沃柑混倍體新種質(zhì)的鑒定及評(píng)價(jià)

摘要：【目的】鑒定和評(píng)價(jià)沃柑變異材料，為利用提供依據(jù)。【方法】采用流式細(xì)胞儀、石蠟切片和掃描電鏡方法進(jìn)行倍性和葉片顯微結(jié)構(gòu)鑒定，比較形態(tài)特征和果實(shí)品質(zhì)?！窘Y(jié)果】變異材料為二、四混倍體（2x+4x），倍性細(xì)胞比例為2x∶4x=39.1∶60.9；混倍體的葉片長(zhǎng)、寬、周長(zhǎng)和面積比二倍體顯著增加14.75%、31.01%、19.38%和46.09%，葉形指數(shù)顯著減小12.61%；兩者均為兩性花，花瓣數(shù)、花瓣顏色、花絲離合狀態(tài)和花柱狀態(tài)相同，花瓣長(zhǎng)度和寬度均顯著大于二倍體；種子均為單胚類(lèi)型，單粒質(zhì)量、橫徑和縱徑較二倍體分別顯著增加30.77%、8.12%和26.64%；單果質(zhì)量、縱徑、橫徑、果形指數(shù)、果皮厚度和果實(shí)硬度比二倍體分別顯著增加29.67%、13.38%、8.57%、3.85%、38.31%和16.37%，單果種子數(shù)顯著減少61.68%；可溶性固形物和可滴定酸含量無(wú)顯著差異，可食率顯著降低，出汁率高，維生素C含量顯著增加39.70%；葉片、下表皮、柵欄組織和海綿組織厚度較二倍體分別顯著增加19.75%、10.10%、9.38%和43.92%，氣孔長(zhǎng)度和密度分別顯著減小7.36%和15.76%，氣孔寬度顯著增加5.09%?！窘Y(jié)論】鑒定獲得了沃柑二、四混倍體新種質(zhì)，與二倍體在形態(tài)特征、果實(shí)品質(zhì)及葉片顯微結(jié)構(gòu)等方面存在較大差異。

關(guān)鍵詞：沃柑；二倍體；混倍體；形態(tài)特征；果實(shí)品質(zhì)；顯微結(jié)構(gòu)

中圖分類(lèi)號(hào)：S666.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1009-9980（2024）07-1265-10

Identification and evaluation of new mixoploid variants in Citrus reticula-ta‘Orah’

ZHAO Hongtao1，LU Zhen1#，LI Guoguo1，XIE Kaidong2，ZHENG Jixiang3，LIANG Zeng4，LIU Yaoxin1，OU Zhitao1，LIANG Chun4，WANG Jubing3，ZHOU Shuangyun1，CHEN Dongkui1*，CHEN Xiangling1*

（1Horticultural Research Institute，Guangxi Academy of Agricultural Sciences，Nanning 530007，Guangxi，China;2College of Horticul-ture and Forestry Science，Huazhong Agruicultural University，Wuhan 430070，Hubei，China;3Fruit Technology Guidance Station of Guangxi Zhuang Autonomous Region，Nanning 530022，Guangxi，China;4Guangxi Gui Jie Agricultural Development Co.，Ltd.Nanning530041，Guangxi，China）

Abstract：【Objective】Orah（Citrus reticulata）is an important late-maturing citrus variety.Previously，putative polyploid bud mutation materials were discovered in Orah.In this study，the material was iden-tified and evaluated in terms of ploidy，morphological characteristics，fruit quality and leaf microstruc-ture to provide a theoretical basis for its utilization.【Methods】Flow cytometry was used for ploidy identification，the paraffin sections were used for leaf microstructure identification，scanning electron microscopy was used for stomatal morphology，size and density identification，the morphological char-acteristics of leaves，flowers，seeds and fruits were compared，and the conventional methods were used to determine fruit quality parameters such as soluble solids content，titratable acid content，vitamin C content，edible rate and juice yield.【Results】Orah was diploid，while the variant material was a mixo-ploid of diploid and tetraploid（2x+4x），with a cell ratio of 2x∶4x=39.1∶60.9.There were differences in leaf morphology between the mixoploid and diploid.The mixoploid leaves were ovate with short acumi-nate tips and dark green color，while the diploid leaves were broad-lanceolate with gradually acuminate tips.The length，width，perimeter and area of the mixoploid leaves were 101.68 mm，54.29 mm，266.02 mm and 3 598.92 mm2，respectively，which were 14.75%，31.01%，19.38%and 46.09%higher than those of the diploid，respectively.The leaf shape index was 1.87，which was 12.61%lower.Both had bisexual flowers with similar petal numbers，petal colors，filament cohesion states and style states.The petal length and width of the mixoploid were 14.48 mm and 8.22 mm，respectively，which were signifi-cantly larger than those of the diploid，increasing by 34.32%and 49.18%，respectively.The seeds were both monoembryonic，and the mixoploid had higher seed weight，transverse diameter and longitudinal di-ameter than the diploid，increasing by 30.77%，8.12%and 26.64%，respectively.The single fruit weight of the mixoploid was 206.16 g，the longitudinal diameter of fruit was 63.37 mm，the transverse diameter was 77.90 mm，the fruit shape index was 0.81，the peel thickness was 4.26 mm，and the fruit firmness was 6.47 kg·cm-2，which were 29.67%，13.38%，8.57%，3.85%，38.31%and 16.37%higher than those of the diploid，respectively.However，the number of seeds per fruit was 8.2，which was 61.68%lower than that of the diploid.There were no significant differences in soluble solids content（15.10%）and ti-tratable acid content（0.58%）between the mixoploid and diploid.The edible rate decreased by 8.09%，the juice yield increased by 4.34%，and the vitamin C content increased by 39.70%.The cellular ar-rangement of the transverse section tissue structure of the mixoploid leaves was basically the same as that of the diploid.The thicknesses of the leaf，upper epidermis，lower epidermis，palisade tissue and spongy tissue were 310.96μm，12.26μm，72.89μm and 227.94μm，respectively，which were 19.75%，4.15%，10.10%，9.38%and 43.92%higher than those of the diploid，respectively.The stomatal length and density were 7.35μm and 520.40 per mm2，respectively，which were 7.36%and 15.76%lower，re-spectively.The stomatal width was 3.33μm，which was 5.09%higher.【Conclusion】In this study，a new mixoploid germplasm of Orah with diploid and tetraploid was identified.There were significant differences between the mixoploid and diploid in leaf，flower，seed，fruit morphology，fruit quality and leaf microstructure.Overall，the mixoploid showed larger and thicker leaves，increased petal length and width，increased seed weight，transverse and longitudinal diameters，but reduced number of seeds per fruit.The thicknesses of the leaf，upper and lower epidermis，palisade tissue and spongy tissue in-creased，while the stomatal length and density decreased and the stomatal width increased.Additionally，there were increases in single fruit weight，fruit transverse and longitudinal diameters and vitamin C content.This mixoploid can be used as a new type of single-embryo type of small-nucleus and large-fruit Orah，and can also be further used as a new germplasm resource for breeding program.

