飼料添加劑地頂孢霉培養(yǎng)物質(zhì)量穩(wěn)定性探究

摘要" 為探討飼料添加劑地頂孢霉培養(yǎng)物質(zhì)量的穩(wěn)定性，本研究對(duì)其進(jìn)行溫度（60和40 ℃）、濕度（25 ℃，90%±5%和75%±5%）和光照（4 500±500）lx影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)和長期試驗(yàn)，測定其水分、粗蛋白和腺苷含量，及微生物指標(biāo)并確定其有效期。結(jié)果表明，高濕放置10 d，樣品水分明顯上升，高溫、高濕及光照對(duì)樣品粗蛋白含量無明顯影響，高溫、高濕和強(qiáng)光照射下放置10 d，樣品腺苷含量下降；加速試驗(yàn)表明，在溫度（40±2） ℃、濕度65%±5%條件下貯存6個(gè)月，樣品的水分、蛋白質(zhì)含量及微生物指標(biāo)無明顯變化；腺苷含量有小幅下降；長期試驗(yàn)表明，在溫度（25±2） ℃、濕度60%±10%條件下貯存24個(gè)月，樣品的水分、蛋白質(zhì)含量及微生物指標(biāo)均無明顯變化，而腺苷含量存在小幅下降，但仍符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。綜上，綜合考慮現(xiàn)實(shí)條件，地頂孢霉培養(yǎng)物包裝材料應(yīng)選擇避光材料，貯存條件建議在25 ℃以下，避光、密封于干燥處，運(yùn)輸過程則避免高溫、高濕和強(qiáng)光直射，產(chǎn)品有效期12個(gè)月。

關(guān)鍵詞" 地頂孢霉培養(yǎng)物；質(zhì)量指標(biāo)；微生物指標(biāo)；穩(wěn)定性

中圖分類號(hào)" S816.7 """文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼" A """文章編號(hào)" 1007-7731（2024）24-0037-05

DOI號(hào)" 10.16377/j.cnki.issn1007-7731.2024.24.009

Explore on quality stability of feed additive Acremonium terricola culture

XU Juanjuan YUAN Hai TONG Shouli ZHOU Qun ZHOU Juan XU Ziao LI Xiaoxiang

（Hefei Macro Biological Engineering Co.， Ltd.， Hefei 231200， China）

Abstract" To investigate the stability of feed additive Acreosporium terricola culture， temperature （60 and 40 ℃）， humidity （25 ℃， 90%±5% and 75%±5%） and light （4 500±500） lx influence factor tests， accelerated tests and long-term tests were carried out to determine the content of water， crude protein and adenosine， and microbial content and determine its validity period.The results showed that after 10 days of high humidity， the water content of the sample increased significantly， while high temperature， high humidity and light had no significant change on the crude protein content of the sample， and the adenosine content of the sample decreased after 10 days of high temperature， high humidity， and strong light. In the accelerated test， the samples were stored for 6 months at temperature （40±2） ℃ and humidity 65%±5%， and there was no significant change in water content， protein content， and microbial index. Adenosine content decreased slightly. In the long-term test， when the samples were stored at temperature （25±2） ℃ and humidity 60%±10% for 24 months， the water content， protein content and microbial indexes of the samples showed no significant changes， while the adenosine content decreased slightly， but it still met the quality standard requirements To sum up， the packaging materials of Acremonium terricola culture should be selected to avoid light， storage conditions were recommended below 25 ℃， avoid light， sealed in a dry place， and avoid high temperature， high humidity and direct light during transportation， theproduct was valid for 12 months.

