柑橘間座殼菌的基因組大小為52.06～63.61 Mb，包含15 977～16 622個蛋白編碼基因，柑橘間座殼菌不同菌株的基因組平均核苷酸同一性達99%[16]，這些基因組信息為進一步分析柑橘間座殼菌的產孢調控、致病力分化以及群體遺傳進化等相關的分子機制奠定了重要基礎。Xiong等[11]研究表明，來源于中國南方5個省份的339個柑橘間座殼菌株群體中，具有不同交配型（MAT1-1-1和MAT1-2-1）和不同多位點基因型（multilocus genotypes，MLG）的菌株經常從相同的病葉和病果分離出來，說明柑橘間座殼菌的有性繁殖和基因重組在自然條件下頻繁發(fā)生，因此他們具有較高的遺傳多樣性；同時，他們的遺傳分化與其地理隔離（geographic separation）密切相關，而與他的寄主類別和寄主的不同組織相關性較差[11]?？傊涕匍g座殼菌是一種異宗配合（heterothallism）真菌，在自然環(huán)境條件下有性繁殖頻繁發(fā)生，意味著他的有性孢子——子囊孢子在病害侵染循環(huán)中可能發(fā)揮著極其重要的作用[11，37]，今后應重點關注柑橘間座殼菌子囊孢子的形成規(guī)律及其侵染過程，有利于對柑橘黑點病的有效防控。

2.3 生物學特性

柑橘間座殼菌的菌絲生長和產孢過程與其代謝物變化密切相關，其中氧化脂類代謝物是柑橘間座殼菌產孢的關鍵代謝物[38]。此外，菌絲生長、菌落形態(tài)、產孢與營養(yǎng)條件、溫度、光照、pH等因素密切相關。柑橘間座殼菌在PDA培養(yǎng)基上生長的菌落邊緣白色，氣生菌絲蓬松，菌落背面呈淡黃色（圖2-A～B）；而在MEA和OA培養(yǎng)基上生長的菌落正面呈白色，扁平，培養(yǎng)后期菌落背面呈黃色[39]。柑橘間座殼菌生長的最適溫度為26～30 ℃，最適pH為6～9，在光暗交替條件下有利于菌絲生長[40]。

柑橘間座殼菌在PDA培養(yǎng)基上僅形成α型分生孢子[30]，但來源于印度檸檬上的柑橘間座殼菌在相似條件下生長，不僅可以產生α型分生孢子，還可以產生β型分生孢子[23]，這可能與不同地域來源的菌株相關。將柑橘間座殼菌接種至無菌的柑橘枝條上，置于水瓊脂平板上26 ℃培養(yǎng)30 d，可見許多黃色分生孢子液滴形成（圖2-C），α型分生孢子含有1～2個油滴，呈橢圓形（圖2-D）；β型分生孢子呈直線或彎鉤狀（圖2-E）。據報道，柑橘間座殼菌的分生孢子能在含柚子成分的培養(yǎng)液中萌發(fā)，最適溫度為29.2 ℃[41]，但溫度低于17 ℃或高于35 ℃時，其不能成功侵染寄主[42]。

3 侵染過程及致病機制

柑橘間座殼菌的分生孢子與寄主葉片接觸后，萌發(fā)形成的芽管直接穿透柑橘葉片的角質層，并且菌絲在相鄰表皮細胞的側壁之間向下延伸至葉片的柵欄薄壁組織中，并分枝生長[10]。柑橘間座殼菌分泌的果膠酶（pectinase）降解薄壁細胞的細胞壁，瓦解細胞后從破裂的葉片角質層中滲出黏性膠狀物質，變硬后形成粗糙的黑色或棕色突起[10，42]。此外，在柑橘果實成熟期或貯藏期，其分泌的果膠酶對促進果實腐爛癥狀的形成也具有明顯作用[10，43-44]。Gai等[16]測序和分析了柑橘間座殼菌的基因組信息，預測其含有1231～1287個PHI （pathogen-host interaction）基因，具有1837～1885個分泌蛋白以及1600多個碳水化合物活性酶（carbohydrate-active enzymes，CAZymes），包括糖苷水解酶（glycoside hydrolases）、糖基轉移酶（glycosyl transferases）、碳水化合物酯酶（carbohydrate esterases）、多糖裂解酶（polysaccharide lyases）等，他們可能與柑橘間座殼菌的致病性相關，但這些蛋白的功能有待進一步分析和驗證。此外，有關柑橘間座殼菌是否形成特殊的侵染結構、形成哪些果膠酶種類以及如何調控果膠酶合成的分子調控機制等科學問題仍有待進一步研究。