Key words：Orah（Citrus reticulata）;Diploid;Mixed ploidy;Morphological characteristics;Fruit quali-ty;Microstructure

沃柑（Citrus reticulata‘Orah’）為單胚性的二倍體品種[1]，具有樹(shù)勢(shì)強(qiáng)、早結(jié)豐產(chǎn)、晚熟、品質(zhì)優(yōu)良、外觀漂亮等優(yōu)點(diǎn)。該品種于2012年首次引種到廣西南寧種植，因其優(yōu)異的表現(xiàn)而成為當(dāng)前我國(guó)發(fā)展速度最快、種植面積最廣、影響力最大的晚熟柑橘品種，截至2022年，全國(guó)沃柑種植面積已超過(guò)20萬(wàn)hm2。但沃柑在生產(chǎn)上的主要問(wèn)題是果實(shí)種子較多，平均單果種子數(shù)約18.9粒[2]，嚴(yán)重影響其食用性和商品性，且沃柑對(duì)潰瘍病敏感，已成為沃柑種植中最嚴(yán)重的病害[3]。

混倍體（mixed ploidy）是在同一生物組織中有二倍性與非二倍性組織混存的現(xiàn)象[4]。在果樹(shù)中，混倍體可自然發(fā)生，也可以通過(guò)嫁接、基因突變、轉(zhuǎn)座子作用、原生質(zhì)體培養(yǎng)、轉(zhuǎn)基因等獲得[5]。混倍體植株由于具有更多的染色體組，相關(guān)基因表達(dá)量得到提高，其性狀也會(huì)因此發(fā)生變化，往往表現(xiàn)為根、莖、葉、花、果的巨型性，具有果實(shí)增大、種子數(shù)減少、品質(zhì)改良、抗逆性增強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)。劉穎等[6]從冬棗中發(fā)現(xiàn)3個(gè)二、四混倍體（2x+4x）大果型變異材料，表現(xiàn)出葉片變寬、葉形指數(shù)變小，果實(shí)變大，果實(shí)維生素C含量增加等特性；人工誘導(dǎo)的混倍體桑樹(shù)魯誘1號(hào)細(xì)胞染色體以四倍體為主，混有少量的二倍體，表現(xiàn)出嵌合體效應(yīng)，既有四倍體葉質(zhì)優(yōu)、葉片大、葉肉厚的特點(diǎn)，又有二倍體母本生長(zhǎng)旺盛的優(yōu)點(diǎn)[7]；陳立松等[8]首次報(bào)道了一個(gè)穩(wěn)定遺傳的椪柑突變體桂林良豐，是四倍體與二倍體兩種倍性的混倍體，表現(xiàn)出果皮增厚、果實(shí)增大、葉片變厚、氣孔密度減少等性狀[9]；二倍體和四倍體的嵌合體品種脆蜜金柑表現(xiàn)出大果、高糖、無(wú)核、品質(zhì)極優(yōu)等特點(diǎn)[10]，已經(jīng)成為廣西金橘的主栽品種。