Keywords" Acremonium terricola culture; quality index; microbiological index; stability

飼料添加劑地頂孢霉培養(yǎng)物（Acremonium terricola culture，ATC）是從古尼蟲草中分離的地頂孢霉菌經(jīng)人工發(fā)酵所得。古尼蟲草是稀有的蟲草類藥材，含有同冬蟲夏草相似的藥理成分，具有提高睡眠質(zhì)量、調(diào)節(jié)免疫力、增強(qiáng)記憶力、鎮(zhèn)靜和止痛等作用[1-2]。古尼蟲草中存在較多重要的次級(jí)代謝產(chǎn)物，如蟲草酸、蟲草素、蟲草多糖和抗紫外線成分等[3]。地頂孢霉培養(yǎng)物作為一種飼料添加劑，其含有麥角甾醇、腺苷、蟲草素、蟲草酸和多糖氨基酸等與古尼蟲草相似的功能性成分，可有效改善畜禽免疫性能、健康狀況、提高生長性能以及改善畜禽乳制品品質(zhì)[4-5]。因生產(chǎn)工藝存在差異，市場上各類地頂孢霉培養(yǎng)物產(chǎn)品的質(zhì)量指標(biāo)均有差異，規(guī)定的質(zhì)量指標(biāo)成分包括水分、粗蛋白和腺苷等。其中，腺苷全稱腺嘌呤核苷，是一種核苷，是核酸的基本結(jié)構(gòu)單位，廣泛存在于動(dòng)物的肝臟及冬蟲夏草等生物體中，是蟲草類產(chǎn)品的主要活性成分之一[6-7]，具有參與人體代謝和生理調(diào)節(jié)等功能[8-9]；粗蛋白是地頂孢霉培養(yǎng)物中菌絲體的主要成分，也是動(dòng)物所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)之一。

飼料添加劑的穩(wěn)定性是指飼料添加劑保持其物理、化學(xué)、生物學(xué)和微生物學(xué)性質(zhì)的能力。對(duì)飼料添加劑進(jìn)行穩(wěn)定性考察，可為其生產(chǎn)、包裝、貯存、運(yùn)輸條件和有效期的確定提供科學(xué)依據(jù)，以確保其安全有效。孫冰清等[10]通過高溫、高濕和光照試驗(yàn)驗(yàn)證了飼料添加劑溶菌酶二聚體的穩(wěn)定性，初步確定其有效期為12個(gè)月。

本文研究飼料添加劑地頂孢霉培養(yǎng)物在不同溫度、濕度和光照條件下各質(zhì)量指標(biāo)隨時(shí)間變化的趨勢，并通過試驗(yàn)確定其有效期，為優(yōu)化該產(chǎn)品的包裝、貯存和運(yùn)輸條件提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1" 供試樣品 飼料添加劑地頂孢霉培養(yǎng)物擬上市批次20221018、20221019和20221020。

1.1.2 試劑 0.1 mg/mL腺苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液、0.05 mg/mL腺苷標(biāo)準(zhǔn)溶液和0.1 mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（Sigma），混合催化劑、20%硼酸吸收液、40%氫氧化鈉溶液和硫酸（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），乙腈（Tedia），超純水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司），氯化鈉（天津市永大化學(xué)試劑有限公司），高鹽察氏瓊脂培養(yǎng)基（青島海波生物技術(shù)有限公司）。

1.1.3 試驗(yàn)儀器 HP1100型高效液相色譜儀（Agilent），VGT-1990QTD型超聲波提取儀（廣東固特超聲股份有限公司），K9840型凱氏定氮儀（海能未來技術(shù)集團(tuán)股份有限公司），DHG-9240（A）型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海飛越實(shí)驗(yàn)儀器有限公司），80-3型電動(dòng)離心機(jī)（常州普天儀器制造有限公司），F(xiàn)A2004型分析天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 影響因素試驗(yàn) 取同一供試樣品分為3份，每份樣品重復(fù)如下操作。將供試品置于培養(yǎng)皿中，攤成≤5 mm厚的薄層，分別放置于高溫（60和40 ℃）、高濕（25 ℃，90%±5%、75%±5%）和光照（4 500±500）lx條件下，試驗(yàn)開始時(shí)及試驗(yàn)第5和10天測定供試品的相關(guān)質(zhì)量指標(biāo)。