Li等[45]研究表明，柑橘間座殼菌侵染柑橘葉片后，葉際微生物組的群落均勻度顯著降低，但對其具有拮抗活性的泛菌Pantoea asv90和甲基桿菌Methylobacterium asv41的群落增加，這可能與柑橘植物的免疫反應相關。早期，有學者基于顯微觀察和高效液相色譜分析檢測的方法，證明了柑橘葉片在受到柑橘間座殼菌侵染后會激活植物防御反應，包括誘導植物保衛(wèi)素——6，7-二甲氧基香豆素（6，7-dimethoxy coumarin）的形成等，限制柑橘間座殼菌在寄主細胞的進一步侵染和擴展[46-48]。Li等[49]采用RNA-Seq方法分析了柑橘間座殼菌侵染柑橘葉片3 d后和14 d后的轉錄組數據，發(fā)現與柑橘葉片細胞壁生物發(fā)生（cell wall biogenesis）相關的基因在侵染3 d后被大量誘導表達，而參與胼胝質沉淀反應相關的基因、果膠甲基酯酶（pectin methylesterase，PME）基因以及香豆素及其衍生物合成的關鍵酶——阿魏酰輔酶A 6'-羥化酶1（Feruloyl-CoA 6'-Hydroxylase1）和東莨菪素8-羥化酶（scopoletin 8-hydroxylase）基因等在侵染14 d后被大量誘導表達，進一步從分子水平上證明了柑橘葉片被柑橘間座殼菌侵染后，激活了柑橘的防御反應。然而，有關柑橘如何利用其抗性蛋白或者其他受體蛋白識別柑橘間座殼菌的侵染，進而抑制病原菌的進一步擴展，以及柑橘間座殼菌如何逃避寄主的免疫反應的分子互作機制等問題仍有待進一步研究。

4 柑橘黑點病發(fā)生規(guī)律及防治措施

4.1 發(fā)生規(guī)律

柑橘間座殼菌的寄主范圍僅限于柑橘屬植物[22]。柑橘黑點病的發(fā)生流行與侵染源的數量、氣候條件、柑橘品種、樹齡以及果園栽培管理措施等密切相關[9，42，50-51]。柑橘枯死枝條是柑橘間座殼菌越冬和繁殖的重要場所[42，51]，也是田間柑橘黑點病發(fā)生的重要侵染源[9]。枯死枝條上形成分生孢子器或分生孢子的數量與柑橘黑點病發(fā)生的嚴重程度、濕度、溫度和樹枝大小等相關[19，52]。有意思的是，尚未枯死的感病枝條不形成任何分生孢子器或分生孢子[52]。因此，感病枯死枝條在柑橘黑點病菌產孢方面起主要作用[11]。然而，有關調控柑橘間座殼菌無性孢子和子囊孢子發(fā)育成熟的分子調控通路有待進一步明確。