近年來(lái)，柑橘倍性育種及研究取得了較大進(jìn)展，尤其是大量同源、異源多倍體的篩選和創(chuàng)制，為柑橘新品種選育和基礎(chǔ)研究提供了豐富的材料，然而，單胚類(lèi)型的柑橘多倍體仍然較少[11]。筆者團(tuán)隊(duì)前期從沃柑中挖掘到一株沃柑芽變材料，為進(jìn)一步確定和利用該種質(zhì)，筆者對(duì)其倍性進(jìn)一步進(jìn)行鑒定，并系統(tǒng)比較其與沃柑在葉片、花、種子、果等器官的表型、果實(shí)品質(zhì)及葉片顯微結(jié)構(gòu)的差異，為未來(lái)更好地開(kāi)發(fā)利用該多倍體新種質(zhì)提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

1材料和方法

1.1試驗(yàn)材料

2017年在廣西百色市平果縣沃柑果園中發(fā)現(xiàn)1株沃柑芽變材料，該材料樹(shù)勢(shì)強(qiáng)健，葉片卵圓形、大、厚而濃綠，果實(shí)大，種子較少。當(dāng)天剪取芽變接穗進(jìn)行嫁接擴(kuò)繁，同時(shí)嫁接對(duì)照品種沃柑，砧木均為香橙，成活后種植在廣西南寧市武鳴區(qū)廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院里建科學(xué)研究基地內(nèi)，2020年開(kāi)花結(jié)果，于2022年選擇該材料及對(duì)照品種沃柑開(kāi)展評(píng)價(jià)。

1.2測(cè)定方法

1.2.1倍性鑒定參照解凱東等[12]的方法進(jìn)行。

1.2.2形態(tài)特征比較參照《柑橘種質(zhì)資源描述規(guī)范和數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)》[13]，比較葉片、花、種子、果實(shí)主要形態(tài)特征，利用萬(wàn)深全功能植物圖像分析儀LA-S掃描測(cè)量葉片的長(zhǎng)度、寬度、周長(zhǎng)、面積等指標(biāo)，計(jì)算葉形指數(shù)，葉形指數(shù)=葉片長(zhǎng)度/葉片寬度；用托普云農(nóng)GY-4硬度計(jì)測(cè)定果實(shí)硬度。葉片、花、種子、果實(shí)每10個(gè)為1個(gè)生物學(xué)重復(fù)，每個(gè)測(cè)定指標(biāo)3次重復(fù)。

1.2.3果實(shí)品質(zhì)測(cè)定果實(shí)成熟期，取樹(shù)冠外圍中部生長(zhǎng)的大小、均勻一致、有代表性的成熟果實(shí)，采用日本ATAGO公司的PAL-1便攜式數(shù)顯折光儀測(cè)定可溶性固形物含量，采用酸堿滴定法測(cè)定果汁可滴定酸含量[14]，采用2，6-二氯靛酚法測(cè)定果汁維生素C含量[15]，計(jì)算可食率、出汁率，每10個(gè)果實(shí)為1個(gè)生物學(xué)重復(fù)，每個(gè)測(cè)定指標(biāo)3次重復(fù)。

1.2.4葉片解剖結(jié)構(gòu)觀測(cè)采用石蠟切片觀察葉片解剖結(jié)構(gòu)[16]。摘取待測(cè)葉片，將葉片避開(kāi)葉脈切成0.5 cm2小塊狀，用FAA固定液（福爾馬林5 mL+乙酸5 mL+70%乙醇90 mL）固定樣品1周，脫水，透明后用石蠟包埋，切片，脫蠟，復(fù)水。顯微鏡鏡檢合格后使用Eclipse Ci-L拍照顯微鏡（Nikon，日本）選取組織的目的區(qū)域進(jìn)行200倍成像。成像完成后使用Image-Pro Plus 6.0分析軟件，以μm作為標(biāo)準(zhǔn)單位，測(cè)量葉片厚度、上表皮厚度、下表皮厚度、柵欄組織厚度、海綿組織厚度。

葉片氣孔特征和密度觀測(cè)[17]：利用掃描電鏡進(jìn)行葉片表皮氣孔特征觀察。選取同一節(jié)位處的葉片，將其切成0.5 cm2小塊狀，用2.5%戊二醇固定，后經(jīng)脫水、干燥，再進(jìn)行導(dǎo)電處理，最后用SU8100掃描電子顯微鏡（Hitachi，日本）觀察葉片下表皮的氣孔形態(tài)特征，應(yīng)用Image-Pro Plus 6.0軟件測(cè)量計(jì)算氣孔長(zhǎng)度、寬度以及氣孔密度（個(gè)·mm-2）。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel 2016處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)，使用DPS 20.0版本以Duncan新復(fù)極差法進(jìn)行指標(biāo)間的差異顯著性分析。

2結(jié)果與分析

2.1倍性分析

以二倍體沃柑為對(duì)照，在熒光強(qiáng)度100處只有1個(gè)二倍體主峰（圖1-A），而沃柑少核大果型芽變材料有2個(gè)主峰，峰位置分別在熒光強(qiáng)度100和200處，且第2個(gè)峰強(qiáng)度為第1個(gè)峰強(qiáng)度的2倍，為四倍體峰，說(shuō)明其為二、四混倍體，而且以4x細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)（圖1-B），其中2x細(xì)胞數(shù)1199個(gè)，占比39.1%，4x細(xì)胞數(shù)量1867個(gè)，4x細(xì)胞占60.9%。