1.2.2 加速試驗(yàn) 選擇3個(gè)批次擬上市產(chǎn)品，每個(gè)批次分為3份，重復(fù)如下操作。在溫度（40±2）℃、濕度65%±5%調(diào)溫調(diào)濕箱內(nèi)進(jìn)行6個(gè)月試驗(yàn)。試驗(yàn)開始時(shí)和第1、2、3和6個(gè)月取樣進(jìn)行理化指標(biāo)的檢測，同時(shí)試驗(yàn)開始時(shí)和6個(gè)月取樣進(jìn)行微生物指標(biāo)檢測。

1.2.3 長期試驗(yàn) 選擇3個(gè)批次擬上市產(chǎn)品，每個(gè)批次分為3份，重復(fù)如下操作。在溫度（25±2）℃、濕度60%±10%條件下進(jìn)行24個(gè)月試驗(yàn)，在第一年每3個(gè)月取樣1次，第二年每6個(gè)月取樣1次。對(duì)樣品進(jìn)行理化指標(biāo)與微生物指標(biāo)檢測。

1.3 測定項(xiàng)目及方法

1.3.1 水分含量測定 參考GB/T 6435—2014《飼料中水分的測定》標(biāo)準(zhǔn)測定樣品中的水分含量。樣品在105 ℃烘箱中干燥4 h，稱重，根據(jù)干燥前后的重量，計(jì)算水分含量。

1.3.2 粗蛋白含量測定 參考GB/T 6432—2018《飼料中粗蛋白的測定 凱氏定氮法》標(biāo)準(zhǔn)測定樣品的粗蛋白含量。樣品經(jīng)消化、蒸餾和硼酸吸收，用鹽酸滴定，根據(jù)消耗的鹽酸的體積計(jì)算粗蛋白含量。

1.3.3 腺苷含量測定 參考NY/T 2116—2012《蟲草制品中蟲草素和腺苷的測定" 高效液相色譜法》標(biāo)準(zhǔn)和徐娟娟等[11]研究方法，用純凈水超聲提取樣品中的腺苷，用高效液相色譜檢測其含量。

1.3.4 微生物數(shù)量測定 參考GB/T 13092—2006《飼料中霉菌總數(shù)的測定》標(biāo)準(zhǔn)，將樣品用無菌稀釋液稀釋成合適的3個(gè)濃度，分別取1 mL置于高鹽察氏培養(yǎng)基平皿上，在適宜溫度下培養(yǎng)7 d后計(jì)數(shù)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件計(jì)算平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差，并進(jìn)行單因素方差分析，以Duncan’s新復(fù)極差法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同影響因素對(duì)地頂孢霉培養(yǎng)物的影響

2.1.1 水分含量 溫度、濕度和光照對(duì)地頂孢霉培養(yǎng)物含水量的影響結(jié)果如表1所示。樣品在60 和40 ℃中放置5 d，樣品含水量開始明顯下降（Plt;0.05）；在高濕（25 ℃，90%±5%、75%±5%）條件下，隨時(shí)間的增加，樣品含水量明顯上升（Plt;0.05）；在（4 500±500）lx光照條件下，10 d內(nèi)樣品含水量無明顯變化（Pgt;0.05）。說明高溫高濕對(duì)樣品水分影響較大。

2.1.2 粗蛋白含量 由表2可知，供試樣品在高溫、高濕和光照條件下放置10 d，其粗蛋白含量各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）。表明高溫、高濕和光照對(duì)地頂孢霉培養(yǎng)物中粗蛋白含量影響較小。

2.1.3 腺苷含量 由表3可知，與開始相比，供試樣品在60 ℃下放置5 d，其腺苷含量下降12.9%，10 d下降21.3%，各組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）；40 ℃下放置5 d，其腺苷含量下降1.6%，10 d下降13.2%，且第10天與開始時(shí)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）；在高濕環(huán)境下，供試樣品在（90±5）%濕度下放置5 d，其腺苷含量下降0.9%，10 d下降10.0%；（75±5）%濕度下放置10 d，其腺苷含量下降6.7%；供試樣品中在（4 500±500）lx光照條件下放置10 d，其腺苷含量下降26.9%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。由此可知，高溫、高濕和光照對(duì)腺苷含量的影響較大。