柑橘間座殼菌的分生孢子隨雨水傳播，具有從上至下和傳播距離較短等特點，而子囊孢子通過自身的彈射力從子囊孔口釋放，并通過氣流傳播擴散，具有傳播距離較遠的特點[9]。他們能否成功侵染寄主與柑橘的感病期、環(huán)境條件（溫度、濕度）等密切相關。柑橘的嫩葉、嫩枝以及謝花后12周內的幼果均處于易感病期，也是預防和防控柑橘黑點病發(fā)生的關鍵時期。柑橘新葉完全展開后或者謝花后12周以上的幼果對柑橘間座殼菌的抗性逐漸增強。人工接種試驗結果表明，在25 ℃條件下柑橘間座殼菌分生孢子成功侵染柑橘需要10～12 h的濕潤條件[42]，柑橘葉片黑點病的發(fā)生潛育期為4～7 d[9]。在自然條件下，當平均氣溫大于22 ℃、葉片維持濕度超過80 h（每周）時，柑橘黑點病發(fā)病率將明顯增加[53]。此外，柑橘果實生長期的平均溫度為20 ℃，該時期的降雨量與柑橘黑點病的發(fā)生密切相關[9]。在不同的國家或地區(qū)，由于氣候條件以及柑橘品種的差異，發(fā)病的嚴重程度或高峰期也存在差異，但與柑橘的易感物候期密切相關[21，52，54]。

4.2 防治方法

4.2.1 化學防治 施用殺菌劑是當前防治柑橘黑點病的主要方法。銅制劑和代森錳鋅等保護性殺菌劑對柑橘黑點病具有較好的預防和保護作用[8，55-59]，但銅制劑的保護作用容易因雨水沖刷喪失[22]，同時高溫（大于35 ℃）條件下使用銅制劑容易產生藥害[42，60]。用100 μg·mL-1的二氧化硅和200 μg·mL-1的季銨化合物（季銨鹽）的復合物替換銅制劑使用可降低對植物的毒性[61]。此外，在中國柑橘黑點病發(fā)病嚴重的果園中，代森錳鋅的使用量（4 g·L-1）已明顯大于推薦的使用量（1.34 g·L-1）[62]，長期大量使用殺菌劑也容易造成環(huán)境污染。0.1 g·L-1的醚菌酯（kresoxim-methyl）和1 g·L-1的代森錳鋅混合使用防治效果與2.66 g·L-1的代森錳鋅的防效相當[62]。代森錳鋅與礦物油（綠穎）或乙氧基改性聚三硅氧烷（GE公司）混合使用也可以提高對柑橘黑點病的防效[9]。此外，由惡唑烷二酮和代森錳鋅復配而成的殺菌劑對柑橘黑點病的防效超過73%，在生產上具有推廣應用前景[63]。

具有治療性的甲氧基丙烯酸酯類（strobilurin）對柑橘黑點病具有較好的防效，但該類藥劑如吡唑醚菌酯（pyraclostrobin）、嘧菌酯（azoxystrobin）等易產生抗藥性，在1年內該類型藥劑的使用次數不能超過2次[42]。苯醚菌酯（E-2-[2-（2，5-dimethyl-phenoxy）-phenylmethyl]-3-methoxyacrylic acid methylester）是中國自主研發(fā)的苯醌外部抑制劑（quinone outside inhibitor，QoI）類殺菌劑，當前中國的柑橘間座殼菌種群對其仍然敏感，可用于柑橘黑點病的防治[64]。同時，0.1 μg·mL-1的醚菌酯和肟菌酯（trifloxystrobin）能完全抑制柑橘間座殼菌分生孢子的萌發(fā)[62]。此外，肟菌酯（trifloxystrobin）和吡唑醚菌酯（pyraclostrobine）分別與銅制劑混合使用均可提高對柑橘黑點病的防治效果[65-66]。然而，有關抑制柑橘間座殼菌分生孢子器形成的殺菌劑的報道較少[52]，僅苯并咪唑類的苯菌靈（benomyl）可以抑制柑橘間座殼菌在枯死枝條上的產孢，但對柑橘果實和葉片黑點病的防治效果較差[67]。