2.2形態(tài)特征比較

2.2.1葉片形態(tài)特征比較葉片形狀如圖2所示，混倍體沃柑葉片為卵圓形，葉尖短尖，葉片顏色也更加濃綠；二倍體沃柑葉片為闊披針形，葉尖漸尖?；毂扼w沃柑的葉片長(zhǎng)度為101.68 mm、寬度54.29 mm、周長(zhǎng)266.02 mm及葉片面積為3 598.92 mm2，與二倍體沃柑相比分別顯著增加14.75%、31.01%、19.38%和46.09%，而葉形指數(shù)為1.87，與二倍體沃柑相比顯著減少12.61%（表1）。可見(jiàn)隨著倍性的增加，葉片變長(zhǎng)、變寬，葉形指數(shù)變小。

2.2.2花性狀分析混倍體和二倍體沃柑的花均為兩性花，二者的花瓣數(shù)、花瓣顏色、雄蕊數(shù)、花絲離合狀態(tài)以及花柱狀態(tài)均相同（圖3），混倍體沃柑花瓣長(zhǎng)度為14.48 mm，寬度為8.22 mm，與二倍體沃柑相比，分別顯著增加34.32%和49.18%（表2），混倍體沃柑表現(xiàn)出花朵較大的特性。

2.2.3種子性狀混倍體和二倍體沃柑的種子呈棒

形或卵圓形，均為單胚（圖4），混倍體的種子單粒質(zhì)量0.17 g、橫徑6.39 mm、縱徑14.64 mm，均顯著大于二倍體，分別比二倍體增加30.77%、8.12%和26.64%（表3）。

2.2.4果實(shí)形態(tài)比較如圖5所示，混體倍沃柑及二倍體沃柑均表現(xiàn)為果皮橙紅色，果肉橙黃色，混體倍果實(shí)表面光滑度較二倍體稍差，混倍體單果質(zhì)量206.16 g，果實(shí)縱徑63.37 mm，橫徑77.90 mm，果形指數(shù)0.81，果皮厚度4.26 mm，果實(shí)硬度6.47 kg·cm-2，單果種子數(shù)8.2粒?；毂扼w的單果質(zhì)量、果實(shí)縱徑、果實(shí)橫徑、果形指數(shù)、果皮厚度、果實(shí)硬度指標(biāo)均顯著大于二倍體，分別增加29.67%、13.38%、8.57%、3.85%、38.31%和16.37%，而單果種子數(shù)顯著減少61.68%（表4），可以看出混倍體果實(shí)較二倍體顯著增大，形狀變圓，果皮變厚，果實(shí)變硬，種子數(shù)變少。

2.3果實(shí)品質(zhì)分析

由表5可知，混倍體沃柑可溶性固形物含量（w，后同）為15.10%，可滴定酸含量為0.58%，與二倍體沃柑相比無(wú)顯著差異，可食率為69.84%，與二倍體相比顯著降低，減少6.15個(gè)百分點(diǎn)，這可能與有較厚的果皮有關(guān)；混倍體沃柑出汁率高，表現(xiàn)出水分更足，但與二倍體沃柑差異不顯著；維生素C含量（ρ）為23.12 mg·100 mL-1，顯著高于二倍體沃柑的16.55 mg·100 mL-1，增加率高達(dá)39.70%，部分營(yíng)養(yǎng)更加豐富。

2.4葉片顯微解剖結(jié)構(gòu)觀測(cè)

如圖6所示，混倍體與二倍體沃柑葉片橫切面組織結(jié)構(gòu)的細(xì)胞排列順序基本相同，上、下表皮組織由1層圓形或近圓形的細(xì)胞組成，排列整齊，柵欄組織和海綿組織分化明顯，柵欄組織靠近上表皮，由2～3層緊密排布的長(zhǎng)條形細(xì)胞組成，海綿組織靠近下表皮，形狀短圓形，排列不整齊且較為松散。由表6可知，混倍體的葉片厚度310.96μm、下表皮厚度12.26μm、柵欄組織厚度72.89μm和海綿組織厚度227.94μm，均顯著高于二倍體，分別增加19.75%、10.10%、9.38%和43.92%，上表皮厚度也增厚，但未達(dá)到顯著差異。

掃描電鏡觀察氣孔特征顯示（圖7，表7），混倍體的葉片氣孔長(zhǎng)度為7.35μm，寬度為3.33μm，氣孔密度為520.40個(gè)·mm-2，與二倍體相比，氣孔長(zhǎng)度和氣孔密度分別減少7.36%和15.76%，差異顯著，而氣孔寬度較二倍體顯著增加5.09%。