2.2 加速試驗(yàn)對(duì)地頂孢霉培養(yǎng)物的影響

由表4可知，在溫度（40±2）℃、濕度65%±5%條件下貯存6個(gè)月，3個(gè)批次供試品的水分、蛋白質(zhì)和腺苷含量均無明顯變化（Pgt;0.05）。由表5可知，供試樣品霉菌總數(shù)符合標(biāo)準(zhǔn)GB 13078—2017《飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》。綜上表明，溫度（40±2）℃、濕度65%±5%條件下的6個(gè)月加速試驗(yàn)對(duì)地頂孢霉培養(yǎng)物的理化指標(biāo)和霉菌總數(shù)無明顯影響。

2.3 長期試驗(yàn)對(duì)地頂孢霉培養(yǎng)物的影響

由表6可知，在溫度（25±2）℃、濕度60%±10%條件下，貯存24個(gè)月，地頂孢霉培養(yǎng)物水分、粗蛋白含量變化較小，腺苷含量有所下降，但均符合Q/MKL 003—2023企業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求（腺苷≥300 mg/kg，粗蛋白≥20%，水分≤10%）；樣品中的霉菌總數(shù)符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。說明試驗(yàn)條件下儲(chǔ)存24個(gè)月對(duì)該培養(yǎng)物理化指標(biāo)和微生物指標(biāo)無明顯影響，但考慮現(xiàn)實(shí)環(huán)境條件，其保質(zhì)期以12個(gè)月為宜。

3 結(jié)論與討論

魏建忠等[12]和孫漢巨等[13]研究表明，飼料中添加地頂孢霉培養(yǎng)物能夠提高仔豬增重，蛋鴨的體重和產(chǎn)蛋率，并改善蛋品質(zhì)。李洋等[14]和Ahn等[15]研究表明，地頂孢霉培養(yǎng)物能夠調(diào)節(jié)奶牛部分瘤胃微生物的菌群數(shù)量，提高奶牛后腸道益生菌數(shù)量及粗飼料的瘤胃降解率，對(duì)提高乳制品質(zhì)量和改善乳制品風(fēng)味有積極影響。作為一種天然、綠色、環(huán)保高效的飼料添加劑[16]，地頂孢霉培養(yǎng)物產(chǎn)品在畜禽養(yǎng)殖上有著廣泛的應(yīng)用前景。探究其穩(wěn)定性可為其生產(chǎn)、包裝、貯存、運(yùn)輸條件和有效期的確定提供科學(xué)依據(jù)，以確保其安全有效，保證產(chǎn)品質(zhì)量。本試驗(yàn)探究了地頂孢霉培養(yǎng)物的影響因素，發(fā)現(xiàn)高溫、高濕對(duì)水分影響較大，而高溫、高濕和光照對(duì)地頂孢霉培養(yǎng)物的粗蛋白含量影響較小，對(duì)腺苷含量有較大影響；加速試驗(yàn)表明，在溫度（40±2）℃、濕度65%±5%條件下培養(yǎng)6個(gè)月對(duì)地頂孢霉培養(yǎng)物的理化指標(biāo)和霉菌總數(shù)無明顯影響。長期試驗(yàn)表明，在溫度（25±2）℃、濕度60%±10%條件下培養(yǎng)24個(gè)月，該產(chǎn)品相關(guān)理化指標(biāo)和霉菌總數(shù)均符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，品質(zhì)較穩(wěn)定。綜上，地頂孢霉培養(yǎng)物生產(chǎn)廠家進(jìn)行包裝時(shí)應(yīng)選擇避光材料，貯存條件建議在室溫25 ℃以下，避光、密封于干燥處，運(yùn)輸過程中則應(yīng)避免高溫、高濕和陽光直射。綜合考慮現(xiàn)實(shí)條件，企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，該產(chǎn)品保質(zhì)期以12個(gè)月為宜。

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（責(zé)任編輯：胡立萍）