4.2.2 生物防治 利用拮抗微生物防治植物病害可以減少因過度使用農藥造成的環(huán)境污染等問題，并且一些拮抗微生物還可促進植物生長及增強植物抗性[22]。研究表明，唐菖蒲伯克霍爾德菌（Burkholderia gladioli）、惡臭假單胞菌（Pseudomonas pudia）和熒光假單胞菌（P. fluorescens）對柑橘間座殼菌具有拮抗活性[68]，如抑制分生孢子萌發(fā)，引起病原菌致病力明顯降低[69]。枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）[70]、貝氏芽孢桿菌（B. velezensis）[71]、淀粉芽孢桿菌（B. amyloliquefaciens）[72]等對柑橘間座殼菌的菌絲生長或分生孢子萌發(fā)均有較強的抑制作用，部分拮抗菌株已應用于柑橘黑點病的田間防治，防效達74%[73]。此外，硫桿菌（Thiobacillus species）產生的生物硫（bio-sulfur）能顯著抑制柑橘黑點病的發(fā)生[74]。棘孢木霉（Trichoderma asperellum）和類棘孢木霉（T. asperelloides）生防菌不僅能抑制柑橘間座殼菌的生長，還可以分泌漆酶（laccase）降解柑橘枯枝，減少感染枯枝上侵染源的形成[75]。然而，這些具有生防潛力的菌株在防控柑橘黑點病的商業(yè)化應用方面還有待進一步研究和推廣。

4.2.3 農業(yè)防治及誘導植物抗性 加強柑橘果園的栽培管理，合理密植與修剪枝條，降低果園濕度，增施有機肥和磷鉀肥，提高寄主的抗病性，并且及時防治害蟲等措施可顯著降低柑橘黑點病的發(fā)生率[21，76]。同時，部分抗性誘導化合物（Oxycom、Serenade、ReZist、Aliette、Nutriphite、Actigard和Benlate）的使用，可顯著提高柑橘的抗病性[77]。不過，目前抗性誘導劑在防治柑橘黑點病方面的商業(yè)化應用還較少。

5 展 望

中國是柑橘生產大國，柑橘產業(yè)在提高農民收入、實現鄉(xiāng)村振興以及促進農業(yè)發(fā)展等方面具有重要作用，但柑橘黑點病的流行和危害嚴重影響了柑橘鮮銷和出口創(chuàng)匯，制約著柑橘產業(yè)的健康發(fā)展。近年來，針對柑橘黑點病的病原檢測、種類鑒定、基因組信息、遺傳多樣性、生物學特性、侵染循環(huán)、致病機制、發(fā)生規(guī)律和防控措施等方面取得了一些進展。然而，以下幾個問題仍有待進一步深入的探究：（1）柑橘間座殼菌是否形成特殊的侵染結構以便順利穿透具有蠟質層的柑橘葉片和果皮。（2）柑橘間座殼菌分泌的果膠酶是其重要的致病因子，所形成的果膠酶種類、編碼基因以及功能仍有待明確。同時，柑橘間座殼菌的基因組分析預測結果顯示，其含有大量假定的致病基因、分泌蛋白以及碳水化物活性酶，他們是否參與其致病過程仍有待進一步探析。（3）柑橘間座殼菌僅在枯死的柑橘枝條上形成繁殖體，而在未枯死的枝條上不產孢，其無性孢子和子囊孢子發(fā)育調控的分子機制有待研究。（4）柑橘葉片受到柑橘間座殼菌侵染后，會增加葉片拮抗微生物的群落[43]，寄主是如何識別柑橘間座殼菌的分子信號來調節(jié)自身免疫的，以及柑橘間座殼菌如何逃逸植物的防御反應的分子互作關系仍有待明確。

總之，深入認識柑橘間座殼菌的侵染結構、致病因子、產孢調控分子機制以及寄主識別柑橘間座殼菌的分子信號通路等方面的內容，將有助于為柑橘的抗病育種提供資源，也可為柑橘黑點病防治藥劑的研發(fā)和應用提供新的靶標。同時，柑橘間座殼菌的種群豐富，是異宗配合真菌，有性繁殖頻繁，應加強監(jiān)測其對代森錳鋅等農藥的敏感性，科學合理混配農藥，結合生防制劑以及植物抗性誘導物的使用，延緩其抗藥性的形成，共同提高柑橘黑點病的綜合防控能力。

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