3討論

倍性鑒定是果樹(shù)倍性育種的重要環(huán)節(jié)，目前，倍性鑒定的方法有很多，一般可以通過(guò)形態(tài)特征、細(xì)胞學(xué)、染色體計(jì)數(shù)法、分子標(biāo)記法、流式細(xì)胞儀法等其中一種或多種方法進(jìn)行鑒定[18]。Galbraith等[19]首次報(bào)道了利用流式細(xì)胞儀快速、準(zhǔn)確地測(cè)定植物倍性水平，經(jīng)過(guò)多年的不斷發(fā)展，現(xiàn)如今已被廣泛應(yīng)用并已逐步替代了傳統(tǒng)的染色體計(jì)數(shù)法[20]。研究人員利用該方法對(duì)蘋(píng)果、柑橘[21]、棗、柿、葡萄、獼猴桃、梨[22]等果樹(shù)資源鑒定出不同的倍性材料。對(duì)于混倍體植株，流式細(xì)胞儀可以快速檢測(cè)出不同倍體細(xì)胞類(lèi)型和各種細(xì)胞類(lèi)型所占的比例。在本研究中，筆者從二倍體沃柑中發(fā)現(xiàn)葉片增大、果實(shí)變大、種子數(shù)減少等性狀的變異材料，初步認(rèn)為具有多倍性性狀，再通過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)其倍性進(jìn)行確認(rèn)，結(jié)果變異材料為二、四混體倍，且二倍體與四倍體細(xì)胞比例約為4∶6，與親本沃柑的倍性存在差異。因此，通過(guò)形態(tài)學(xué)鑒定方法初選出多倍體變異植株后，再進(jìn)一步利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行倍性檢測(cè)是一種快速且有效的方法。

混倍體植物常表現(xiàn)出異于正常倍性植株的特性，出現(xiàn)一些器官“巨大化”，主要表現(xiàn)在葉片、花朵、果實(shí)、種子以及氣孔等特征上。吳改娥[23]分析了二倍體與四倍體棗樹(shù)葉片形態(tài)，發(fā)現(xiàn)四倍體棗樹(shù)的葉片比二倍體棗樹(shù)的葉片更大更寬。汪衛(wèi)星等[24]研究發(fā)現(xiàn)三倍體枇杷的樹(shù)體干周、枝條、葉片和花器官性狀均顯著大于二倍體。四倍體雜交鵝掌楸與二倍體相比形態(tài)上發(fā)生明顯變化，包括葉片變大變厚、葉色加深、氣孔變大等[25]。在本研究中，隨著沃柑倍性增加，出現(xiàn)植株葉片顯著變大增厚、葉形指數(shù)減小、葉色加深、花朵增大、果實(shí)增大、種子減少等變化特點(diǎn)，與上述研究有類(lèi)似結(jié)果，可作為前期倍性鑒定的重要篩選依據(jù)，在大規(guī)模倍性鑒定中能較大程度減少育種人員的工作量。

多倍體植物的表型變異在一定程度上反映了植物對(duì)環(huán)境的生理適應(yīng)性，通過(guò)改變組織結(jié)構(gòu)來(lái)提高植株的抗病抗逆性，其中，植物葉片組織結(jié)構(gòu)是種質(zhì)資源評(píng)價(jià)的重要依據(jù)之一[26]。多倍體顯微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，巨大化特征表現(xiàn)突出[27]，二、四混倍體芽變品種金冠酥的葉片、莖細(xì)胞比二倍體母本酥梨大[28]。潰瘍病作為沃柑最主要的病害，氣孔作為病原菌侵入的重要途徑，其密度、面積與柑橘對(duì)潰瘍病的抗性呈顯著負(fù)相關(guān)，葉片厚度及葉片柵欄組織、海綿組織、上下表皮厚度等在內(nèi)的多項(xiàng)形態(tài)學(xué)指標(biāo)均與柑橘抗?jié)儾∧芰Τ蕵O顯著正相關(guān)[29]。本研究結(jié)果表明，沃柑混倍體的葉片厚度、葉片上下表皮、柵欄組織和海綿組織的厚度均大于二倍體，氣孔密度顯著減小，意味著有較強(qiáng)的抗逆性，且在實(shí)際生產(chǎn)中，筆者也觀察到田間混倍體植株對(duì)潰瘍病的抗性明顯強(qiáng)于二倍體，這可能與混倍體葉片結(jié)構(gòu)的改變有關(guān)，混倍體的抗病性將作為下一步的研究目標(biāo)。

植株果實(shí)營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的優(yōu)劣是衡量其價(jià)值的重要指標(biāo)，植物多倍體不僅改變了植株的形態(tài)，而且改變了果實(shí)的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)。黃金艷等[30]對(duì)不同倍性甜瓜果實(shí)品質(zhì)進(jìn)行比較研究，發(fā)現(xiàn)四倍體維生素C含量高于三倍體和二倍體，可溶性蛋白和可溶性糖含量具有相同的趨勢(shì)，依次為三倍體＞四倍體＞二倍體。亦有研究學(xué)者發(fā)現(xiàn)四倍體茄子的果實(shí)維生素C、蛋白質(zhì)、脂肪含量較二倍體品種分別增加了74.38%、34.22%和31.30%[31]；維生素C是一種具有多功能的代謝物質(zhì)，人體不能自身合成，必須從食物中獲取，因此維生素C含量已成為衡量果實(shí)品質(zhì)和影響人們選購(gòu)果品的重要指標(biāo)。人類(lèi)日常膳食攝入的維生素C也主要來(lái)源柑橘類(lèi)水果[32]，在本研究中，混倍體沃柑的維生素C含量達(dá)到23.12 mg·100 mL-1，顯著高于二倍體沃柑的16.55 mg·100 mL-1，增加率高達(dá)39.70%，表現(xiàn)出營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)更加豐富的特征。

4 結(jié)論

混倍體與二倍體沃柑在葉、花、種子、果實(shí)形態(tài)、果實(shí)品質(zhì)以及葉片顯微結(jié)構(gòu)等方面存在較大差異，具體表現(xiàn)在混倍體沃柑葉片變大變厚，花瓣長(zhǎng)度和寬度增大，種子單粒質(zhì)量、橫徑和縱徑增加而單果種子數(shù)減少，葉片、上表皮、下表皮、柵欄組織、海綿組織厚度增厚，氣孔長(zhǎng)度和密度減小，氣孔寬度增加，單果質(zhì)量、果實(shí)橫縱徑、維生素C含量增加。該混倍體既可作為單胚型少核大果沃柑的新類(lèi)型加以利用，也可作為新的種質(zhì)資源進(jìn)一步用于育種工作。

參考文獻(xiàn)References：

[1]袁東亞.以12個(gè)柑橘四倍體為父本倍性雜交培育三倍體[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2018.

YUAN Dongya.Production of citrus triploid plants by interploid crossing with twelve tetraploids as pollen parents[D].Wuhan：Huazhong Agricultural University，2018.

[2]黃其椿，劉吉敏，何新華，黃克，冉志林，吳榮倫，羅捷，李初英.晚熟雜柑‘沃柑’在廣西武鳴的栽培表現(xiàn)初報(bào)[J].中國(guó)南方果樹(shù)，2014，43（3）：86-88.

HUANG Qichun，LIU Jimin，HE Xinhua，HUANG Ke，RAN Zhilin，WU Ronglun，LUO Jie，LI Chuying.Preliminary study of performance of late maturing hybrid citrus‘Orah’during thecultivation in Wuming of Guangxi[J].South China Fruits，2014，43（3）：86-88.

[3]趙洪濤，陳東奎，陳香玲，歐智濤，黃其椿，張?zhí)m，李果果，劉要鑫，葉云峰，付崗.沃柑潰瘍病病原菌分離鑒定及防治藥劑篩選[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2019，50（12）：2703-2712.

ZHAO Hongtao，CHEN Dongkui，CHEN Xiangling，OU Zhi-tao，HUANG Qichun，ZHANG Lan，LI Guoguo，LIU Yaoxin，YE Yunfeng，F(xiàn)U Gang.Pathogen identification and bactericide screening of Orah citrus canker[J].Journal of Southern Agricul-ture，2019，50（12）：2703-2712.

[4]黎月娟.桑樹(shù)種質(zhì)資源倍性測(cè)定及誘導(dǎo)研究[D].南寧：廣西大學(xué)，2019.

LI Yuejuan.Ploidy determination and induction study of mull-berry germplasm resources[D].Nanning：Guangxi University，2019.

[5]朱雪云，陳利萍.植物嵌合體的研究與應(yīng)用[J].核農(nóng)學(xué)報(bào)，2010，24（6）：1185-1191.

ZHU Xueyun，CHEN Liping.Studies and applications of plant chimeras[J].Journal of Nuclear Agricultural Sciences，2010，24（6）：1185-1191.

[6]劉穎，馮春芳，于洪長(zhǎng)，王玖瑞，劉孟軍.‘冬棗’天然二、四混倍體的發(fā)現(xiàn)與評(píng)價(jià)[J].園藝學(xué)報(bào)，2016，43（5）：966-974.

LIU Ying，F(xiàn)ENG Chunfang，YU Hongchang，WANG Jiurui，LIU Mengjun.Discovery and evaluation of natural mixoploid（2x+4x）variants in Ziziphus jujuba Mill.‘Dongzao’[J].Acta Horticulturae Sinica，2016，43（5）：966-974.

[7]梁明芝.桑樹(shù)人工誘導(dǎo)混倍體品種‘魯誘1號(hào)’選育[D].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005.

LIANG Mingzhi.Breeding of artificial-induced mixoploid mul-berry variety‘Luyou 1’[D].Beijing：China Agricultural Univer-sity，2005.

[8]陳立松，萬(wàn)蜀淵.1個(gè)新的椪柑突變體：‘桂林良豐’無(wú)核椪柑的細(xì)胞學(xué)鑒定[J].武漢植物學(xué)研究，1996，14（1）：1-5.

CHEN Lisong，WAN Shuyuan.Cytological identifications on‘Guilin Liangfeng’seedless ponkan（Citrus reticulata Blanco）：A new type mutant of Ponkan[J].Journal of Wuhan Botanical Research，1996，14（1）：1-5.

[9]陳立松，萬(wàn)蜀淵.椪柑混倍體的形態(tài)學(xué)和細(xì)胞學(xué)特性研究[J].武漢植物學(xué)研究，1998，16（1）：89-92.

CHEN Lisong，WAN Shuyuan.Studies on the morphological and cytological characteristics of Ponkan（Citrus reticulata Blan-co）mixoploid[J].Journal of Wuhan Botanical Research，1998，16（1）：89-92.

[10]唐志鵬，高興，秦榮耀，孫寧?kù)o，藍(lán)惠國(guó)，韋日機(jī)，鄧光宙，劉冰浩.金柑新品種‘脆蜜金柑’的選育[J].果樹(shù)學(xué)報(bào)，2018，35（1）：131-134.

TANG Zhipeng，GAO Xing，QIN Rongyao，SUN Ningjing，LAN Huiguo，WEI Riji，DENG Guangzhou，LIU Binghao.A new Fortunella crassifiolia cultivar‘Cuimi Kumquat’[J].Jour-nal of Fruit Science，2018，35（1）：131-134.

[11]崔璐璐，黨江波，韓國(guó)輝，郭啟高，向素瓊，梁國(guó)魯.梨橙有性多倍體發(fā)掘及遺傳鑒定[J].植物遺傳資源學(xué)報(bào)，2021，22（4）：1000-1008.

CUI Lulu，DANG Jiangbo，HAN Guohui，GUO Qigao，XIANG Suqiong，LIANG Guolu.Exploitation and genetic characteriza-tion of sexual polyploids from Licheng[J].Journal of Plant Ge-netic Resources，2021，22（4）：1000-1008.

[12]解凱東，王惠芹，王曉培，梁武軍，謝宗周，伊華林，鄧秀新，GROSSER J W，郭文武.單胚性二倍體為母本與異源四倍體雜交大規(guī)模創(chuàng)制柑橘三倍體[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，46（21）：4550-4557.

XIE Kaidong，WANG Huiqin，WANG Xiaopei，LIANG Wujun，XIE Zongzhou，YI Hualin，DENG Xiuxin，GROSSER J W，GUO Wenwu.Extensive citrus triploid breeding by crossing monoembryonic diploid females with allotetraploid male par-ents[J].Scientia Agricultura Sinica，2013，46（21）：4550-4557.

[13]江東.柑橘種質(zhì)資源描述規(guī)范和數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2006.

JIANG Dong.Descriptors and data standard for citrus（Citrus spp.）[M].Beijing：China Agriculture Press，2006.

[14]國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局.水果、蔬菜制品可滴定酸度的測(cè)定：GB/T 12293—1990[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，1990.

State Bureau of Quality and Technical Supervision of the Peo-ple’s Republic of China.Fruit and vegetable products-Determi-nation of titratable acidity：GB/T 12293—1990[S].Beijing：Stan-dards Press of China，1990.

[15]中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中抗壞血酸的測(cè)定：GB 5009.86—2016[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017.

National Health and Family Planning Commission of the Peo-ple’s Republic of China.National Food Safety Standard-Deter-mination of ascorbic acid in food：GB 5009.86—2016[S].Bei-jing：Standards Press of China，2017.

[16]韋婉羚，黃珍玲，陳會(huì)鮮，楊海霞，蘭秀，梁振華，李恒銳.木薯二倍體及其同源四倍體葉片形態(tài)、生理及抗螨特征比較[J].核農(nóng)學(xué)報(bào)，2022，36（11）：2115-2123.

WEIWanling，HUANG Zhenling，CHEN Huixian，YANG Haixia，LAN Xiu，LIANG Zhenhua，LI Hengrui.Comparison of mor-phological，physiological and mite resistance characteritics of cassava diploid and its autotetraploid leaves[J].Journal of Nucle-ar Agricultural Sciences，2022，36（11）：2115-2123.

[17]李潤(rùn)唐，張映南，田大倫.柑橘類(lèi)植物葉片的氣孔研究[J].果樹(shù)學(xué)報(bào)，2004，21（5）：419-424.

LI Runtang，ZHANG Yingnan，TIAN Dalun.Studies on the sto-mata of citrus plant leaves[J].Journal of Fruit Science，2004，21（5）：419-424.

[18]陳敏敏，張永春，蔡友銘，楊柳燕，聶功平.利用流式細(xì)胞術(shù)快速鑒定61份百合品種倍性[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2020，36（6）：13-17.

CHEN Minmin，ZHANG Yongchun，CAI Youming，YANG Liu-yan，NIE Gongping.Ploidy identification of 61 lily cultivars byflow cytometry[J].Acta Agriculturae Shanghai，2020，36（6）：13-17.

[19]GALBRAITH D W，HARKINS K R，MADDOX J M，AYRES N M，SHARMA D P，F(xiàn)IROOZABADY E.Rapid flow cytomet-ric analysis of the cell cycle in intact plant tissues[J].Science，1983，220（4601）：1049-1051.

[20]逄洪波，高秋，李玥瑩，馬純艷，劉宏鑫，楊成瑤，呂瑞雪.利用流式細(xì)胞儀測(cè)定鬼針草基因組大小[J].基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2016，35（7）：1800-1804.

PANG Hongbo，GAO Qiu，LI Yueying，MA Chunyan，LIU Hon-gxin，YANG Chengyao，LüRuixue.Genome size estimation of Bidens bipinnata L.by using flow cytometry[J].Genomics and Applied Biology，2016，35（7）：1800-1804.

[21]周銳，解凱東，王偉，彭珺，謝善鵬，胡益波，伍小萌，郭文武.依據(jù)多倍體形態(tài)特征快速高效發(fā)掘柑橘四倍體[J].園藝學(xué)報(bào)，2020，47（12）：2451-2458.

ZHOU Rui，XIE Kaidong，WANG Wei，PENG Jun，XIE Shan-peng，HU Yibo，WU Xiaomeng，GUO Wenwu.Efficient identifi-cation of tetraploid plants from seedling populations of apomic-tic citrus genotypes based on morphological characteristics[J].Acta Horticulturae Sinica，2020，47（12）：2451-2458.

[22]齊丹，田路明，董星光，張瑩，霍宏亮，徐家玉，劉超，張小雙，詹俊宇，張思?jí)簦苡穹?梨多倍體種質(zhì)資源的鑒定[J].中國(guó)果樹(shù)，2023（6）：10-15.

QI Dan，TIAN Luming，DONG Xingguang，ZHANG Ying，HUO Hongliang，XU Jiayu，LIU Chao，ZHANG Xiaoshuang，ZHAN Junyu，ZHANG Simeng，CAO Yufen.Identification of pear polyploid germplasm resources[J].China Fruits，2023（6）：10-15.

[23]吳改娥.二倍體和四倍體棗的比較研究[D].保定：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011.

WU Gaie.Comparative study on diploid and autotetraploid Chinese jujube[D].Baoding：Agricultural University of Hebei，2011.

[24]汪衛(wèi)星，李曄，李曉林，向素瓊，郭啟高，何橋，梁國(guó)魯.天然三倍體枇杷與其二倍體植株的形態(tài)學(xué)比較[J].果樹(shù)學(xué)報(bào)，2011，28（6）：1090-1092.

WANG Weixing，LI Ye，LI Xiaolin，XIANG Suqiong，GUO Qigao，HE Qiao，LIANG Guolu.Morphological comparison be-tween natural triploids and diploids in loquat[J].Journal of Fruit Science，2011，28（6）：1090-1092.

[25]CHEN T T，SHENG Y，HAO Z D，LONG X F，F(xiàn)U F F，LIU Y，TANG Z H，ALI A，PENG Y，LIU Y，LU L，HU X Y，SHI J S，CHEN J H.Transcriptome and proteome analysis suggest en-hanced photosynthesis in tetraploid Liriodendron sino-america-num[J].Tree Physiology，2021，41（10）：1953-1971.

[26]陳雪峰，景晨娟，趙習(xí)平，武曉紅.植物葉片組織結(jié)構(gòu)在抗逆研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J].河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，22（3）：50-53.

CHEN Xuefeng，JING Chenjuan，ZHAO Xiping，WU Xiao-hong.Advances in application of plant leaf tissue structure in the research of stress tolerance[J].Journal of Hebei Agricultural Sciences，2018，22（3）：50-53.

[27]崔華蕾，郭歡歡，楊麗曉，馬小欣，李探，陳彩霞，梁海永.二倍體及多倍體白榆葉片形態(tài)與光合特性分析[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2023（3）：68-72.

CUI Hualei，GUO Huanhuan，YANG Lixiao，MA Xiaoxin，LITan，CHEN Caixia，LIANG Haiyong.Leaf morphology and pho-tosynthetic characteristics analysis of diploid and polyploid Ul-mus pumila[J].Heilongjiang Agricultural Sciences，2023（3）：68-72.

[28]鄧舒，張春芬，肖蓉，李倩，李全，曹秋芬.‘酥梨’多倍體芽變新品種‘金冠酥’細(xì)胞顯微結(jié)構(gòu)觀察[J].分子植物育種，2023，21（21）：7171-7177.

DENG Shu，ZHANG Chunfen，XIAO Rong，LI Qian，LI Quan，CAO Qiufen.Anatomical structure of‘Jinguansu’pear，a new polyploid mutant cultivar of‘Suli’[J].Molecular Plant Breed-ing，2023，21（21）：7171-7177.

[29]潘貞珍，黃運(yùn)鵬，黃桂香，楊翠紅，何新華.3個(gè)柑橘品種葉片結(jié)構(gòu)和生化物質(zhì)與柑橘潰瘍病抗性的相關(guān)性研究[J].中國(guó)果樹(shù)，2020（4）：31-36.

PAN Zhenzhen，HUANG Yunpeng，HUANG Guixiang，YANG Cuihong，HE Xinhua.Correlation research of leaf structure and biochemical substances of three varieties of citrus with theresis-tance to citrus canker[J].China Fruits，2020（4）：31-36.

[30]黃金艷，王紅梅，覃斯華，李文信，何毅，李天艷，洪日新，樊學(xué)軍，李鳳梅.不同倍性甜瓜果實(shí)品質(zhì)比較研究[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2011，27（13）：238-241.

HUANG Jinyan，WANG Hongmei，QIN Sihua，LI Wenxin，HE Yi，LI Tianyan，HONG Rixin，F(xiàn)AN Xuejun，LI Fengmei.Com-parison of fruit quality in different ploidy melon[J].Chinese Ag-ricultural Science Bulletin，2011，27（13）：238-241.

[31]李樹(shù)賢，吳志娟，楊志剛，李明珠.同源四倍體茄子品種新茄一號(hào)的選育[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2002，35（6）：686-689.

LI Shuxian，WU Zhijuan，YANG Zhigang，LI Mingzhu.The breeding of autotetraploid eggplant cultivar Xinqie No.1[J].Sci-entia Agricultura Sinica，2002，35（6）：686-689.

[32]BORGHI S M，PAVANELLI W R.Antioxidant compounds and health benefits of citrus fruits[J].Antioxidants，2023，12（8）：1526.